《生物化學(xué)核酸化學(xué)》ppt課件(文件)
【正文】 變性的相對(duì)量 溫度 0C 60 80 100 0 Tm Tm Tm 100% Poly d(AT) Poly d(GC) DNA 5．熔解溫度 Tm值的大小與下列因素有關(guān)： （ 1） DNA的均一性 （ 2） GC含量 （ 3）介質(zhì)中的離子強(qiáng)度 5．熔解溫度 （ 1） DNA的均一性： 一般均一性越高， Tm值的變動(dòng)范圍越小。 溫度 0C 70 80 100 90 A 260 大腸桿菌 DNA在不同 KCl濃度下的 Tm 5．熔解溫度 6．摩爾磷吸光系數(shù) 二、核酸的分離 核酸的分離原則： ?盡量簡(jiǎn)化操作 ， 縮短提取過(guò)程； ?減少化學(xué)物質(zhì)對(duì)核酸的降解； ?減少核酸的生物降解； ?減少物理因素對(duì)核酸的降解 。 如果 OD260/230≥，否則樣品中含有雜多糖。 四、核酸測(cè)序的研究方法 Sanger雙脫氧鏈終止法 四、核酸測(cè)序的研究方法 Gilbert化學(xué)斷裂法 四、核酸測(cè)序的研究方法 DNA片段一端用放射性標(biāo)記，用堿基特異性的化學(xué)反應(yīng)裂解 DNA，通過(guò)標(biāo)定末端與斷裂位點(diǎn)之間的距離來(lái)確定堿基的位置。 一、人類基因組計(jì)劃 ?美國(guó)： WASH＆ MIT等研究中心，貢獻(xiàn)率為 54％； ?英國(guó)： SANGER等研究中心，貢獻(xiàn)率為 33％； ?日本： RIKEN等研究中心，貢獻(xiàn)率為 7％； ?法國(guó)： GENOSCOPE研究中心，貢獻(xiàn)率為 ％； ?德國(guó)： IMB等研究中心，貢獻(xiàn)率為 ％； ?中國(guó)：華大基因等，貢獻(xiàn)率為 1％； 一、人類基因組計(jì)劃 ? 2022,12,18日，水稻基因組由中國(guó)領(lǐng)銜完成。 一、人類基因組計(jì)劃 ?破譯基因組的全部遺傳信 。 DNA和 DNA雜交以及 DNA和RNA雜交在核酸技術(shù)中占有十分重要的地位。 ?小 RNA： 1998年發(fā)現(xiàn)一些小 RNA具有調(diào)控DNA分子的功能，這種機(jī)制叫做 RNA干擾（ RNAi） 。 ?反義 RNA技術(shù)目前在植物基因工程和人類疾病治療方面具有廣泛的應(yīng)用。 ?小 RNA和微小 RNA技術(shù)主要應(yīng)用于癌癥的預(yù)防、診斷和治療方面。 ?Northern印跡法 （ Northern bloting： DNARNA）。 ?蛋白質(zhì)組學(xué)和結(jié)構(gòu)基因組學(xué) ：闡釋基因組中全部基因及其編碼蛋白質(zhì)的功能以及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。 ?2022年 10月 11日，我國(guó)科學(xué)家成功繪制出大熊貓晶晶的基因組序列。美國(guó)的人類基因組計(jì)劃總體規(guī)劃是：擬在 15年內(nèi)至少投入 30億美元，進(jìn)行對(duì)人類全基因組的分析。 紫外法 1977年兩位學(xué)者分別提出了 化學(xué)斷裂法 和雙脫氧鏈終止法 。 三、核酸的分析 純 DNA的 OD260/280≥。因?yàn)?GC比 AT更穩(wěn)定（氫鍵）。 ⑤選擇最佳的復(fù)性溫度，溫度太高會(huì)使核酸發(fā)生變性，而溫度過(guò)低會(huì)使錯(cuò)配的兩鏈無(wú)法分開(kāi)。 高溫變性 緩慢冷卻 熱復(fù)性 急速冷卻 復(fù)性失敗 4．變性與復(fù)性 （ 復(fù)性） 4．變性與復(fù)性 （ 復(fù)性） 影響核酸復(fù)性速度的因素很多： ①核酸濃度越高，隨機(jī)碰撞的頻率越高，復(fù)性速度越快。 ?變性因素： 熱變性、酸堿變性和化學(xué)變性等。 不同相對(duì)分子質(zhì)量的核酸沉降速度不同。 核酸在 pH4時(shí)，帶負(fù)電荷 等電點(diǎn)（ pI）： pI＝ pKa1＋ pKa2 2 DNA的相對(duì)分子質(zhì)量較大，一般為 106～ 109 bp，大多數(shù) DNA為線性分子，分子極不對(duì)稱，雖然其長(zhǎng)度可達(dá)厘米級(jí)但分子的直徑只有納米級(jí)。 稀有堿基 二、 RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu) 第五節(jié) 核酸的性質(zhì)及分離、分析 一、核酸的理化性質(zhì) 二、核酸的分離 三、核酸的分析 四、核酸測(cè)序的研究方法 1．相對(duì)分子質(zhì)量 2．粘度與沉降特性 3．紫外吸收 4．變性與復(fù)性 5．熔解溫度 6．克原子磷消光系數(shù) 一、核酸的理化性質(zhì) 純品 DNA為白色纖維狀固體， RNA為白色粉末。 ?分子量： 由 60～ 95個(gè)核苷酸殘基組成 ， 都較小 ?功能： 蛋白質(zhì)的生物合成中起選擇性運(yùn)輸原料（ 氨基酸 ） 的作用 ， 因此把 tRNA叫受體 RNA。 （ rRNA） 大腸桿菌 5S
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