乳酸菌畢業(yè)設(shè)計(jì)論(文件)
【正文】 頁(yè) 第 1 章 前言 乳酸菌指發(fā)酵 糖類 主要產(chǎn)物為乳酸的一類無(wú)芽孢、革蘭氏染色陽(yáng)性細(xì)菌的總稱。目前已被國(guó)內(nèi)外生物學(xué)家所證實(shí)，腸內(nèi)乳酸菌與健康長(zhǎng)壽有著非常密切的直接關(guān)系 。 1. 1 乳酸菌的生理功能 在人體腸道內(nèi)棲息著數(shù)百種的細(xì)菌，其數(shù)量超過(guò)百萬(wàn)億個(gè)。 而人體腸道內(nèi)乳酸菌擁有的數(shù)量，隨著人的年齡增長(zhǎng)會(huì)逐漸減少，當(dāng)人到老年或生病時(shí)，乳酸菌數(shù)量可能下降 100 至 1000 倍，直到老年人臨終完全消失。所以，有意增加人體腸道內(nèi)乳酸菌的數(shù)量就顯得非常重要。 促進(jìn) 蛋白質(zhì) 、 單糖 及 鈣 、 鎂 等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生 維生素 B 族 等大量有益物質(zhì)。 免疫調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)人體 免疫力 和 抵抗力 。 乳酸菌的類型 乳酸菌大體上可分為兩大類。 乳 酸菌的研究歷史 早在 20 世紀(jì)初， 俄國(guó) 著名的生物學(xué)家梅契尼柯夫（ Mechnikoff,18451916），在他獲得諾貝爾獎(jiǎng)的 “ 長(zhǎng)壽學(xué)說(shuō) ” 里已明確指出，保加利亞的 巴爾干 島地區(qū)居民，日常生活中經(jīng)常飲用的酸奶中含有大量的乳酸菌，這些乳酸菌能夠定植 在人體內(nèi)，有效地抑制有害菌的生長(zhǎng)，減少由于腸道內(nèi)有害菌產(chǎn)生的毒素對(duì)整個(gè)機(jī)體的毒害，這是保加利亞地區(qū)居民長(zhǎng)壽的重要原因。到目前為止，人類日常食用的 泡菜 、酸奶、 醬油 、豆豉等，都是應(yīng)用乳酸菌這種原始而簡(jiǎn)單的隨機(jī)天然發(fā)酵的代謝產(chǎn)物。乳酸菌是正常人畜腸道中極為重要的生理菌群，擔(dān)負(fù)著人畜機(jī)體多種重要的生理功能 ，具有維持人體中微生態(tài)平衡作用。本實(shí)驗(yàn)欲從進(jìn)口干酪中分離乳酸菌，并研究各種乳酸菌對(duì)食品中常見(jiàn)致病菌的抑制作用。 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 共 14 頁(yè)，第 4 頁(yè) 第 2 章 材料與方法 材料 樣品 市售進(jìn)口奶酪 培養(yǎng)基 BCG 培養(yǎng)基： A、 B 液滅菌后混勻。 H2O 、 MgSO4 PY 培養(yǎng)基（ 100mL） ： 蛋白胨 ， 酵母提取物 ， 無(wú)機(jī)鹽溶液 （ 鹽溶液成分 :無(wú)水 CaCl2 ， MgSO4 ， K2HPO4 ， KH2PO4 ，NaHCO3 ， NaCl ， 將 CaCl2和 MgSO4一起溶解于 300mL 蒸餾水中 ， 再加 500mL 蒸餾水 ， 一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類 ， 繼續(xù)攪拌直到全部溶解 ，加蒸餾水定容至 1000mL， 混合后貯備于 4℃ )。 試劑 脫脂奶粉：光明乳 業(yè)股份有限公司； %溴甲酚綠酒精溶液：自配； 瓊脂：生化試劑 ,福建泉州市泉港化工廠； 酵母膏：生化試劑 ,原上海酵母廠； 蛋白胨：生化試劑 ,上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站中心化工廠； 牛肉膏：生化試劑 ,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司； 葡萄糖：分析純?cè)噭?,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 共 14 頁(yè)，第 5 頁(yè) 乙酸鈉：分析純?cè)噭?,成都科龍化工試劑廠； 檸檬酸三銨：分析純?cè)噭?,上海試四赫維化工有限公司； 磷酸氫二鉀：分析純?cè)噭?,上海光鏵科技有限公司； MgSO4 樣品的處理 奶酪的 處理 ：以無(wú)菌操作取奶酪 1g，放入含有 9mL 滅菌加熱至含 40℃左右的 生理鹽水的滅菌廣口瓶?jī)?nèi)，待奶酪溶解制成 1:10 的均勻稀釋液，并用無(wú)菌生理鹽水逐級(jí)稀釋至 10 10 105。 革蘭氏染色 洗片→載玻片上滴一滴蒸餾水→玻璃棒蘸取一滴菌液在玻片上→晾干→結(jié)晶紫初染 1min→水洗→晾干→碘液媒染 30s→水洗→晾干→ 95%酒精脫色 20s→水洗→晾干→番紅復(fù)染→水洗→晾干→鏡檢。 過(guò)氧化氫酶溶解在 50mmol /L 的磷酸緩沖液 ( pH= )中配成母液 ,加入到發(fā)酵液中使過(guò)氧化氫酶的終濃度為 5mg/mL,在 37℃水浴中溫育 2h后取出 ,檢測(cè)過(guò)氧化氫酶處理后發(fā)酵液的抑菌活性。 生理生化實(shí)驗(yàn) 過(guò)氧化氫酶測(cè)定 將實(shí)驗(yàn)菌接種于 PYG 培養(yǎng)基斜面上 ， 37℃ 培養(yǎng) 20h— 24h， 取一環(huán)接種的培養(yǎng)物 ， 涂于干凈的載玻片上 ， 然后在其上滴加 3%－ 15%的過(guò)氧化氫 ， 有氣泡則為陽(yáng)性反應(yīng) ， 無(wú)氣泡為陰性反應(yīng)。含精氨酸培養(yǎng)中的培養(yǎng)液與試劑的反應(yīng)顯示強(qiáng)于對(duì)照液才能認(rèn)為是陽(yáng)性反應(yīng)。如對(duì)照管凝固時(shí)，接種管液化為陽(yáng)性反應(yīng)，凝固為陰性反應(yīng)。用濃度為 50~100g/L 的乙酸鉛將紙條浸透，然后置于烘干，放入培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，滅菌后備用。另外接種已知菌的陰性反應(yīng)作對(duì)照。檢測(cè)時(shí)取培養(yǎng)液少許置于比色盤(pán)內(nèi) ， 同時(shí)取未加碳水化合物的 PY 培養(yǎng)液作為對(duì)照 ， 滴加試劑比較顏色的變化 ， 記錄產(chǎn)酸的強(qiáng)弱 。其中， GL5 抑菌效果最佳，如圖 1所示。發(fā)酵上清液用過(guò)氧化氫酶處理 ,以未經(jīng)過(guò)氧化氫酶處理的發(fā)酵上清液為對(duì)照 ,以金黃色葡萄球菌為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn) ,結(jié)果見(jiàn)表 3。 b. “ +”表示陽(yáng)性反應(yīng)；“ ”表示陰性反應(yīng)。 根據(jù)生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果，參考資料 [6， 7]，經(jīng)過(guò)刪選比對(duì)，菌株 GL5 的生理生化特性與干酪乳桿菌最相似。 通過(guò)對(duì) 5 種指示菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，通過(guò)管碟法抑菌實(shí)驗(yàn)篩選出一種來(lái)源于進(jìn)口奶酪的抑致病菌活性較高的乳酸菌 GL5。中國(guó)乳品工業(yè)， 1998，（ 1）： 3032. 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 共 14 頁(yè)，第 14 頁(yè) [4] 吳玲，潘道東，劉海燕 .瑞士乳桿菌凍干保護(hù)劑的選擇 .食品與機(jī)械， 2021，26（ 1）： 157159. [5] 姚麗婭 ,徐為民 ,諸永志 .產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的篩選及鑒定 .食品工業(yè) 科技，2021， 29（ 1）： 160164. [6] 凌代文 .乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法 [M].北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社， 1999：616． [7] 布坎南 RE， 吉布斯 NE. 伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè) （第八版） [M]. 第 8 版 , 北京 : 科學(xué)出版社 , 1984: 797808.常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 。
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