【正文】 成 。 ?前體 mRNA分子的斷裂和加多聚腺苷酸尾是多步驟過程 。 斷裂基因 (splite gene) C A B D 編碼區(qū) A、 B、 C、 D 非編碼區(qū) 目錄 外顯子 (exon)和內(nèi)含子 (intron) ? 外顯子： 在斷裂基因及其初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達為成熟 RNA的核酸序列。 1. 內(nèi)含子在剪接接口處剪除 ? 大多數(shù)內(nèi)含子都以 GU為 5?端的起始 ， 而其末端則為 AGOH3?。 ?剪切 指的是剪去某些內(nèi)含子后 ， 在上游的外顯子 3?端直接進行多聚腺苷酸化 ， 不進行相鄰外顯子之間的連接反應 。 ? RNA編輯作用說明 ， 基因的編碼序列經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后加工 ， 是可有多用途分化的 ， 因此也稱為 分化加工 (differential RNA processing)。 I型內(nèi)含子以游離的鳥嘌呤核苷或鳥嘌呤核苷酸作為輔因子完成剪接 。 這類內(nèi)含子的剪接與前面介紹的前體 mRNA內(nèi)含子剪接相同 ， 但是沒有剪接體參與 目錄 I和 II型內(nèi)含子的剪切 目錄 五、 RNA在細胞內(nèi)的降解有多種途徑 ? 正常轉(zhuǎn)錄物和異常轉(zhuǎn)錄物的降解途徑有一定差異 。 當細胞以 mRNA為模板進行蛋白質(zhì)合成時 ， 翻譯起始因子 eIF4E、 eIF4G和 3? poly(A)結(jié)合的 PABP等相互作用而形成封閉的環(huán)狀結(jié)構(gòu) ， 防止來自脫腺苷酸化酶 （ deadenylase） 和脫帽酶 （ decapping enzyme）的攻擊 ， 以保證 mRNA的穩(wěn)定 。 。 目錄 依賴于脫腺苷酸化的 mRNA降解 目錄 （二）無義介導的 mRNA降解是重要的真核細胞 mRNA質(zhì)量監(jiān)控機制 真 核 細 胞 mRNA 的 異 常 剪 接 可 能 會 產(chǎn) 生 無義（ nonsense） 的終止密碼子 ， 由此產(chǎn)生的 mRNA降解稱為無義介導的 mRNA降解 （ nonsensemediated mRNA decay, NMD） ， 是廣泛存在的 mRNA質(zhì)量監(jiān)控的重要機制 。 ? 但細胞內(nèi)少部分正常 mRNA也可經(jīng)由無義介導的途徑降解 。 這種轉(zhuǎn)酯反應與前述的mRNA內(nèi)含子剪接的轉(zhuǎn)酯反應類似 ， 不過參與反應的不是分支點 A的 2?OH， 切除的內(nèi)含子是線狀 ， 而不是 “ 套索 ” 狀。 這種由RNA分子催化自身內(nèi)含子剪接的反應稱為 自剪接 （ selfsplicing） 。 目錄 6. 前體 mRNA分子可發(fā)生可變剪接 許多前體 mRNA分子經(jīng)過加工只產(chǎn)生一種成熟的 mRNA， 翻譯成相應的一種多肽；有些則可剪切或 （ 和 ） 剪接加工成結(jié)構(gòu)有所不同的 mRNA，這一現(xiàn)象稱為 可變剪接 （ alternative splicing） ，又稱 選擇性剪接 。 ? 剪接后 ， GU或 AG不一定被剪除 。 目錄 雞卵清蛋白成熟 mRNA與 DNA雜交電鏡圖 DNA mRNA 雞卵清蛋白基因 hnRNA 首、尾修飾 hnRNA剪接 成熟的 mRNA 雞卵清蛋白基因及其轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾 目錄 1. 內(nèi)含子形成套索 RNA被剪除 ? 剪接首先涉及套索 RNA（ lariat RNA） 的形成 ， 即內(nèi)含子區(qū)段彎曲 ， 使相鄰的兩個外顯子互相靠近而利于剪接 。 核酸序列分析證明 ， mRNA來自 hnRNA， 而 hnRNA和 DNA模板鏈可以完全配對 去除初級轉(zhuǎn)錄物上的內(nèi)含子，把外顯子連接為成熟RNA的過程稱為 mRNA剪接（ mRNA splicing） 。 ?poly A的有無與長短 ， 是維持 mRNA作為翻譯模板的活性 ， 以及增加 mRNA本身穩(wěn)定性的因素 。 目錄 （一）前體 mRNA在 5?末端加入“帽”結(jié)構(gòu) ?大多數(shù)真核 mRNA的 5?末端有 7甲基鳥嘌呤的帽結(jié)構(gòu) 。 3? mRNA 轉(zhuǎn)錄終止 —— 和轉(zhuǎn)錄后修飾密切相關(guān)。 已發(fā)現(xiàn) ， 在讀碼框架的下游 ， 常有一組共同序列 AATAAA，再下游還有相當多的 GT序列 。 ?轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象 。 ?拼板理論 (piecing theory) ： 少數(shù)幾個反式作用因子 （ 主要是可誘導因子和上游因子 ） 之間互相作用 ， 再與基本轉(zhuǎn)錄因子 、 RNA聚合酶搭配而有針對性地結(jié)合 、 轉(zhuǎn)錄相應的基因 。 ? 當合成一段含有 60～ 70個核苷酸的 RNA時， TFIIE和TFIIH釋放， RNA pol II進入轉(zhuǎn)錄延長期。 目錄 目錄 ? TFIIH具有解旋酶（ helicase）活性，能使轉(zhuǎn)錄起點附近的 DNA雙螺旋解開，使閉合轉(zhuǎn)錄復合體成為開放轉(zhuǎn)錄復合體，啟動轉(zhuǎn)錄。 目錄 ?能直接 、 間接辨認和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段 DNA的蛋白質(zhì) ， 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)數(shù)百種 ， 統(tǒng)稱為 反式作用因子 (transacting factors)。 ? 與原核生物的顯著不同是 ， 起始和延長過程都需要眾多相關(guān)的蛋白質(zhì)因子參與 ， 這些因子被稱為 轉(zhuǎn)錄因子（ transcriptional factors, TF） 或 反式作用因子 （ transacting factors） 。 ?RNA聚合酶 Ⅱ 最大亞基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)為 TyrSerProThrSerProSer的重復序列片段 ， 稱為羧基末端結(jié)構(gòu)域 (carboxylterminal domain, CTD)。 目錄 一、 真核生物有三種 DNA依賴的RNA聚合酶 ? 真核生物具有 3種不同的 RNA聚合酶 : ? RNA聚合酶 Ⅰ （ RNA PolⅠ ） ? RNA聚合酶 Ⅱ （ RNA PolⅡ ） ? RNA聚合酶 Ⅲ （ RNA Pol Ⅲ ） 目錄 真核生物的 RNA聚合酶 種類 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 rRNA的前體 45S rRNA mRNA前體 hnRNA, lncRNA, piRNA, miRNA tRNA, 5S rRNA snRNA 對鵝膏蕈堿的反應 耐受 敏感 高濃度下敏感 細胞內(nèi)定位 核仁 核內(nèi) 核內(nèi)