【正文】 共同介導(dǎo)的對(duì)肌肉發(fā)育調(diào)控的信號(hào)傳導(dǎo)通路。 初步 構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子和功能基因轉(zhuǎn)錄之間的調(diào)控關(guān)系和 數(shù)學(xué) 模型。同時(shí)利用Solexa 測(cè)序和 ChIP 技術(shù)，重點(diǎn)解析表觀遺傳特別是甲基化水平對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。研究腎上腺素、胰島素、糖皮質(zhì)激素等、脂肪細(xì)胞因子、以及 PPAR 代謝性核受體配體藥物等對(duì)脂肪分解的調(diào)控作用和機(jī)制，并由此揭示脂肪生成、分化、以及分解代謝的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和機(jī)制。闡明肌肉和 脂肪前體干細(xì)胞分化過程中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄輔助因子，參與細(xì)胞分化和成熟的調(diào)控機(jī)制。 17 闡明脂肪、蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵基因和關(guān)鍵酶類對(duì)肌肉、脂肪生長(zhǎng)發(fā)育以及對(duì)肉品質(zhì)的 影響，明確各發(fā)育時(shí)期脂肪、蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵基因和關(guān)鍵酶的調(diào)控機(jī)制。 品種（系）間骨骼肌和脂肪發(fā)育差異關(guān)鍵基因鑒定及其 SNP 和表觀遺傳學(xué)分析 18 結(jié)合生物信息學(xué)手段，采用基因組部分測(cè)序和高通量 SNP 芯片技術(shù)，全面比較瘦肉型 外來品種與脂肪型優(yōu)質(zhì)地方品種及速生型與慢生型豬，蛋用型和肉用型以及高脂系和低脂系雞的肌肉或脂肪組織之間的、數(shù)據(jù)庫中已公布 SNP 位點(diǎn)的差異，結(jié)合內(nèi)容 1 中分析獲得的表型數(shù)據(jù)，利用群體法建立全基因組關(guān)聯(lián)分析（ Genomewide association GWA）模型，通過生物信息學(xué)分析初步獲取影響品種間表型變異的基因或位點(diǎn)。 重要基因的功能研究及其在醫(yī)學(xué)以及動(dòng)物育種中的意義 利用 反向遺傳學(xué)技術(shù)，結(jié)合構(gòu)建的各種細(xì)胞系，研究骨骼肌和脂肪發(fā)育相關(guān)關(guān)鍵基因的生物學(xué)功能，通過構(gòu)建小型豬醫(yī)學(xué)模型，研究這些因子的生理學(xué)作用，初步確定在人類醫(yī)學(xué)應(yīng)用的價(jià)值。 揭示不同品種（系）肌肉或脂肪組織的之間的轉(zhuǎn)錄和蛋白組差異。 LATS2 基因克隆，研究在肌肉中的表達(dá)譜；研究 PPARγ 和糖皮質(zhì)激素及代謝性核受體調(diào)節(jié)脂肪代謝的分子機(jī)制。 對(duì)不同品種（系）豬和雞骨骼肌和脂肪組織及細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白進(jìn)行分析，尋找差異表達(dá)基因與蛋白。 完成 LATS2 基因的克隆及相關(guān)分析； 初步揭示 PPARγ 和糖皮質(zhì)激素及其代謝性核受體調(diào)節(jié)脂肪代謝的分子機(jī)制。 完成轉(zhuǎn)基因雞載體系統(tǒng)構(gòu)建。建立豬骨骼肌和雞前脂肪細(xì)胞小RNA 文庫，并鑒定品種（系）間豬和雞骨骼肌和脂肪組織差異表達(dá)miRNA，分析 其 在骨骼肌和脂肪生長(zhǎng)發(fā)育中的功能。 Mapping Solexa 測(cè)序結(jié)果，獲取雞全基因組甲基化圖譜。 揭示骨骼肌和脂肪干細(xì)胞分化過程中的基因表達(dá) 譜和蛋白質(zhì)組的變化；確定骨骼肌和脂肪干細(xì)胞分化過程中的候選功能基因與分子標(biāo)志 15個(gè)以上。 建立基因（ miRNA）導(dǎo)入技術(shù)； 構(gòu)建 24 個(gè)打靶載體和 24 個(gè)轉(zhuǎn)基因載體。 揭示幾種激素和外在因素對(duì)脂肪代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制。 克隆豬的 Perilipin 及 PPARγ 相關(guān)基因。 揭示 10 個(gè)以上功能基因與標(biāo)志性分子在不同品種（品系）豬、雞骨骼肌和脂肪干細(xì)胞分化過程中的表達(dá)差異；闡明它們?cè)诠趋兰『椭靖杉?xì)胞分化過程中的功能及作用機(jī)制。 克隆豬的 Perilipin 及 PPARγ 相關(guān)基因。 發(fā)表 SCI 論文 10 篇以上，其中影響因子大于 5 的 SCI 論文 46 篇。 分離培養(yǎng)瘦肉型及脂肪型豬種的骨骼肌細(xì)胞，并構(gòu)建高轉(zhuǎn)染率的骨骼肌重要發(fā)育分化調(diào)控因子 SMADCNTF及 CNTFR和 miR24 高表達(dá)或低表達(dá)的骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)體系。 闡明 miRNA 靶基因 35 個(gè)， 闡明 24 個(gè)特定 miRNA 在肌肉、脂肪發(fā)育中的功能和對(duì)其信號(hào)通路的調(diào)節(jié)方式。 24 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 五 年 研究?jī)?nèi)分泌、旁（自）分泌等信號(hào)分子對(duì)候選標(biāo)志分子表達(dá)的調(diào)控作用及表觀遺傳學(xué)修飾；采用特定細(xì)胞內(nèi)信 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激動(dòng)劑和阻斷劑處理，研究信號(hào)分子調(diào)控作用的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，探討信號(hào)分子之間可能存在的相互作用模式。 課題總結(jié)。 提出較系統(tǒng)的 miRNA 對(duì)肌肉、脂肪發(fā)育調(diào)控機(jī)制。申報(bào)國家專利 48 項(xiàng)。 提交課題總結(jié)報(bào)告。 鑒 定出對(duì)豬、雞性狀有顯著效應(yīng)的相關(guān)基因 510 個(gè)，闡明 12 個(gè)功能性 SNP 的作用機(jī)制。 脂肪的代謝組學(xué)的探索及其對(duì)肉質(zhì)性狀的研究。 獲得 第 二代 miRNA 雞。 進(jìn)行 miRNA 雞 F1 代培育，研究分析 miRNA 雞的遺傳穩(wěn)定性。開 展影響產(chǎn)肉性狀基因進(jìn)行的 SNP 分析。 確定 14 個(gè) miRNA（或 cluster）的靶基因，闡明 12 個(gè)特定 miRNA在肌肉、脂肪發(fā)育中的功能和對(duì)其信號(hào)通路的調(diào)節(jié)方式，鑒定 510 個(gè)差異表達(dá) miRNA 并闡明他們?cè)诩∪夂椭炯?xì)胞增殖和分化中的作用。 繼續(xù)完善高低脂系相關(guān)基因表達(dá)水平與關(guān)鍵基因的相關(guān)性分析。 研究 miRNA 對(duì)骨骼肌和脂肪干細(xì)胞增殖、分化的調(diào)節(jié)；研究豬、雞種（系）間 miRNA 的表達(dá)差異。 22 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 三 年 研究選定的重要功能基因和信號(hào)通路的功能和調(diào)控，分析它們?cè)诓煌贩N（品系）豬、雞骨骼肌和脂肪干細(xì)胞分化過程中的表達(dá)差異；采用RNAi 和過表達(dá)技術(shù)確定它們?cè)诠趋兰『椭靖杉?xì)胞分化過程中的功能；采用報(bào)告基因和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控策略研究關(guān) 鍵分子標(biāo)志調(diào)控下游基因表達(dá)及其作用的信號(hào)通路。完成 SMAD CNTF 及CNTFR 和 miR 24 等在瘦肉型及脂肪型豬種中的表達(dá)譜差異。 建立 豬骨骼肌和雞前脂肪細(xì)胞的小 RNA 文庫，確定 28 個(gè) miRNA的靶基因，闡明 12 個(gè)特定 miRNA在肌肉、脂肪發(fā)育中的功能和對(duì)其信號(hào)通路的調(diào)節(jié)方式。 檢測(cè)脂肪細(xì)胞系及活體（高低脂系）相關(guān)基因表達(dá)水平，并建立關(guān)鍵基因與脂肪水平的相關(guān)性。 體外細(xì)胞過表達(dá) LATS2 對(duì)其功能進(jìn)行研究。 21 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 二 年 運(yùn)用基因表達(dá)譜芯片、蛋白質(zhì)組學(xué) 和 生物信息學(xué)方法，篩選骨骼肌和脂肪干細(xì)胞分化過程中的功能基因和標(biāo)志性分子。 揭示豬、雞骨骼肌和脂肪在胚胎期和出生后的生長(zhǎng)發(fā)育的規(guī)律。 建立豬、雞胚胎干細(xì)胞及成體干細(xì)胞的培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化的技術(shù)方法，著手建立豬、雞肌肉與脂肪干細(xì)胞庫 和 誘導(dǎo)分化模型 。 研究選定品種（系）豬和雞骨骼肌和脂肪組織在胚胎期和出生后的生長(zhǎng)和分化的發(fā)育規(guī)律。 承擔(dān)單位： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 王寧 經(jīng)費(fèi)比例： 21％ 20 四、年度計(jì)劃 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 一 年 建立豬、雞胚胎期肌肉始祖細(xì)胞（ MPC）和間充質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定方法，研究干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的條件與機(jī)制，著手建立豬、雞胚胎干細(xì)胞庫。 主要研究目標(biāo) 了解不同豬種、雞種或品系肌肉或脂肪組織的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律。 品種（系）間骨骼肌和脂肪發(fā)育關(guān)鍵基因表達(dá)和 miRNA 表達(dá)分析 采用寡核苷酸芯片和蛋白質(zhì)雙向電泳 質(zhì)譜技術(shù)全面比較瘦肉型外來品種與脂肪型優(yōu)質(zhì)地方品種豬、速生型與慢生型、蛋用型和肉用型以及高脂系和低脂系肌肉或脂肪組織關(guān)鍵基因的 mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)差異，分析差異表達(dá)基因的功能。 承擔(dān)單位： 北京大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 徐國恒 經(jīng)費(fèi)比例： 24％ 課題 品系間骨骼肌和脂肪發(fā)育差異的分子遺傳學(xué)機(jī)制 主要研究?jī)?nèi)容 骨骼肌和脂肪 發(fā)育的品種（系）特異性 采用比較生物學(xué)策略，系統(tǒng)研究不同豬品種（系）（瘦肉型外來品種與脂肪型優(yōu)質(zhì)地方品種）、雞品種（系）（速生型與慢生型、蛋用型和肉用型、高脂 系和低脂系）肌肉或脂肪組織在胚胎期和出生后的生長(zhǎng)和分化的發(fā)育規(guī)律，研究包括比較品種或品系間的骨骼肌和脂肪細(xì)胞的增殖、分化、凋亡規(guī)律，研究分析不同品種（系）肌肉與脂肪的表觀性狀特點(diǎn)。 闡明 DNA 甲基化和組蛋白乙?；碛^遺傳修飾，調(diào)節(jié)肌肉和脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄輔助因子在肌肉和脂肪組織特異性表達(dá)和時(shí)序性表達(dá)的機(jī)制，及其參與細(xì)胞分化和成熟的調(diào)控機(jī)制。從而闡明脂肪、蛋白質(zhì)代謝途徑的關(guān)鍵基因和關(guān)鍵酶類對(duì)肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育以及對(duì)肉品質(zhì)的影響，同時(shí)，研究各發(fā)育時(shí)期關(guān)鍵基因和關(guān)鍵酶的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 脂肪