【正文】 過(guò)以上反應(yīng)后檢測(cè)，或進(jìn)一步氧化放出 酶電極的制作中，酶的固定是關(guān)鍵，它決定了酶電極的使用壽命，并對(duì)靈敏度，重現(xiàn)性等性能影響很大。 （ 2）組織細(xì)胞中的酶處于天然狀態(tài)和理想環(huán)境下，因而 性質(zhì)最穩(wěn)定 ， 功效最佳 。 組織電極的酶源與測(cè)定對(duì)象一覽表 微生物電極 微生物電極的分子識(shí)別部分是由固定化的微生物構(gòu) 成的。 電位法免疫電極 (potentiometric immune electrode) 生物中的免疫反應(yīng)具有很高的特異性。當(dāng)該電極上的 hCG 抗體與被測(cè)液中的 hCG形成免疫復(fù)合物時(shí)，電極表面的電荷分布發(fā)生變化，改變化通過(guò)電極電位的測(cè)量被檢測(cè)出來(lái)。 ISFET具有以下優(yōu)點(diǎn)：全固體器件、體積小、易于微型化，本身具有高阻抗轉(zhuǎn)換和放大功能等優(yōu)點(diǎn)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 將離子選擇電極與參比電極插入一系列活（濃）度已知的標(biāo)準(zhǔn)溶液中，測(cè)出相應(yīng)的電動(dòng)勢(shì)?？刂迫芤弘x子強(qiáng)度的方法常有 “恒定離子背景法” 和加入 “離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑” 法。標(biāo)準(zhǔn)加入法可在一定程度上避免這種誤差。2?? 式中 r2和 x2分別為 加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后新的活度系數(shù)和游離離子的摩爾分?jǐn)?shù)。 測(cè)定帶來(lái)誤差，電極響應(yīng)時(shí)間增加 消除干擾離子的作用，加掩蔽劑，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)處理。 響應(yīng)時(shí)間 電極浸入溶液后達(dá)到穩(wěn)定的電位所需時(shí)間 （ 1）與待測(cè)離子到達(dá)電極表面的速度有關(guān)。是直接電位分析法的重要誤差來(lái)源之一。特別適用于在線分析和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其在體內(nèi)在線檢測(cè)方面獲得廣泛應(yīng)用。 （ 4）酶 pH傳感器 由于酶是蛋白質(zhì)分子，其作用如同生物催化劑催化復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，酶的專(zhuān)一性及其對(duì)低濃度底物的催化能力，使之可固定在選擇電極上，制得 pH傳感器。早期采用共價(jià)鍵合法和吸附法制備單分子層化學(xué)修飾電極，但電化學(xué)響應(yīng)靈敏度較低，制備復(fù)雜，壽命較短；后研發(fā)出聚合物薄膜化學(xué)修飾電極，該電極電化學(xué)響應(yīng)靈敏，制備簡(jiǎn)單，且由于聚合物薄膜本身提供了固有的物理化學(xué)穩(wěn)定性，使其重現(xiàn)性好，壽命長(zhǎng)。生物電極包括：酶電極 ， 微生物電極 和 電位法免疫電極 。 電位法免疫電極： 該電極是基于抗體與抗原發(fā)生反應(yīng)時(shí)引起膜電極表面的某些物理性質(zhì)發(fā)生改變，進(jìn)而使膜電位或電極電位發(fā)生改變。反應(yīng)結(jié)果用同位素法、化學(xué)熒光法、化學(xué)發(fā)光法或酶標(biāo)顯示，然后用精密的掃描儀或 CCD攝影技術(shù)記錄。所以傳感器的精髓往往都被應(yīng)用于芯片的發(fā)展。其經(jīng)修飾后，穩(wěn)定性，重現(xiàn)性可大為改觀，應(yīng)用范圍擴(kuò)大， 修飾電極 扮演的角色越來(lái)越重要；隨著研究的深入化，分子化，常用電極由于其體積過(guò)大而無(wú)法實(shí)現(xiàn)生物體內(nèi)在線檢測(cè)，因此電極呈現(xiàn) 微型化 的趨勢(shì)；由于酶的專(zhuān)一性，高效性，免疫反應(yīng)的特異性，生物化學(xué)與電化學(xué)相結(jié)合，形成 生物電極 稱(chēng)為新寵。它也是基于能斯特方程。 繪 （△ E/ △ V)V曲線法 △ E/ △ V為 E的變化值與相對(duì)應(yīng)的加入滴定劑的體積的增量的比。即：曲線的極大點(diǎn)是終點(diǎn)，此法的依據(jù)是一級(jí)微商022???VE 商品電位滴定儀有半自動(dòng)、全自動(dòng)兩種。 應(yīng)用范圍廣： 酸堿滴定 指示電極： PH玻璃電極 參比電極：甘汞電極 氧化還原滴定 指示電極： 一般為鉑電極 參比電極：甘汞電極 沉淀滴定 指示電極：根據(jù)不同的沉淀反應(yīng)來(lái)采用不同的指示電極 .如：硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 鹵素 可用銀電極做指示電極 。儀器結(jié)構(gòu)框架如下圖： 四、自動(dòng)電位分析儀簡(jiǎn)介 84 電位滴定法的應(yīng)用和指示電極的選擇 在電位滴定中判斷終點(diǎn)的方法，比之用指示劑指示終點(diǎn)的方法更客觀，許多情況下電位滴定更為準(zhǔn)確。 二級(jí)微商法 Δ2E/ΔV 2二階微商。 一、電位滴定法的原理 二、電位滴定法的結(jié)構(gòu)圖： 三、電位終點(diǎn)的確定 繪制 EV曲線 用加入滴定劑的體積（ V）作橫坐標(biāo)，電動(dòng)勢(shì)讀數(shù)（ E）作縱坐標(biāo)，繪制 EV曲線，曲線上的轉(zhuǎn)折點(diǎn)即為化學(xué)劑量點(diǎn)。多“探頭”陣列組合，聯(lián)合工作，極大的提高了檢測(cè)效率， 生物芯片 稱(chēng)為電極發(fā)展的前沿。芯片技術(shù)是傳感器技術(shù)的發(fā)展。 芯片分析實(shí)際上是傳感器分析的組合。 生物芯片 [10] 生物芯片的實(shí)質(zhì)是在面積不大的基片表面上有序地點(diǎn)陣排列了一系列固定于一定位置的可尋址的識(shí)別分子。 微生物電極： 微生物電極的分子識(shí)別部分是由固定化的微生物構(gòu)成。 化學(xué)修飾電極 [7] 生物電極 [8][9] 將生物化學(xué)與電化學(xué)相結(jié)合可研制出生物電極。 化學(xué)修飾電極 （ CME）是在電極表面接上所需要的化學(xué)基團(tuán)，以使其高選擇性的進(jìn)行所期待的反應(yīng)或使其擁有某種特定的電化學(xué)性質(zhì)。 （ 2）化學(xué)修飾電極 pH傳感器 利用在原電極上接上含有特殊基團(tuán)的聚合物來(lái)提高電極的性能。同時(shí)，存在著體積大，不適應(yīng)微區(qū)，微環(huán)境和生物活體的在線檢測(cè)等不足于是研發(fā)出各種新型的 pH傳感器。 （ 3）與介質(zhì)的離子強(qiáng)度有關(guān) ,含有大量非干擾離子響應(yīng)快 （ 4）共存離子的存在對(duì)響應(yīng)時(shí)間有影響 （ 5）與膜的厚度，表面光潔度等有關(guān)。 被測(cè)離子的濃度 離子選擇電極可以檢測(cè)的線形范圍一般為： 101~106mol/l。值求出測(cè)得的由可由上式求的，因而可為常數(shù)，式中xsEnxxCECSCCCCnSE???????????1/)110()1l g (五、影響測(cè)定的因素 )( nFRT溫度 影響直線的斜率 直線的截距 電極電位、液接電位 測(cè)定過(guò)程應(yīng)保持溫度恒定，提高測(cè)定準(zhǔn)確度 電動(dòng)勢(shì)測(cè)量 測(cè)量的準(zhǔn)確度（亦即測(cè)量的誤差）直接影響測(cè)量的準(zhǔn)確度。是游離（及未絡(luò)合）的式中 1x 然后加入小體積 Vs(約為試樣體積的 1/100) 的待測(cè)離子的標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為 Cs，此時(shí) Cs約為 Cx的 100倍。 離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑 ： 是濃度很大的電解質(zhì)溶液，它對(duì)欲測(cè)離子沒(méi)有干擾，加到標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中后，它們的離子強(qiáng)度都達(dá)到很高二近乎一致，從而使活度系數(shù)基本相同，同時(shí)可調(diào)節(jié)溶液的 PH值，掩蔽干擾離子。在同樣條件下，測(cè)出對(duì)應(yīng)于待測(cè)溶液的 E 值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。 四、測(cè)量離子濃（活）度的方法 離子選擇性電極可以直接用來(lái)測(cè)定離子的活（濃）度。 ISFET是將 MOSFET的金屬柵極代之以離子選擇電極的敏感膜。 其機(jī)制為，固定在膜或電極的表面上的抗原（或抗體），與抗體（或抗原）形成免疫復(fù)合物后，膜中電極表面的物理性質(zhì)，如表面電荷速度，離子在膜中的擴(kuò)散速度發(fā)生了改變，從而引起膜電位或電極電位的改變。 如：將大腸桿菌固定在二氧化碳?xì)怏w敏感電極上實(shí)現(xiàn)了對(duì)賴(lài)氨酸的分析；球菌固定在氨敏電極上實(shí)現(xiàn)了對(duì)精氨酸的檢測(cè)。 （ 4）生物組織一般具有一定的機(jī)械性和膜結(jié)構(gòu)，適于固定，因而組織電極的制作簡(jiǎn)便而經(jīng)濟(jì)。于是有以動(dòng)植