胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)(文件)
【正文】 蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，共 5 瓶，最終結(jié)果只有 2 瓶誘導(dǎo)成功，且長(zhǎng)勢(shì)良好，其余 3 瓶均被污染。 可能是因?yàn)榻臃N時(shí)用力將切塊壓入培養(yǎng)基，破壞了培養(yǎng)基，同時(shí)滋生了一系列的好氧細(xì)菌的繁殖；另外，也可能是操作時(shí)沒(méi)有完全掌握無(wú)菌操作技術(shù)以致引入細(xì)菌或真菌，造成污染。 注意看會(huì)有一些小黑點(diǎn)，愈傷組織開(kāi)始老化，部分開(kāi)始分化?？赡苁怯捎冢孩僭谂渲婆囵B(yǎng)基時(shí)，缺乏 某種物質(zhì)或沒(méi)有將培養(yǎng)基混合均勻；②在分裝培養(yǎng)基時(shí)，沒(méi)有進(jìn)行均勻傾倒；③所使用材料沒(méi)有將其表面切除，因其結(jié)構(gòu)被 HgCl2破壞而無(wú)法使組織材料愈傷組織化。 愈傷組織繼代培養(yǎng)中， 注意看會(huì)有一些小黑點(diǎn)，原因是愈傷組織開(kāi)始老化，部分開(kāi)始分化 愈傷組織生長(zhǎng)需要大量的營(yíng)養(yǎng)，由于培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分及水分不能滿(mǎn)足愈傷組織的繼續(xù)生長(zhǎng)和生活，故出現(xiàn)死亡。 4） .切胡蘿卜時(shí)，下方要墊上無(wú)菌濾紙。實(shí)驗(yàn)中要注意考慮這些條件的影響，并采取適當(dāng)?shù)拇胧┛刂坪门囵B(yǎng)條件。 3）、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中無(wú)菌操作是一個(gè)精細(xì)的活，是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。 5）、 親身體 會(huì)了植物組織培養(yǎng)的基本實(shí)驗(yàn)流程，加深了認(rèn)識(shí)，增強(qiáng)了學(xué)習(xí)生物知識(shí)的 興趣，同時(shí)通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所出現(xiàn)的問(wèn)題的分析和討論，加深了對(duì)激素的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用知識(shí)的理解和再認(rèn)識(shí) 。 教師評(píng)語(yǔ)及評(píng)分： 簽名： 年 月 日 。植物組培實(shí)驗(yàn)最重要的是培養(yǎng)科學(xué)的嚴(yán)謹(jǐn)性，通過(guò)這次實(shí)驗(yàn)，收獲匪淺。 4） 、在配培養(yǎng)基時(shí)，也要注意加入藥品的先后順序及藥品濃度和量，嚴(yán)格計(jì)算和稱(chēng)取加量，并注意調(diào)培養(yǎng)基的 PH。 實(shí)驗(yàn)總結(jié) 1）、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要嚴(yán)格的無(wú)菌操作，而且一般歷時(shí)較長(zhǎng)，要將實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的每一部分的操作內(nèi)容記錄下來(lái)，若出現(xiàn)問(wèn)題方便排查問(wèn)題所在。 6） .MS 培養(yǎng)基的特點(diǎn)：①無(wú)機(jī)鹽濃度高；②高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽；③有一定數(shù)量的銨鹽，營(yíng)養(yǎng)豐富；④不需要添加更多的有機(jī)附加物。 2） .植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，必須的前提是：無(wú)菌操作，胡蘿卜肉質(zhì)根（外植體）經(jīng)HgCl2 和酒精消毒后，即認(rèn)為是消 毒干凈，在此后的操作中，要注意對(duì)其用具徹底消毒，操作過(guò)程中動(dòng)作要規(guī)范實(shí)施。外植體經(jīng)過(guò)消毒等處理，可在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再在繼代培養(yǎng)基上可以增殖得到更多更好的愈傷組織。 說(shuō)明在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，一定要注意無(wú)菌操作，否則，任何一個(gè)環(huán)節(jié)染菌都會(huì)導(dǎo)致外植體被污染，實(shí)驗(yàn)失敗。③操作時(shí)，手、三角瓶在盛材料的培養(yǎng)皿上方活動(dòng)，容易把菌帶到材料上。其中， 3 號(hào)胡蘿卜塊已發(fā)黑； 4 號(hào)瓶呈浮云狀，長(zhǎng)有大量的霉菌，雖然胡蘿卜塊未被污染，但不能用了； 5 號(hào)明顯長(zhǎng)菌，也是和 3 號(hào)瓶一樣被細(xì)菌污染了。 6．參考文獻(xiàn)： [1]. 李浚明，朱登云 .植物組織培養(yǎng)（第 3 版） .中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社 .2021,2. [2]. 孫靜三 ， 桂耀林 .植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)技術(shù) .北京 ： 科學(xué)出版社 ， 1995. [3].王連清主編 .植物組織培養(yǎng) .北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2021. [4].潘瑞熾主編 . 植物組織培養(yǎng)（第三版） .廣州：廣東高等教育出版社， 2021. [5].郭勇，崔堂兵，謝秀幀編著 . 植物細(xì)胞培養(yǎng)與應(yīng)用 .北京：科學(xué)出版社， 2021. [6].曹孜義，劉國(guó)民主編 . 實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程 .蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社， 2021. 二 ． 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與結(jié)果 1） 、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象 胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)，在恒溫箱全黑條件下培養(yǎng) 1 周就可看出誘導(dǎo)結(jié)果， 12 周可用于繼代培養(yǎng)。 2）保存在低溫條件下。切勿為急于取出培養(yǎng)基而打開(kāi)放氣閥放氣，否則鍋內(nèi)氣壓下降太快會(huì)引起減壓沸騰，導(dǎo)致滅菌鍋內(nèi)各容器中的培養(yǎng)基溢出，造成浪費(fèi)或污染，甚至燙傷工作人員。 2) 裝鍋不可過(guò)滿(mǎn)。 （ 5）胡蘿卜愈傷組織的繼代培養(yǎng) 1）準(zhǔn)備工作 ①接種室的清潔和消毒 ； ②超凈工作臺(tái)的開(kāi)機(jī)和消毒 ； ③解剖刀、鑷子、已滅菌培養(yǎng)皿和濾紙、待用培養(yǎng)基等的準(zhǔn)備 ； ④實(shí)驗(yàn)材料的 準(zhǔn)備（選擇裝有無(wú)污染的已分化出愈傷組織的外植體的三角瓶擺放于凈工作臺(tái)上） 2）愈傷組織繼代培養(yǎng) 將上次接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的無(wú)污染的外植體上產(chǎn)生的生長(zhǎng)狀態(tài)良好、色澤新鮮未褐化的愈傷組織剝離轉(zhuǎn)接到愈傷組織繼代培養(yǎng)基上，放置在 25 ℃全黑暗條件下進(jìn)行愈傷組織的增值培養(yǎng)，以獲得足夠的愈傷組織，作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料。 e) 培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即置于高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。 混勻。 配制流程：（ 胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制） a) 藥品及用具的準(zhǔn)備 b) 培養(yǎng)基配制 （ ）， 放入醫(yī)用口杯中，加入適量的蒸餾水（估計(jì)加入母液后不超過(guò)配
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