體內(nèi)藥物分析培訓講義(ppt63)-醫(yī)藥保健(文件)
【正文】 第四章 體內(nèi)藥物分析方法的建立與評價 一、分析方法 靈敏度 專屬性 光譜法 + + 剛開始應用較多雙波長，導數(shù) 色譜法 +++ +++ HPLC GC 免疫法 ++++ ++ 疫交叉反應，重現(xiàn)性 根據(jù)藥物理化性質，結構特征，藥物濃度，干擾成分大小，實驗目的 二、分析方法的設計依據(jù) 方法的建立 原始方法改進 →創(chuàng)新 創(chuàng)立方法 1． 做好文獻總結 2． 充分了解藥物特征及體內(nèi)狀況 pH、 親脂性 、 溶解度 、 極性 、 光譜特征 、 藥動學參數(shù) 、體內(nèi)代謝情況 3． 明確測定目的 、 要求 目的 4． 結合實驗室條件 設備條件 預處理方法 藥濃監(jiān)測 藥代動力學研究 母體藥物和代謝物 三、分析方法的建立 1． 純品進行測定 確定線性范圍 、 靈敏度 、 反應條件 （ pH、 t、 T） 2． 空白樣品測定 確定空白樣品是否有干擾 3． 以水代替空白樣品 ， 加標準液后測定 了解提取率 、 檢測濃度 確定萃取條件 、 pH、 揮發(fā)濃縮等 4． 空白樣品加入標準液測定 標準曲線建立 回歸方程 回收率 5．實驗樣品測定 四、分析方法的評價 可行性和可靠性 1． 準確度 accuracy 測定結果與真實性的差異 用回收率表示 ① 接近 100% ② 相對恒定 ① 絕對回收率 也稱萃取回收率 、 提取回收率 測定血漿樣品中藥物濃度 /相同濃度的標準液 =絕對回收率 考慮 3個濃度 （ 高 、 中 、 低 ） 分布在標準曲線成上 、 中 、 下 一般要求絕對回收率在 ≥70% 一般方法 HPLC內(nèi)標 內(nèi)標法時注意：藥物與內(nèi)標用各自外標法測定回收率應相近 ，差值 10% ② 相對回收率 方法回收率 藥物系列濃度 +血樣 →標準曲線 取高 、 中 、 低三濃度加入到空白血漿中 ， 處理后測定 ， 與加入標準量相比 ， 得方法回收率 ， 測定值 15%， 定量限 20% 注意問題： a． 加入藥量與實際測定值相近 b． 加入物與實際存在狀態(tài)相近 c． 空白試驗 與已確定方法進行比較 2．精密度 precision ① 標準差 SD ② 相對標準性偏差 RSD不大于 15%， 定量限不大于 20% ② 日間精密度 日內(nèi)精密度 3．靈敏度（ sensitivity） 檢測的最小量 （ 1） 檢測限 （ LOD） 從背景中檢測到的最小藥物濃度： S/N≥3的絕對量 LOD=3N/S （ N噪間 S被測物信號 /單位重量 ） N=1mm 取 2μgmin1 洗脫 ~1ml ? 氧化反應 ? 還原反應 ? 水解反應 ? 結合反應 a． 葡萄糖醛酸結合 b． 硫酸酯化 c． 谷胱甘肽綴合 d． 乙?；Y合 e． 氨基酸結合 五、藥物代謝與體內(nèi)藥物分析的關系 1． 樣品的保存 樣品可能會分解 ， 如血漿酯酶可使酯類藥物水解 ，酶類可使藥物繼續(xù)代謝 ， 加入酶抑制劑和冷藏保存 。 3． 血漿蛋白結合的測定 平衡透析法 、 超濾法 、 凝膠過濾法 、 光譜法等 。 80年代開始在醫(yī)院進行臨床藥學工作 ， 主要測定藥物濃度 。 第四版 、 第五版取消 ， 各學校開設體內(nèi)藥物分析課程 。 由此可見 ， K、 np是影響 β的重要因素 np↓ β↓ K↓ β↑ 藥物
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