【正文】 ②右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰；③左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋?！妓伎?〗若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？不能。2．7 接種2．7．1微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法，另外還有穿刺接種和斜面接種等。③將菌種試管口通過火焰達(dá)到消滅試管口雜菌的目的。⑦灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域內(nèi)劃線?！妓伎?〗取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物；除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種；取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻后進(jìn)行，其目的是防止高溫殺死菌種；最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者。2．7．4　系列稀釋操作：①取盛有9mL水的無菌試管6支，編號1010101010106。〖思考8〗操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。3．3　培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4℃冰箱中，每3～6個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短，容易發(fā)生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在－20℃冷凍箱中。這節(jié)課我們來學(xué)習(xí)研究植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。活動(dòng)1：閱讀“植物組織培養(yǎng)的基本過程”，討論并完成以下問題：1．3細(xì)胞分化：個(gè)體發(fā)育中細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開化植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。1．8激素：在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。2．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)活動(dòng)3：閱讀“制備MS固體培養(yǎng)基”，回答下列問題：212．1配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液。2．3滅菌：采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。對外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，既要考慮到藥劑的消毒效果，又要考慮到植物的耐受力?！妓伎?〗外植體接種與細(xì)菌接種相似之處是操作步驟相同，而且都要求無菌操作。最后進(jìn)行露天栽培。多利于1996年7月5日出生，于1997年2月23日被介紹給公眾，它是用一只6歲母羊的體細(xì)胞進(jìn)行克隆，由羅斯林研究所與英國PPL醫(yī)療公司共同培育而成的。研究人員對它實(shí)施了“安樂死”。本節(jié)我們將學(xué)習(xí)花藥離體培養(yǎng)技術(shù)，這是一種信的育種技術(shù)?！妓伎?〗營養(yǎng)細(xì)胞在花粉萌發(fā)過程中的作用是什么？控制花粉的萌發(fā)并提供營養(yǎng)?；顒?dòng)4：閱讀“影響花藥培養(yǎng)的因素”，回答下列問題：1．影響花粉植株的主要因素： 材料的選擇 和 培養(yǎng)基的組成 等。〖思考7〗花瓣松動(dòng)會(huì)給材料消毒帶來困難的原因是 外界環(huán)境中的微生物容易侵入到花藥中 ?；顒?dòng)6：閱讀“材料的消毒”，填寫下列流程圖：花蕾（70％酒精）大約30s（無菌水）清洗（無菌吸水紙）吸干水分（1％氯化汞溶液）2～4min（無菌水）沖洗〖思考8〗月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比較，二者有何不同？在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗。每個(gè)培養(yǎng)瓶接種 7～10 個(gè)花藥。前者還要轉(zhuǎn)移到 分化培養(yǎng)基 上進(jìn)行分化培養(yǎng)成再生植株；后者要盡快 分開 并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。全部完成課題不僅耗時(shí)較長，又有季節(jié)限制。（四）實(shí)例探究例1．某名貴花卉用種子繁殖會(huì)發(fā)生性狀分離。抓住無性生殖能夠保持原物種特性這一特點(diǎn)。答案：D例2． 一個(gè)初級精母細(xì)胞在減數(shù)分裂的第一次分裂時(shí)，有一對同源染色體不發(fā)生分離，所形成的次級精母細(xì)胞減數(shù)分裂的第二次分裂正常；另一個(gè)初級精母細(xì)胞減數(shù)分裂的第一次分裂正常，減數(shù)第二次分裂時(shí)，在兩個(gè)次級精母細(xì)胞中，有一個(gè)次級精母細(xì)胞的1條染色體姐妹染色單體沒有分開。在紛雜的塵世里，為自己留下一片純靜的心靈空間，不管是潮起潮落，也不管是陰晴圓缺，你都可以免去浮躁，義無反顧，勇往直前，輕松自如地走好人生路上的每一步3. 花一些時(shí)間，總會(huì)看清一些事。努力過后，才知道許多事情，堅(jiān)持堅(jiān)持，就過來了。只有你自己才能把歲月描畫成一幅難以忘懷的人生畫卷。歲月是有情的，假如你奉獻(xiàn)給她的是一些色彩，它奉獻(xiàn)給你的也是一些色彩。有時(shí)候覺得自己像個(gè)神經(jīng)病。上述兩個(gè)初級精母細(xì)胞減數(shù)分裂的最終結(jié)果應(yīng)當(dāng)是A． 兩者產(chǎn)生的配子全部都不正常 B． 前者產(chǎn)生一半不正常的配子，后者產(chǎn)生的配子不正常C． 兩者都產(chǎn)生一半不正常的配子D．前者產(chǎn)生全部不正常的配子，后者只產(chǎn)生一半不正常的配子1. 若不給自己設(shè)限，則人生中就沒有限制你發(fā)揮的藩籬。該題易陷入思維定勢，聯(lián)想到花粉粒的離體培養(yǎng)。進(jìn)行離體培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)采用該植株的（ ）A．莖尖 B．子房壁 C．葉片 D．花粉粒解析：本題主要考查無性生殖特點(diǎn)。建議教師提前做好相關(guān)環(huán)節(jié)的準(zhǔn)備，如花蕾的選擇、培養(yǎng)基配方等。〖思考11〗為什么通過愈傷組織形成的植株會(huì)發(fā)生染色體倍性的變化？（05全國理綜III）有些是由花粉發(fā)育形成的單倍體花粉植株，有些是由花粉壁細(xì)胞發(fā)育形成的二倍體花藥壁植株。〖思考10〗在花藥培養(yǎng)基中，用量最高的激素是 IAA ；在誘導(dǎo)叢芽或胚狀體培養(yǎng)基中，用量最高的激素是 BA ；在誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基中，用量最高的激素是 IAA 。〖思考9〗剝?nèi)』ㄋ帟r(shí)，一是注意不要損傷花藥，原因是 容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織 ；二是要徹底除去花絲，原因是 花絲不利于愈傷組織或胚狀體的形成 。2．在使用焙花青－鉻釩溶液時(shí)，需要首先將花藥用 卡諾氏固定液 處理20min?！妓伎?〗除此之外，你認(rèn)為影響花粉誘導(dǎo)成功率的因素還有哪些？植物的種類、親本生長條件、材料的低溫處理、接種密度、培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)的環(huán)境條件等。這兩種途徑的區(qū)別主要取決于培養(yǎng)基中 激素 的種類及其 濃度 的配比。2．結(jié)合教材內(nèi)容填下列示意圖：小孢子母細(xì)胞（2n）（ ）時(shí)期（n）單核（ ）期（n）雙核期（ ）細(xì)胞核（n）（ ）細(xì)胞核（n）（ ）細(xì)胞（n）（ ）細(xì)胞（n）（ ）個(gè)精子(n)（ ）分裂（ ）分裂單核（ ）期（n）（ ）分裂〖思考2〗由此可見，被子植物的花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 四分體 時(shí)期， 單核 期和 雙核 期等階段。 課題2 月季的花藥培養(yǎng)【教學(xué)目標(biāo)】（一）知識與技能識記被子植物花粉發(fā)育的過程通過學(xué)習(xí)花藥培養(yǎng)的基本技術(shù)，培養(yǎng)設(shè)計(jì)試驗(yàn)、動(dòng)手操作、分析解釋實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的能力格里芬說，綿羊通常能活11到12年。（三）課堂總結(jié)、點(diǎn)評菊花的組織培養(yǎng)基本原理細(xì)胞的全能性基本過程脫分化愈傷組織再分化影響因素材料性質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)、調(diào)節(jié)物質(zhì)、環(huán)境條件操作流程配制MS固體培養(yǎng)基外植體的消毒接種培養(yǎng)移栽栽培資料——克隆羊多利2003年2月14日蘇格蘭羅斯林研究所證實(shí)世界上首只成年體細(xì)胞克隆動(dòng)物多利已經(jīng)死亡。3．4移栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。注意所有接種工作都必須在酒精燈旁進(jìn)行，器械使用前后都要用火焰灼燒滅菌。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。2．2配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升。生長素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)促根分化，抑芽形成比值低時(shí)促芽分化，抑根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織生長使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素，后生長素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高：PH、溫度、光等環(huán)境條件?！妓伎?〗選取生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的原因是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。1．4愈傷組織是通過細(xì)胞分裂形成的，其細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下，通過基因的選擇性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。（三）情感、態(tài)度與價(jià)值觀 通過閱讀植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展史，課下查閱植物組織培養(yǎng)技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的資料，關(guān)注學(xué)生科學(xué)態(tài)度的教育，拓展學(xué)生視野，感受科學(xué)技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中的重要價(jià)值?！妓伎?〗在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。3．1　培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。③從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得102倍液。2．7．3　稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。注意不要將第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線相連。⑤將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。其操作步驟是：①將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅?！妓伎?〗配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染?！妓伎?〗錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是消滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培養(yǎng)基。2．5 滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加塞包扎后用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；所用培養(yǎng)皿用報(bào)紙包扎后用干熱滅菌箱滅菌。稱取牛肉膏和蛋白胨時(shí)動(dòng)作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空氣中水分。例如：碳氮比4∶1時(shí)，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3∶1時(shí)，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。〖思考7〗利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時(shí)物品不能擺得太擠，目的是避免妨礙熱空氣流通。（4）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用 酒精 進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用 氯氣 進(jìn)行消毒?；顒?dòng)2：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：1．4 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 防止外來雜菌的入侵 。1．3 培養(yǎng)基