牛欄山酒廠清香大曲及酒醅中地衣芽孢桿菌的分離鑒定(文件)
【正文】 用實(shí)驗(yàn)和一系列的生理生化實(shí)驗(yàn)可以基本鑒定地衣芽孢桿菌。 以應(yīng)用到二鍋頭酒的生產(chǎn)中，不會(huì)將酒的香型改變，而且還可以增加酒體的醇厚度。產(chǎn)淀粉酶實(shí)驗(yàn)中，淀粉水解是逐步進(jìn)行的過程，與菌種產(chǎn)生淀粉酶的能力、培養(yǎng)時(shí)間，培養(yǎng)基淀粉含量和pH等均有一定關(guān)系。 5. 總結(jié)與討論鑒定結(jié)果為地衣芽孢桿菌。從地衣芽孢桿菌中提取16S rDNA片段，通過測序獲得16S rDNA序列信息，再與16S rDNA數(shù)據(jù)庫或其他數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較，從而鑒定種類。 地衣芽孢桿菌是醬香大曲中的重要微生物，能夠產(chǎn)生醬香物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)的23個(gè)菌株均是從清香大曲和酒醅中分離得到的，因此我們對(duì)其是否產(chǎn)醬香進(jìn)行確認(rèn)。說明這些菌株產(chǎn)生的類蛋白酶類豐富，使明膠水解迅速。 其余菌株對(duì)酪素水解能力各不相同。 實(shí)驗(yàn)的23個(gè)菌株中，11＃菌株不能水解淀粉，未產(chǎn)生透明圈。 23個(gè)菌株均可以利用檸檬酸鹽，這也與多種芽孢桿菌都可以利用檸檬酸鈉的特征符合。 以1824h的幼齡菌種，接種一環(huán)到上述培養(yǎng)基中，適溫培養(yǎng)35d，觀察指示劑是否由紫色變黃，杜氏管中是否有空氣。培養(yǎng)基配方為：(NH4)2HPO4 1g，MgSO4?7H2O [FS:PAGE]g，KC1 ，糖或醇類10g，蒸餾水1000ml，％溴甲酚紫乙醇溶液20ml，調(diào)節(jié)pH ，分裝試管，每管裝10ml培養(yǎng)基，試管內(nèi)放有杜氏發(fā)酵管，115℃滅菌20min，排凈杜氏管中的空氣。 甘氨酸培養(yǎng)基：甘氨酸5g，葡萄糖10g，NaCl 3g，蒸餾水1000ml，pH 67，分裝50ml到100ml三角瓶中，121℃滅菌20min。本實(shí)驗(yàn)采用三種培養(yǎng)基鑒定地衣芽孢桿菌是否產(chǎn)生醬香物質(zhì)。 培養(yǎng)5d能生長者按生長計(jì)算，否則按不生長計(jì)算，可疑者需重新進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。 細(xì)菌生長的最高、最適、最低溫度，常常是某些細(xì)菌鑒定的特征之一。 根據(jù)鑒定需要，以肉湯培養(yǎng)液配成不同濃度NaCl溶液，如2％、5％、7％、10％等。一般可根據(jù)不同種類的菌株，選擇其適合生長的培養(yǎng)基，在其中加入不同量的NaCl，接種后觀察其生長與否，以判斷其耐鹽性。 培養(yǎng)基：蛋白胨10g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml，調(diào)節(jié)pH ，115℃滅菌20min。培養(yǎng)基：％L酪氨酸，分裝121℃滅菌20min后擺成斜面。 配制該培養(yǎng)基時(shí)，切勿將牛奶和瓊脂混合滅菌，以防牛奶凝固。 牛奶平板的制備：取5g脫脂奶粉加入50ml蒸餾水中（或用50ml脫脂牛奶），將兩溶液分開滅菌。如為陰性，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間。 某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物。30℃培養(yǎng)37d觀察結(jié)果。明膠培養(yǎng)基本身低于20℃凝固，高于24℃則自行液化。 取1824h的
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