【正文】 性；“－”發(fā)酵陰性。不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同，只有那些能夠產(chǎn)生并分泌胞外酶的微生物才能利用大分子有機(jī)物。 培養(yǎng)基（1） 淀粉培養(yǎng)基: 蛋白胨10g，NaCl 5 g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2 g，瓊脂15~20 g，蒸餾水1000mL，pH ，121℃滅菌20min。 試劑碘液：同革蘭氏碘液吲哚試劑：對(duì)二甲基氨基苯甲醛2g，95%乙醇190mL，濃鹽酸40mL。操作步驟如下：（1）誘變①菌懸液的制備取已培養(yǎng)20h的活化枯草芽孢桿菌斜面一支，用10mL生理鹽水將菌苔洗下，并倒入盛有玻璃珠的錐形瓶中，強(qiáng)烈振蕩10min，以打破菌塊，3000r/min離心15min，棄上清液，將菌體用生理鹽水洗滌2次，最好制成菌懸液，用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。所有操作必須在紅燈下進(jìn)行。（2）計(jì)算存活率及致死率將培養(yǎng)48h后的平板取出進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 油脂水解試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能夠分泌脂肪酶（胞外酶），能將培養(yǎng)基中的脂肪水解為甘油和脂肪酸。（2）翻轉(zhuǎn)平皿使底朝上，用記號(hào)筆在其背面玻璃上劃成兩半。細(xì)菌對(duì)牛乳的利用主要是指對(duì)乳糖和酪蛋白的分解利用。（2） 產(chǎn)堿 細(xì)菌分解酪蛋白產(chǎn)生堿性物質(zhì)，使石蕊變藍(lán)。（6） 還原 細(xì)菌生長(zhǎng)旺盛時(shí)，使培養(yǎng)基氧化還原電位降低，因而石蕊被還原而褪色。注意牛乳產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、凝固或胨化各現(xiàn)象是連續(xù)出現(xiàn)的，往往觀察某種現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)，另一種現(xiàn)象已經(jīng)消失了。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 淀粉水解試驗(yàn)結(jié)果 紫外線處理后枯草芽孢桿菌的平均菌落數(shù)和存活率及致死率紫外線處理（min）稀釋度存活率（％）致死率（％）對(duì)照123 透明圈和菌落直徑大小及HC比較紫外線處理（min）12345透明圈菌落大小HC比值透明圈菌落大小HC比值透明圈菌落大小HC比值透明圈菌落大小HC比值透明圈菌落大小HC比值123對(duì)照 其他幾種試驗(yàn)結(jié)果 幾種試驗(yàn)結(jié)果菌種油脂水解試驗(yàn)石蕊牛乳試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌金黃色葡萄球菌粘乳產(chǎn)堿菌銅綠假單胞菌未知菌“＋”表示陽(yáng)性反應(yīng)，“－”表示陰性反應(yīng)。 基本原理 酚類化合物是化工、鋼鐵等工業(yè)廢水的主要有毒成分。固體培養(yǎng)基加20％瓊脂。H2O ，KH2PO4 ，蒸餾水100mL，pH ～，121℃滅菌20min。7H2O ，KH2PO4 ，F(xiàn)eSO4見附注1。在普通蒸餾水中，以10～20mg/L的比例加入粉末狀活性炭，充分搖勻后，用定性濾紙過濾即得。（9） ： 其他物品無菌水、無菌培養(yǎng)皿、無菌移液管等；試劑瓶、容量瓶、移液管、酸式滴定管等。 梯度平板法分離純化一般微生物在含酚培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，苯酚耐受菌株的篩選，可采用與篩選藥物抗性菌株一樣的梯度平板法。將此菌落在耐酚細(xì)菌或真菌培養(yǎng)基平板上連續(xù)劃線分離，最后挑取單菌落接種到耐酚斜面培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)2d。（2） 復(fù)篩將經(jīng)初篩純化的菌種，分別接入碳源對(duì)照培養(yǎng)液A和苯酚培養(yǎng)液B中，30℃振蕩培養(yǎng)48h，于發(fā)酵的0、12348h取樣，在OD600處檢測(cè)光密度值（OD），或采用比濁法在濁度計(jì)上測(cè)定混濁度。苯酚降解率（％）＝未接種前發(fā)酵液苯酚量－發(fā)酵終止時(shí)發(fā)酵液苯酚量未接種前發(fā)酵液苯酚量100％發(fā)酵液中苯酚含量測(cè)定：在NH4OH－NH4Cl緩沖溶液中發(fā)酵液中苯酚游離出來，苯酚與4氨基安替比林發(fā)生縮合反應(yīng)，在氧化劑鐵氰化鉀的作用下，酚被氧化生成醌而與4氨基安替比林偶合而顯色（注意測(cè)定中不能顛倒加試劑的順序）。苯酚含量＝V11000/VV1：相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)酚溶液中的酚量（mg）V：發(fā)酵液體積（L） 實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容 。同時(shí)做空白試驗(yàn)（即用無酚蒸餾水代替酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液，其他相同），分別記下消耗的Na2S2O3溶液的體積。加入5mL1＋5硫酸，搖勻，于暗處?kù)o置5min后。2. 說明采用梯度平板法進(jìn)行藥物抗性菌株篩選的優(yōu)越性。 活性污泥和生物膜生物相觀察學(xué)習(xí)觀察活性污泥中的絮凝體及生物相，初步分析生物處理系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常。活性污泥（取自污水處理廠曝氣池）；100mL量筒、載玻片、蓋玻片、玻璃小吸管、橡皮吸頭、鑷子；顯微鏡、計(jì)數(shù)板、目測(cè)微尺。在制作生物膜標(biāo)本時(shí)，可用鑷子從填料上刮取一小塊生物膜，用蒸餾水稀釋，制成菌液，以下步驟與活性污泥標(biāo)本的制備方法相同。（1）污泥絮粒觀察生物相的全貌，要注意污泥結(jié)構(gòu)松緊程度，菌膠團(tuán)和絲狀菌的比例及生長(zhǎng)狀況，觀察微型動(dòng)物的種類及活動(dòng)狀況，并加以記錄和作出必要的描述。實(shí)踐證明圓形、封閉、緊密的絮粒相互之間易于凝聚、濃縮，沉降性能良好；反之沉降性能良好差。（2）絲狀微生物活性污泥中的絲狀細(xì)菌數(shù)量是影響污泥沉降性能最重要的因素。（3）微型動(dòng)物微型動(dòng)物包括單細(xì)胞的原生動(dòng)物和多細(xì)胞的微型后生動(dòng)物，鏡檢時(shí)要注意觀察它們的種類、形態(tài)、結(jié)構(gòu)、數(shù)量。 動(dòng)物的計(jì)數(shù)步驟如下：（1）取活性污泥曝氣池混合液盛于燒杯內(nèi)，用玻棒輕輕攪勻，如混合液較濃，可稀釋一倍后觀察。上述計(jì)數(shù)方法僅適用于原生動(dòng)物和輪蟲，對(duì)個(gè)體較大的微型動(dòng)物和線蟲等，則須加大計(jì)數(shù)容量，以免造成誤差。 /+ / ++ /+++游離細(xì)菌幾乎不見 / 少 /多優(yōu)勢(shì)種動(dòng)物名稱及狀態(tài)描述其它動(dòng)物種名稱每滴稀釋液中的動(dòng)物數(shù)每毫升混合液中的動(dòng)物數(shù) 繪出所見原生動(dòng)物和微型后生動(dòng)物形態(tài)圖 試對(duì)污水廠活性污泥（或生物膜）質(zhì)量作出初步評(píng)價(jià)思考題，試對(duì)污水廠活性污泥質(zhì)量及運(yùn)行情況作初步評(píng)價(jià)。（4）計(jì)算，假定在稀釋了一倍的一滴水樣中測(cè)得鐘蟲50只，則每毫升活性污泥混合液中含鐘蟲數(shù)應(yīng)為：50只202=2000只 。（3）用低倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，注意所滴加的液體不一定布滿整個(gè)100格小方格，計(jì)數(shù)時(shí)，只要把充有污泥混合液的小方格挨著秩序一行行計(jì)算即可，若是群體，則需將群體和群體上的個(gè)體分別計(jì)數(shù)。當(dāng)固著型纖毛蟲占優(yōu)勢(shì)時(shí)，可以認(rèn)為生物處理系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)正常。根據(jù)污泥中絲狀菌與菌膠團(tuán)細(xì)菌的比例，可將絲狀菌分為五個(gè)等級(jí)：0級(jí)：污泥中幾乎無絲狀菌；+ 級(jí)：污泥中存在少量絲狀菌；+級(jí)：污泥中存在中等數(shù)量的絲狀菌，總量少于菌膠團(tuán)細(xì)菌；+ +級(jí)：污泥中存在大量絲狀菌，總量與菌膠團(tuán)細(xì)菌大致相當(dāng)；+ + +級(jí)：污泥絮粒以絲狀菌為骨架，數(shù)量超過菌膠團(tuán)細(xì)菌而成為優(yōu)勢(shì)菌。絮粒大的污泥沉降快。結(jié)構(gòu)：絮粒中網(wǎng)狀空隙與絮粒外面懸液相連的稱為開放結(jié)構(gòu)；無開放空隙的稱為封閉結(jié)構(gòu)。污泥中的生物相比較復(fù)雜，以細(xì)菌、原生動(dòng)物為主，還有真菌、微型后生動(dòng)物等。 制片取曝氣池混合液1~2滴，放在潔凈載玻片中央（如混合液較稀，可等其沉淀后，取沉淀區(qū)的污泥）。借助顯微鏡觀察微生物的狀況來判斷廢水處理的運(yùn)轉(zhuǎn)狀況，以便及早發(fā)現(xiàn)異常狀況，及時(shí)采取適當(dāng)?shù)膶?duì)策，保證穩(wěn)定運(yùn)行，提高處理效率。特殊污染物如：有機(jī)磷農(nóng)藥、聚氯聯(lián)苯類農(nóng)藥、氰、腈類化合物、聚酰胺類等。記錄用量。（1/6K2Cr2O7）重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。 記錄在平板上苯酚降解菌的菌落特征和顯微鏡下觀察的鏡檢特征以及苯酚降解能力等。％NH4OH－NH4Cl緩沖液，％4氨基安替比林溶液，％鐵氰化鉀溶液，每次加入試劑后需均勻混合，放置15min后在OD510處比色測(cè)定。按下述方法測(cè)定接種前和發(fā)酵終止時(shí)發(fā)酵液苯酚濃度，計(jì)算苯酚降解率。％，％），30℃培養(yǎng)6～10d，使苯酚降解菌大量增殖，淘汰對(duì)酚不適應(yīng)的微生物；再添加苯酚無機(jī)培養(yǎng)液（苯酚終濃度增加至100mg/L），30℃振蕩培養(yǎng)4～6d；再流加苯酚無機(jī)培養(yǎng)液（苯酚終濃度增加至200mg/L）30℃振蕩培養(yǎng)4～6d，再提高到流加250mg/L苯酚無機(jī)培養(yǎng)液，30℃振蕩培養(yǎng)4d后從中選出對(duì)苯酚耐受力強(qiáng)的苯酚降解菌。（1） 梯度平板制備在已滅菌的培養(yǎng)皿中，先倒入7～10mL不含苯酚的已滅過菌的細(xì)菌或真菌培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿一側(cè)放置木條上，使皿中的培養(yǎng)基傾斜成斜面，而且剛好完全蓋住培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿放平，再倒入7～10mL已融化的無菌耐酚細(xì)菌或真菌培養(yǎng)基（苯酚終濃度為75mg/100mL），剛好完全蓋住下層斜面，由于苯酚的擴(kuò)散作用，上層培養(yǎng)基薄的部分苯酚濃度大大降低，造成上層培養(yǎng)基由厚到薄苯酚濃度遞減的梯度（）。記錄采樣日期、曝氣池的水質(zhì)分析（包括：揮發(fā)酚、可溴化物、BODCOD、焦油、硫化物、氰化物、總氮、氨態(tài)氮、磷、pH、水溫等）。見附注2。（6） 氯仿（7） 20％氨性氯化銨緩沖液（）：稱取20g 分析純的NH4Cl，溶解于濃氨水中，用濃氨水定容至100mL，貯存于具橡皮塞的瓶中，在冰箱中保存。此溶液臨用臨配。（2） 酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液：，稀釋定容至1000mL，貯于棕色瓶中，放置冷暗處保存。（6） 苯酚培養(yǎng)液B：苯酚25mg～75mg（不同濃度），微量元素溶液10mL，pH ～，121℃滅菌20min。（6g/L）。苯酚經(jīng)微生物體內(nèi)單加氧酶氧化轉(zhuǎn)變?yōu)猷彵蕉樱?xì)菌中鄰苯二酚大多數(shù)鄰位裂解途徑進(jìn)行，生成β酮己二酸后，最終生成乙酰CoA和琥珀酸，再進(jìn)一步通過三羧酸循環(huán)氧化成CO2和H2O。本實(shí)驗(yàn)通過幾種微生物對(duì)苯酚的轉(zhuǎn)化，具體認(rèn)識(shí)微生物在降解有機(jī)質(zhì)、清除環(huán)境污染物中的作用。操作步驟如下：（1）以無菌操作分別將產(chǎn)氣桿菌和大腸桿菌接種在蛋白胨水培養(yǎng)中，置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h。另外保留一支不接種的石蕊牛乳培養(yǎng)基作對(duì)照。（4） 酸凝固 細(xì)菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使牛乳變紅，當(dāng)酸度很高時(shí)，可使牛乳凝固。石蕊中性時(shí)呈淡紫色，酸性時(shí)呈粉紅色，堿性時(shí)呈藍(lán)色，還原時(shí)則部分或全部褪色變白。（4）觀察結(jié)果時(shí)，注意觀察平板上長(zhǎng)菌的地方，如出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，即說明脂肪已被水解，此為陽(yáng)性反應(yīng)。當(dāng)細(xì)菌分解脂肪產(chǎn)生脂肪酸