《植物dna分子標(biāo)記》ppt課件(文件)
【正文】 – RFLP標(biāo)記方法與步驟 （ 1） DNA的分離：可用 CTAB法或 SDS法 （ 2）酶切：一般根據(jù)基因組總 DNA的復(fù)雜性選 用限制酶。 ? RAPD方法是在 PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它利用一系列單個(gè)隨機(jī)引物（通常為 10個(gè)核苷酸），對(duì)所研究的基因組 DNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，引物與基因組 DNA某一區(qū)段互補(bǔ)時(shí)，就與其結(jié)合，就可對(duì)引物下游 DNA進(jìn)行合成，即擴(kuò)增。 RAPD結(jié)果 Timothy geic variation (Guo et al. 2022) RAPD的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）不需 DNA探針，設(shè)計(jì)引物不需知道序列信息。 （ 3）技術(shù)簡(jiǎn)單，需要樣品量少，成本低。 RAPD的優(yōu)缺點(diǎn) 缺點(diǎn)： （ 1）顯性標(biāo)記，無法區(qū)別顯性純合體和雜合體。不同個(gè)體相同分子量的片段 不一定同源；一條帶可能包含不同的產(chǎn)物。 AFLP的基本原理 AFLP引物是一種人工合成的單鏈寡核苷酸，一般長(zhǎng)度為 18~20個(gè)核苷酸。 MseI 5 180。以人類基因組為例，平均每 1520kb就存在 1個(gè) STR座位，據(jù)此估計(jì)整個(gè)人類基因組中大約有 50,000100,000個(gè) STR位點(diǎn)。正因?yàn)檎婧松镏懈缓?jiǎn)單重復(fù)序列，而重復(fù)序列兩端往往是相對(duì)保守的限制酶位點(diǎn)，所以通過特異引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增反應(yīng)、瓊脂糖凝膠電泳和放射自顯影，就可檢測(cè)到簡(jiǎn)單重復(fù)序列單位數(shù)不同的 DNA區(qū)域多態(tài)性。 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 ? 實(shí)驗(yàn)操作： ? 準(zhǔn)備探針： RNA提取 → 標(biāo)記 → 熒光染料 ? 雜交反應(yīng) ? 雜交后的處理 ? 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：異種 DNA平行試驗(yàn)； RNA質(zhì)量 檢測(cè)對(duì)照；封閉對(duì)照；規(guī)整化對(duì)照 ? 成像分析 Gene chip 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 ?基因芯片的應(yīng)用： 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究；藥物篩選；臨床診斷；指導(dǎo)用藥；預(yù)防醫(yī)學(xué)研究；環(huán)境保護(hù)；軍事、司法；農(nóng)業(yè)等 ?基因芯片使用應(yīng)注意的問題： 類型的選擇；基因芯片數(shù)量；取材；取材量；結(jié)果分析；多種芯片結(jié)合應(yīng)用 。g 50ng 50ng 50ng 50ng 使用同位素 是 否 是 /否 否 否 探針 DNA短片段 隨即引物 專一引物 專一引物 專一引物 費(fèi)用 中等 低 高 高 高 標(biāo)記系統(tǒng)在應(yīng)用時(shí)的選擇 分子標(biāo)記的應(yīng)用 ? 分子標(biāo)記遺傳圖譜的構(gòu)建和基因定位 ? 分子標(biāo)記對(duì)質(zhì)量性狀的基因定位 ? 數(shù)量性狀基因位點(diǎn)（ QTL）分子標(biāo)記對(duì)定位的研究 ? 分子標(biāo)記輔助選擇育種 ? 比較基因組分析 ? 分子標(biāo)記用于種質(zhì)鑒定的研究 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 概念：采用原位合成或直接點(diǎn)樣的方法將 大量 DNA片段 或 寡核苷酸片段 以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式排列在 硅片、玻璃等介質(zhì) 上形成 微矩陣 ，待檢測(cè)樣品用熒光分子標(biāo)記后，與微矩陣雜交，通過 熒光掃描及計(jì)算機(jī)分析 即可獲得樣品中大量的 基因序列 及 表達(dá)信息 ，以達(dá)到快速、高效、高通量的分析生物信息的目的。 真核生物基因組中散布著大量的微衛(wèi)星 DNA，微衛(wèi)星DNA由更短的重復(fù)單位串聯(lián)而成，重復(fù)長(zhǎng)度一般為2~6bp，一個(gè) SSR總長(zhǎng)度可達(dá)幾十到幾百 bp。 CORE ENZ EXT AFLP的優(yōu)缺點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）少量引物可獲得較多標(biāo)記， 50~150條帶 （ 2）多為顯性標(biāo)記或共顯性標(biāo)記，受環(huán)境影響 小，無復(fù)等位效應(yīng) （ 3）帶型清晰，具高分別率 （ 4）由于用兩種引物經(jīng)兩步
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