[基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)]核酸疫苗及免疫研究進(jìn)展(文件)
【正文】 定義 核酸疫苗 (nucleic acid vaccine),也稱基因疫苗 (geic vaccine),是指一類將抗原基因重組到表達(dá)載體上的重組質(zhì)粒疫苗，經(jīng) 肌肉注射 或黏膜免疫等方法導(dǎo)入宿主體內(nèi)，通過(guò)宿主細(xì)胞表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。 ? 1995年 4月 69日，美國(guó)弗吉尼亞州。WHO主辦。 ? 1992年 Tang等將表達(dá)人生長(zhǎng)激素的基因質(zhì)粒 DNA導(dǎo)入小鼠皮內(nèi)，小鼠產(chǎn)生特異性抗體，從而提出了基因免疫的概念。故基因疫苗應(yīng)運(yùn)而生。 人們將多種滅活或減毒疫苗稱為 第一代疫苗 。 將用基因工程的方法研制的亞單位疫苗稱為 第二代疫苗 。 基因疫苗被稱為 第三代疫苗 。 ? 1993年 Ulmer等將注射技術(shù)用于研究流感核酸疫苗，證實(shí)核酸注射不但能在體內(nèi)表達(dá)抗原蛋白，還可以誘導(dǎo)具有顯著保護(hù)作用的免疫應(yīng)答。主題：核酸疫苗。主題： DNA疫苗：疫苗學(xué)的新時(shí)代。 基因疫苗的構(gòu)建 基因疫苗構(gòu)建的基本途徑 基因疫苗的構(gòu)建 一、構(gòu)建基因疫苗的載體 載體是將抗原基因?qū)氲綑C(jī)體細(xì)胞的必要工具。 連接的方式可分為 粘性末端連接 和 平末端連接 兩種，其中前者連接效率較高，使用比較多。 感受態(tài)：細(xì)菌經(jīng)過(guò) CaCl2溶液處理和短暫熱激后，容易攝入外源 DNA，這種狀態(tài)稱為感受態(tài)。 基因疫苗的構(gòu)建 一般重組質(zhì)粒鑒定主要按照表型篩選、酶切鑒定和測(cè)序鑒定的順序進(jìn)行 （ 1）插入片段鑒定：酶切鑒定； PCR鑒定。 （ 2）核酸水平的檢測(cè)： RNA印跡； RTPCR檢測(cè)。 而且在免疫動(dòng)物時(shí)比較方便，尤其是大面積預(yù)防時(shí)，所以關(guān)于基因疫苗通過(guò)皮膚或黏膜免疫激活機(jī)體免疫反應(yīng)機(jī)制的研究也比較活躍。基因疫苗經(jīng)過(guò)黏膜免疫可以很好地激活 B細(xì)胞分泌 IgA，同時(shí)啟動(dòng) Th2細(xì)胞功能，但其對(duì)細(xì)胞免疫（尤其是 CTL細(xì)胞）活化不足，通過(guò)黏膜免疫獲得的保護(hù)作用不如通過(guò)肌肉免疫獲得的強(qiáng)烈。 攜帶基因疫苗重組減毒沙門(mén)氏菌誘發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答的機(jī)制 重組減毒沙門(mén)氏菌攜帶的基因疫苗激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫的機(jī)制還不完全清楚 。 核酸疫苗的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： 1 免疫保護(hù)力增強(qiáng) 2 制備簡(jiǎn)單，省時(shí)省力 3 同種異株交叉保護(hù) 4 應(yīng)用較安全 5 產(chǎn)生持久免疫應(yīng)答 6 貯存、運(yùn)輸方便 7 可用于防治腫瘤 缺點(diǎn)： 1 質(zhì)粒 DNA可能誘導(dǎo)自身免疫反應(yīng) 2 持續(xù)表達(dá)外源抗原可能產(chǎn)生一些不良后果 3 肌肉注射質(zhì)粒后，僅有很少部分被肌細(xì)胞所攝取 4 影響核酸疫苗誘發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答的因素很多 ５外源 DNA注入體內(nèi)后，可能整合到宿主基因組上，使宿主細(xì)胞抑癌基因失活或癌基因活化，使宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞 核酸疫苗的應(yīng)用現(xiàn)狀 ? 有關(guān)質(zhì)粒 DNA疫苗在人類及動(dòng)物產(chǎn)生預(yù)防和治療作用的研究報(bào)道不斷增加，應(yīng)用范圍也逐漸擴(kuò)大。它的研究具有深遠(yuǎn)意義，可用于細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等多種疾病的防治，其多價(jià)、高效、廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)使其潛在的應(yīng)用價(jià)值不可估量。 四 、 核酸疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng) 核酸疫苗誘導(dǎo)的全身免疫應(yīng)答反應(yīng) 關(guān)于核酸疫苗誘導(dǎo)全身免疫應(yīng)答反應(yīng)的機(jī)制目前了解的還不十分清楚 ， 但其誘導(dǎo)過(guò)程可大致分為以下幾個(gè)階段： ① 疫苗的攝取 、 轉(zhuǎn)運(yùn)及表達(dá)； ② 抗原的加工和提呈； ③ 淋巴細(xì)胞的活化； ④ 免疫效應(yīng)細(xì)胞和分子的作用 。 間接免疫熒光法 重組質(zhì)粒 pTARGEThanS體外瞬間表達(dá) : 核蛋白的瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果 作為 DNA免疫的注射樣品 。 IL4加強(qiáng)體液免疫 IL2能同時(shí)加強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫 集落刺激因子 與基因重組疫苗聯(lián)合應(yīng)用 050010001500202225003000350040005d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationIFNr pg/ml+ +S+S+pcIL12 +S(ISS)細(xì)胞因子產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化 0200400600800100012005d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationIL4 pg/ml+ +s+S+p IL12 +S+ISS細(xì)胞因子產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化 024681 01 21 41 61 85 d 1 0 d 1 7 d 3 5 d 4 2 dd a y s a f t e r p r i m a r y i m m u n i z a t i o nnumber of splenocytes(10^7)p c D N A 3 . 1 + S + p c I L 1 2 p c D N A 3 . 1 + S ( I S S )p c D N A 3 . 1 + S p c D N A 3 . 1 +免疫鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng) 015d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationOD 450 nm+S(ISS)+S+S+pcIL12+血清特異性抗體的檢測(cè)結(jié)果 血清特異性抗體的檢測(cè)結(jié)果 02468101214165d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationnumber of splenocytes(10^7)+S+B7+S++B7+S+免疫鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng) 011Stimulation
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