【正文】 、蛋白胨等。 ？相應(yīng)的分離方法有哪些？ 下游加工過程分為 ： 發(fā)酵液的預(yù)處理 、 初步純化 、 高度純化（精制） 、 成品加工 單元操作 :絮凝、固 液分離、細(xì)胞破碎、沉淀、吸附、膜分離、萃取、離子交換、電泳、結(jié)晶、色譜分離、濃縮、干燥、包裝等 ① 標(biāo)記菌株的篩選 ：兩株親本必須帶有不同的遺傳標(biāo)記 ② 原生質(zhì)體的制備 ：細(xì)菌放線菌 —— 溶菌酶；酵母菌霉菌 —— 蝸牛酶、纖維素酶 菌體需先經(jīng)過預(yù)處理；選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期的菌體；選擇合適的酶濃度、酵解時(shí)間、酵 解溫度（ 20~40℃ ）；添加滲透壓穩(wěn)定劑 ③ 原生質(zhì)體的融合： PEG 和 Ca2+ ④ 原生質(zhì)體的再生 ：必須使用再生培養(yǎng)基 ⑤ 融合子的選擇 ，加入滲透壓穩(wěn)定劑的作用是什么，常用的穩(wěn)定劑有哪些？ 原生質(zhì)體對(duì)溶液和培養(yǎng)基的滲透壓很敏感，必須在高滲或等滲透壓的溶液或培養(yǎng)基中才能維持其生存，低滲透壓溶液中，原生質(zhì)體將會(huì)破裂而死亡。兩者均可在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，前者較穩(wěn)定，后者不穩(wěn)定，會(huì)分離成親本類型。 如 5溴尿嘧啶（ 5Bu）、 5氟尿嘧啶（ 5Fu）、 5氨基尿嘧啶、 6氯胸 腺嘧啶、 2氨基嘌呤、 6氯嘌呤和 8氮鳥嘌呤等類似物 。 ？ ① .污染了好氣性雜菌，大量的溶氧被消耗； ② .菌體代謝發(fā)生異?，F(xiàn)象，需氧要求增加，使溶氧下降； ③ .某些設(shè)備或工藝 控制發(fā)生故障或變化，如攪拌功率消耗變小或攪拌速度下降等，也可能引起溶氧的下降。 接觸抑制性： 當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿于附著物表面，相鄰的細(xì)胞表面間相互接觸，使細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期停止進(jìn)入穩(wěn)定期，細(xì)胞生長(zhǎng)大大減慢，細(xì)胞生長(zhǎng)，死亡處于動(dòng)態(tài)平衡。 細(xì)胞系： 原代培養(yǎng)經(jīng)第一次移植繼代培養(yǎng)成功后，形成的以一種細(xì)胞為主的多種細(xì)胞群體 組織塊培養(yǎng)法： 動(dòng)物組織切成直徑 12mm3 立方小塊進(jìn)行培養(yǎng)的方法。 1細(xì)胞核移植技術(shù) ： 將一個(gè)動(dòng)物的細(xì)胞核移植入去核的未受精卵母細(xì)胞中，并發(fā)育生長(zhǎng)，產(chǎn)生遺傳上同質(zhì)性狀的克隆動(dòng)物技術(shù)（即無性繁殖）。 1胚胎干細(xì)胞（ ES 細(xì)胞）： 受精卵分裂成胚囊時(shí)，內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞即為胚胎干細(xì)胞。（第二代單克隆抗體） 1 McAb： 由一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的細(xì)胞株（或克隆系）產(chǎn)生的抗一種抗原決定簇的抗體。 2微載體培養(yǎng)法 ： 將細(xì)胞吸附于微載體表面，在培養(yǎng)液中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，使細(xì)胞在微載體表面長(zhǎng)成單層的培養(yǎng)方法 2 基因治療： 向有功能缺陷的細(xì)胞補(bǔ)充相應(yīng)功能基因，糾正或補(bǔ)償其基因缺陷，關(guān)閉或抑制異常表達(dá)的基因，表達(dá)新產(chǎn)物達(dá)到治療目的。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基類型？ ； （基礎(chǔ)培養(yǎng)基）； ； 。 雜種細(xì)胞的篩選有哪幾類系統(tǒng)？ HAT 選擇系統(tǒng)；抗藥性篩選系統(tǒng)；營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)篩選系統(tǒng)；原位雜交法；基因探針選擇法等。 DMSO 能溶解藍(lán)紫色物，顏色深淺與所含藍(lán)紫色物量成正比 細(xì)胞克隆培養(yǎng)及優(yōu)點(diǎn) 定義： 把一個(gè)單細(xì)胞從一個(gè)群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之重新繁衍成為一個(gè)新的細(xì)胞群體的 培養(yǎng)技術(shù)。 （ 2）細(xì)胞的 DNA 合成一般有兩條途徑：①由糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成 DNA，葉酸作為重要的輔酶參加反應(yīng)；氨基喋呤（ A）是葉酸拮抗劑，可阻斷細(xì)胞正常途徑合成 DNA ②在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在下，經(jīng) HGPRT 和 TK的催化下合成 DNA。 基本特性：專一性強(qiáng)，質(zhì)地均一，檢測(cè)靈敏度極高，可大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)等。 如何應(yīng)用 HAT 選擇系統(tǒng)來篩選動(dòng)物雜種細(xì)胞？ 舉例說明之。再通過篩選和克隆化培養(yǎng)生產(chǎn)某種預(yù)定性質(zhì)的單克隆抗體，又可在體外無限增值 HAT 篩選： （ 1） HAT 是含一定濃度次黃嘌呤 H，氨基喋呤 A 及胸腺嘧啶核苷 T 的一種選擇性培養(yǎng)基。 （ 3）抗體融合蛋白 1動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)有哪些方法？ 優(yōu)缺點(diǎn) ? 懸浮培養(yǎng)法，固定化培養(yǎng)法，微載體培養(yǎng)法 微載體培養(yǎng)法優(yōu)點(diǎn)： 比表面積大；細(xì)胞生長(zhǎng)均一；占用空間小，培養(yǎng)基利用率高；重復(fù)性好，放大易；易收獲，易檢測(cè) 1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)的外源基因?qū)敕椒?有哪些 ? 顯微注射法、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法、胚胎干細(xì)胞法、精子載體法等 1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在醫(yī)藥業(yè)的應(yīng)用 ? ① 作為醫(yī)學(xué)研究的疾病 動(dòng)物模型 ②在新藥研究中應(yīng)用：藥物篩選及藥物作用機(jī)制研究 ③轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為生物反應(yīng)器 ④改良動(dòng)物物種和提高動(dòng)物育種效率 ⑤作為深入了解多種生命現(xiàn)象本質(zhì)的工具 ⑥生產(chǎn)人體或動(dòng)物進(jìn)行器官或組織移植時(shí)所需的器官和組織 生物技術(shù)復(fù)習(xí)題 07437 19 1 干細(xì)胞的分類？ 根據(jù)組織發(fā)生部位：造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞、成骨干細(xì)胞等 根據(jù)所處發(fā)育階段： 胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞 根據(jù)分化潛能大小：全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、單能干細(xì)胞 1 成體干細(xì)胞常用的分離提取方法？ 利用細(xì)胞體積和密度進(jìn)行分離純化；選擇性細(xì)胞凝集；基于不同粘附特 性進(jìn)行細(xì)胞分離；利用細(xì)胞表面標(biāo)志分離純化（ 免疫溶解法、流式細(xì)胞分選術(shù)、平面粘附分離法、磁珠分選法 ） 1 人源化抗體的分類？ 嵌合抗體、重構(gòu)抗體 、全人源化抗體 1 人源化抗體的制備技術(shù)有哪些？ DNA重組技術(shù) 、 CDR植入 技術(shù) 1 基因治療需具備的條件？ ① 選擇適當(dāng)?shù)募膊?，并?duì)其發(fā)病機(jī)理及相應(yīng)基因的結(jié)構(gòu)功能了解清楚； ② 糾正該病的基因已被克隆，并了解該基因表達(dá)與調(diào)控的機(jī)制與條件； ③ 該基因具有適宜的受體細(xì)胞并能在體外有效表達(dá)； ④ 具有安全有效的轉(zhuǎn)移載體和方法，以及可供利用的動(dòng)物模型。 機(jī)理：結(jié)合水分子，降低組織結(jié)冰速度，提高膜透性。 生理平衡鹽溶液 功效： ； 節(jié) PH； 。此抗體可明顯降低由鼠源單克隆抗體所致的人抗鼠抗體反應(yīng) 2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)： 外源目的基因?qū)氩溉閯?dòng)物的受精卵或胚胎，目的基因與染色體 DNA 整合；細(xì)胞分裂時(shí)，該目的基因隨染色體的倍增而倍增，使每個(gè)細(xì)胞都帶有 目的基因，在 體內(nèi)能表達(dá)，且能穩(wěn)定地遺傳到下一代。 1淋巴細(xì)胞雜交瘤： 通過雜交瘤技術(shù)獲得的既有骨髓瘤細(xì)胞體外無限增殖能力，又具有免疫淋巴細(xì)胞分泌抗體能力的雜種細(xì)胞。 1干細(xì)胞： 一類具自我更新和分化潛能的細(xì)胞。 1單細(xì)胞分離培養(yǎng)（細(xì)胞克隆培養(yǎng)）： 把一個(gè)單細(xì)胞從一個(gè)群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之重新繁衍成為一個(gè)新的細(xì)胞群體的培養(yǎng)技術(shù)。 傳代培養(yǎng) （移植繼代培養(yǎng)） ： 當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞相互接近匯合時(shí)，細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶經(jīng)消化，收集，稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶的過程。 根據(jù)節(jié)點(diǎn)下游分支的可變程度，分為柔性、剛性及半柔性節(jié)點(diǎn) ① 柔性節(jié)點(diǎn)： 由節(jié)點(diǎn)流向各分支的代謝流分率隨代謝要求發(fā)生相應(yīng)的變化，去除產(chǎn)物的反饋抑制后，該分支的代謝流分率大大增加 ② 剛性節(jié)點(diǎn)： 由節(jié)點(diǎn)流向某一分支或某些分支的代謝流分率是難以改變的，這是由產(chǎn)物的反饋抑制及對(duì)另一分支酶的激活的相互作用所致的 ③ 半柔性節(jié)點(diǎn)： 介于兩者 之間，由該節(jié)點(diǎn)流向各分支的代謝流中有一個(gè)是占主導(dǎo)地位的，其酶活性較高或?qū)Υx的親和力較大，且無反饋抑制，通過削弱主導(dǎo)分支的酶量或酶活可增加產(chǎn)物的產(chǎn)率 生物技術(shù)復(fù)習(xí)題 07437 16 動(dòng)物細(xì)胞工程 一、專業(yè)符號(hào)： Hela —— 人宮頸癌上皮細(xì)胞系 Vero—— 綠猴腎細(xì)胞 CHO—— 中國倉鼠卵巢細(xì)胞 DMSO—— 二甲亞砜 MTT—— 四唑鹽 EGF—— 表皮生長(zhǎng)因子 NGF—— 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 BSS—— 生理平衡鹽溶液 PEG—— 聚乙二醇 HAMA —— 人抗鼠抗體反應(yīng) CDR—— 互補(bǔ)決定區(qū) McAb —— 單克隆抗體 ES —— 胚胎干細(xì)胞 ScFv —— 單鏈抗體 tPA—— 組織纖溶酶原激活劑 FCM—— 流式細(xì)胞分析技術(shù) TK—— 胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型 HGPRT—— 次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷型 HAT —— 含次黃嘌呤，氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷的選擇性培養(yǎng)基 二、名解 動(dòng)物細(xì)胞工程： 以細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)及工程學(xué)為原理和方法，以動(dòng)物細(xì)胞為對(duì)象，對(duì)動(dòng) 物細(xì)胞遺傳性進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，實(shí)現(xiàn)創(chuàng)造新物種，提供名貴藥品及服務(wù)的目標(biāo)。 （ 3）誘變劑插入（移碼誘變劑）： 包括吖啶黃、吖啶橙等吖啶類化合物 。 如氮介（ NM）、乙烯亞胺（ EI）、硫酸二乙酯（ DES）、甲基磺酸乙酯（ EMS）、亞硝基胍（ NTG）、亞硝酸（ HNO2）等。另外，PEG 的脫水作用，擾亂了分散在原生質(zhì)膜表面的蛋白質(zhì)和脂類的排列，提高了脂類膠粒的流動(dòng)性，從而促進(jìn)了原生質(zhì)體融合。一般天然培養(yǎng)基中不需要另加微量元素、維生素等物質(zhì)，且組成培養(yǎng)基的原料來源豐富，價(jià)格低廉，適用于工業(yè)生產(chǎn)。 四、 問答題 ? 斜面低溫保藏法、 液體石蠟封藏法 、甘油冷凍保藏法、 真空冷凍干燥保藏法 、 液氮超低溫保藏法 、 其他干燥保藏法 ，常用的消沫方法有哪幾種？ 生物技術(shù)復(fù)習(xí)題 07437 14 不利因素： 發(fā)酵罐的裝料系數(shù)減小，氧傳遞系數(shù)減小等。 微生物代謝過程中所形成的為自身生長(zhǎng)繁殖所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為初級(jí)代謝產(chǎn)物 三、 填空題 發(fā)酵液的預(yù)處理 、 初步純化 、 高度 純化（精制） 、 和 成品加工 。 某些 微生物生長(zhǎng)所必需的有機(jī)物質(zhì)，但其需要量不大，通常把這些特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為生長(zhǎng)因子 。 ，各自具有什么特點(diǎn)？ ① KS 型不可逆抑制劑： 具有與底物類似的結(jié)構(gòu)，他們能與特 定的酶結(jié)合，它們的結(jié)構(gòu)中還帶有一個(gè)活潑的化學(xué)基團(tuán)，可以與酶分子中的必需基團(tuán)起反應(yīng)，使酶活力受到抑制 ② Kcat型不可逆抑制劑： 結(jié)構(gòu)中潛在著一種化學(xué)活性基團(tuán)，當(dāng)酶把它們作為一種底物來結(jié)合并在這一酶促催化作用進(jìn)行到一定階段以后，潛在的化學(xué)基團(tuán)被活化，成為有活性的化學(xué)基團(tuán)，并和酶蛋白活性中心發(fā)生共價(jià)結(jié)合，使酶失活 ，酶反應(yīng)器可以分為哪幾類，各自具有什么特點(diǎn)？ ① 間歇式反應(yīng)器： 先把酶和底物一次性裝入反應(yīng)器，在適當(dāng)溫度、 PH 下反應(yīng)，經(jīng)一定時(shí)間后將全部反應(yīng)物取出 。由于擴(kuò)散阻力將導(dǎo)致 酶動(dòng)力學(xué)行為改變而降低活力 生物技術(shù)復(fù)習(xí)題 07437 11 ？ 殘留法、水解法 ？ 構(gòu)象效應(yīng)、屏蔽效應(yīng)（或稱位阻效應(yīng)）、微環(huán)境效應(yīng)（或稱分配效應(yīng)）、擴(kuò)散效應(yīng) ？ 分批測(cè)定法、連續(xù)測(cè)定法 ，固定化酶具有哪些優(yōu)點(diǎn)？ （ 1）穩(wěn)定性較天然酶高 （ 2）反應(yīng)后，