細(xì)菌的遺傳與變異-醫(yī)學(xué)微生物學(xué)(文件)
【正文】 四、微生物基因組學(xué) 細(xì)菌全基因組序列測(cè)定完成后，更重要的任務(wù)是鑒定基因及盡可能確定基因的功能，稱之為 后基因組學(xué) 。 通過測(cè)定多種致病與非致病微生物的基因組序列，可以獲得大量的基因信息。 四、微生物基因組學(xué) 病原菌全基因組序列的測(cè)定，還可大大加速新疫苗的研制。 四、微生物基因組學(xué) 隨著微生物基因組被解碼和微生物功能基因組的研究與開發(fā)，微生物學(xué)正面臨著 革命性的飛躍 。 五、基因工程菌株的構(gòu)建 幽門螺桿菌 （ Helicobacter pylori， Hp）是慢性活動(dòng)性胃炎和消化性潰瘍的致病菌，并與胃腺癌 和胃部淋巴瘤的 發(fā)生密切相關(guān)。 五、基因工程菌株的構(gòu)建 ● 全菌滅活疫苗 ● 亞單位疫苗 由于以上疫苗各自的缺陷，目前尚無(wú)安全、有效的疫苗應(yīng)用于臨床。大小為，含紅霉素耐藥基因、 P32啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 prtp轉(zhuǎn)錄終止子。 五、基因工程菌株的構(gòu)建 構(gòu)建高效表達(dá)幽門螺桿菌保護(hù)性抗原 黏附素的重組嗜酸乳酸菌，作為 活載體口服疫苗 ，誘發(fā)有效的局部免疫應(yīng)答，保護(hù)機(jī)體抵抗感染。目前主要采用的抗生素療法（三聯(lián)藥物 :埃索美拉唑＋阿莫西林＋克拉霉素 ）的療效不甚理想，易復(fù)發(fā)。 四、微生物基因組學(xué) 一、細(xì)菌遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ) 二、細(xì)菌的基因突變 三、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 四、微生物基因組學(xué) 五、 基因工程菌株的構(gòu)建 細(xì)菌的遺傳與變異 目的基因 ＋ 重組質(zhì)粒 轉(zhuǎn)化 → 目的蛋白 五、基因工程菌株的構(gòu)建 重組 DNA技術(shù) 基因工程菌 五、基因工程菌株的構(gòu)建 質(zhì)粒作為一種獨(dú)立的復(fù)制子，容易從細(xì)胞中分離出來(lái)、在體外進(jìn)行遺傳操作和轉(zhuǎn)入到合適的受體細(xì)胞中，表達(dá)外源目的基因。 將抗原或表位編碼基因在合適的載體系統(tǒng)中表達(dá)，分離純化目的抗原或表位。 四、微生物基因組學(xué) 圖 2 引物特異性單重 PCR電泳結(jié)果 m 100bp Marker， 1 CMCC51252, 2 CMCC51572, 3 CMCC51592, 4 GIMShi1, 5 GIMShi2, 6 ATCC9027, 7 ATCC15442, 8 CMCC10104, 9 GIMPs, 10 ATCC43889, 11 GDCIQO1571, 12 GDCIQO1572, 13 CMCC50093, 14 CMCC50071, 15 CMCC50115, 16 CMCC47001, 17 GIMVp, 18 GDCIQVp （ 3）開發(fā)新型抗菌藥物 病原菌全基因組序列的測(cè)定，一方面，能揭示細(xì)菌耐藥的確切機(jī)制，對(duì)現(xiàn)有抗菌藥物進(jìn)行改造或開發(fā)新型藥物。 （ 1）揭示病原微生物的致病機(jī)制 四、微生物基因組學(xué) 從分子和細(xì)胞水平上，揭示微生物與宿主之間的相互作用，更深入地闡明病原微生物的致病機(jī)制，諸如毒素作用機(jī)制、宿主細(xì)胞中微生物的受體，侵入細(xì)胞內(nèi)微生物的定位和新表位的發(fā)現(xiàn)，對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的反應(yīng)等。 首先，用超聲波將細(xì)菌染色體 DNA隨機(jī)切割成一定大小的 DNA片段，插入到測(cè)序載體（質(zhì)粒）中，以構(gòu)建 DNA文庫(kù)， 進(jìn)行大規(guī)模的測(cè)序， 對(duì) DNA序列加以拼接。 ● 在插入部位引入一個(gè)或多個(gè)新的基因 （如耐藥基因、毒素基因。 三、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 假噬菌體 供體菌 當(dāng)“假噬菌體”（轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體） 再度感染受體菌時(shí)，將供體菌 DNA帶入受體菌內(nèi)。 三、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 溶原性細(xì)菌能正常以二分裂方式繁殖，前噬菌體也一代一代傳下去。 三、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 （ 2）噬菌體 （ phage） （ 3）溫和噬菌體 烈（毒）性噬菌體 （ virulent phage） ：噬菌體在宿主菌體內(nèi)復(fù)制增殖，產(chǎn)生大量子代噬菌體，并最 終裂解細(xì)菌，建立 溶菌周期。 ● 分為頭部和尾部。其中一條鏈被降解產(chǎn)生能量；另一條鏈與特異 DNA結(jié)合蛋白形成復(fù)合物，進(jìn)入菌體內(nèi)。 三、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 轉(zhuǎn)化 （ transfo
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