【正文】 研究已經(jīng)揭示了金絲桃素的多方面的光動(dòng)力學(xué)活性 [28]：在光活性之上金絲桃素抑制蛋白激酶 C（ PKC）和其它刺激蛋白激酶的生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)膜磷脂的過(guò)氧化反應(yīng)，增加超氧化物歧化酶活性和減少細(xì)胞中谷光苷肽的水平，削弱線粒體功能。 抗腫瘤 光動(dòng)力學(xué)治療（ PDT），也稱光化學(xué)治療（ PCT），其方法是首先對(duì)人體施用可定位于腫瘤細(xì)胞的光敏物質(zhì)，然后以一定波長(zhǎng)的光局部照射激活聚集在該部位的光敏劑，引發(fā)一系列的光化學(xué)和光生物學(xué)進(jìn)程，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的不可逆的光損傷，達(dá)到治療的目的。在磷酸鹽緩沖液 甲醇（ pH=）體系中， Ep=（銀 /氯化銀電極）處出現(xiàn)金絲桃素的峰圖，而在 Ep= 處出現(xiàn)偽金絲桃素的峰圖。 （ 2） 高效液相色譜法 采用高效液相色譜法測(cè)定金絲桃素含量的方法應(yīng)用的較為普遍，絕大部分都采用的是 C18柱（或 ODS柱）對(duì)樣品進(jìn)行分離 。由于金絲桃素和偽金絲桃素等物質(zhì)在 589 nm下均有最大吸收峰，且其他物質(zhì) 在此波長(zhǎng)下亦有吸收，因此采用單一波長(zhǎng)的分光光度法測(cè)定的是總金絲桃素的含量，且其精度相對(duì)較低。目前定性分析主要采用的是硅膠薄層色譜法，定量檢測(cè)主要采用的是反相高效液相色譜法。 h，萃取時(shí)間為 5 h，攜帶劑為乙醇。 堿液提取法 堿液提取是使用堿液對(duì)貫葉連翹進(jìn)行浸提，過(guò)濾，浸提三次，然后用中和濾液至 pH=3，真空濃 縮干燥。 醇提取法 醇提取法主要采用的是不同比例的甲醇 水或者乙醇 水體系進(jìn)行提取，以前采用甲醇進(jìn)行提取，但由于甲醇的毒性較強(qiáng)，現(xiàn)在多采用乙醇進(jìn)行提取。 （ 5）其他化合物 貫葉連翹中的還含有其他成分：碳?xì)浠衔?、原花青素、膽堿類、胡蘿卜素、β 谷甾醇、異纈草酸、月桂酸、肉豆蔻酸、煙酸、棕櫚酸、硬酯酸、氨基酸、果膠、維生素 C等。 圖 14 貫葉連翹中間苯三酚衍生物分子結(jié)構(gòu)式 Molecular structure of Pholoroglucinols derivatives in Hypericum perforatum L. 間苯三酚衍生物幾乎只存在于貫葉連翹的花和朔果中，貫葉金絲桃素的含量約為 ～％，加貫葉金絲桃素的含量為 ～ ％。干燥植物地上部分含原花青素 (其中包括二聚體、三聚體和四聚體以及兒茶精和表兒茶精的多聚體 )近 12 %。 OO ROO HH OO HO HR u t i n R = G l u R h aH y e r o s i d e R = G l aI s o q u e r c i t r i n R = G l uQ u e r c i t r i n R = R h aQ u e r c e t i n R = H 圖 13 貫葉連翹中黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)圖 Molecular Structure of Flavonol glycosides in Hypericum perforatum L 黃酮類化合物的含量在發(fā)芽期和開(kāi)花前最高， 達(dá) ％，其次為葉和莖，含量為 ％。萘駢二蒽酮類化合物具有活躍的電子共軛體系，遇光易氧化，對(duì)熱不夠穩(wěn)定。 （ 1）萘駢二蒽酮類化合物 目前研究表明，貫葉連翹中萘駢二蒽酮類化合物主要有偽金絲桃素（ Pseudohypericin）、金絲桃素（ Hypericin） ,分子結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 12[5]。 圖 11 貫葉連翹 植株形態(tài) The Shape of Hypericum perforatum L. 貫葉連翹生長(zhǎng)于海拔 8002100 米的山地灌叢、草叢及路旁，喜溫暖、濕潤(rùn)的環(huán)境，耐寒。花瓣黃色，花萼、花瓣各 五片，長(zhǎng)圓形或披針形，邊緣有黑色腺點(diǎn)，雄蕊多數(shù)，合生為三束 ，氣微，味微苦澀。中古時(shí)代的人們相信圣約翰草有醫(yī)療作用和驅(qū)走邪魔的作用。 近 些 年來(lái)，國(guó)內(nèi)外大量的報(bào)道表明貫葉連翹具有多種藥理作用， 其中主要活性成分就是金絲桃素， 目前 其已 成為新的抗腫瘤、抗 病毒 以及抗抑郁藥物的開(kāi)發(fā)熱點(diǎn)之一。 我國(guó)民間常將貫葉連翹全草鮮品搗爛或干品 研磨 敷患處，治創(chuàng)傷出血、痛癤腫毒和燒燙傷等 。在國(guó)外，貫葉連翹最 早是在古希臘作為民間草藥，用于治療創(chuàng)傷、神經(jīng)痛和利尿，后來(lái)瑞士醫(yī)生 Paracelsus 將其用于治療精神疾患，被稱為“神經(jīng)用藥”（ arnica for the nerves）。 貫葉連翹簡(jiǎn)介 貫葉連翹及其資源分布 貫葉連翹 （ Hypericum perforatum L.） ，又名貫葉金絲桃，為藤黃科 （ Garcinia） 金絲桃屬（ Hypericaceae） 植物， 廣泛分布的 多年生草本 植物 [1]。 貫葉連翹高 20～ 60厘米，莖直立，多 分枝，莖及分枝兩側(cè)各有一縱線棱。蒴果卵珠形，長(zhǎng)約 5 毫米，寬 3 毫米，具背生腺條及側(cè)生黃褐色囊狀腺體。貫葉連翹屬溫帶植物，分布范圍很廣，國(guó)外主要分布與于南歐、非洲西北部、近東、中亞、印度、蒙古、前蘇聯(lián)等，國(guó)內(nèi)產(chǎn)于山東、河南、河北、陜西、山西、甘肅、新疆、江西、江蘇、四川、湖南、湖北、貴州等地。是金絲桃屬植物的特征成分，主要存在于花和芽中，在貫葉連翹中的含量一般為萬(wàn)分之幾。接觸皮膚、粘膜或大劑量攝入體內(nèi)，易引起人和動(dòng)物的光敏反應(yīng)?；ㄖ薪鸾z桃苷的含量最高，為 3％，其次為葉，含量為 ％～ ％。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在貫葉連翹中黃酮類化合物主要還包括槲皮苷（ ～ ％）、異槲皮苷（ %） 、山柰酸、木犀草素、楊梅黃素、阿曼托黃素（ ～ ％）等，此外，還含有 咖啡酸、綠原酸、 P香豆酸、阿魏酸、異阿魏酸、龍膽酸（ gentisic acid）以及白矢車菊素（ leucocyanidin）等 [9]。這類物質(zhì)極不穩(wěn)定，在光、熱和氧氣的條件下很容易被氧化，采摘及保存不當(dāng)都會(huì)損失 [10,11]。此外，全草含鞣質(zhì) 10％，樹(shù)脂中含有抗菌成分貫葉連翹樹(shù)脂Ⅰ、Ⅱ [12]。有研 究 [13,14]比較了不同濃度的甲醇 水以及乙醇 水體系為浸提液所得到的金絲桃素含量的變化，結(jié)果也表明在 65%~80%的乙醇溶液中提取效果較好，提取時(shí)間在一個(gè)小時(shí)內(nèi)對(duì)含量影響較小。李俊等 [18]通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳條件是：用 30 倍原料重的 1％的 NaOH 溶液在95℃ ～ 100℃ 沸騰條件下浸提 2 個(gè)小時(shí)。得到的產(chǎn)物可以達(dá)到國(guó)際市場(chǎng)的標(biāo)準(zhǔn)。 定性分析 定性分析中，由于金絲桃素具有一定的極性，采用硅膠薄層層析法，以一定極性的展開(kāi)液展開(kāi)，直接在紫外 254 nm 或者 366 nm下檢識(shí)即可，亦可先噴以三氯化鋁試劑顯色，再在紫外366 nm 下檢識(shí)。為消除葉綠素的干擾，在處理樣品過(guò)程中采用氯仿對(duì)原料進(jìn)行處理，由于金絲桃素類物質(zhì)在氯仿中的溶解度較低，而葉綠素在氯仿中的溶解度相對(duì)較好，在一定程度上達(dá)到了消除干擾的目的。在流動(dòng)相的選擇上，各自所采用的流動(dòng)相均不相同。此種方法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在 177。目前臨床應(yīng)用較多的光敏物質(zhì)是血卟啉衍生物（ HPD），其主要缺點(diǎn)是對(duì)皮膚光毒性作用時(shí)間長(zhǎng)。有研究表明 [29]， 當(dāng)血液中的金絲桃素達(dá)到一定高的濃度并在光照下進(jìn)行光敏化，可以使腫瘤接近根除 ，因此可以認(rèn)為金絲桃素 PDT 的抗腫瘤特性源于強(qiáng)烈誘發(fā)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，結(jié)果造成整個(gè)微循環(huán)體系的破壞，產(chǎn)生了“饑餓腫瘤”的效果 。 因此，建議 PDT 要在良好條件下小心的用于腫瘤治療。 由于激光技術(shù)的發(fā)展以及柔韌的光學(xué)纖維的出現(xiàn)， 在技術(shù)上支持了 金絲桃素應(yīng)用于其他腫瘤的 臨床 試驗(yàn) [36]，目前也用于惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺癌和皮膚 T 細(xì)胞淋巴瘤的生長(zhǎng)抑制劑的研究 [37]。另外貫葉金絲桃素還可以顯著提高細(xì)胞內(nèi) Na+濃度 [39]?，F(xiàn)在多認(rèn)為，貫葉連翹制劑抗抑郁作用是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果 ，如甲基貫葉金絲桃素；黃酮類（與 MAOI 有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)），如阿曼托黃素（ 3’,8’雙 4’,5’,7三羥基黃酮）；口山酮類（抑制 MAOA， MAOB）以及其他未知成份。 Brenner[45]等用金絲桃素浸膏制劑與斯托寧作對(duì)照試驗(yàn)，對(duì) 30 位輕，中度抑郁癥患者進(jìn)行治療，并且進(jìn)行雙盲，隨機(jī)研究，臨床用藥一周后，所用制劑中金絲桃素日計(jì)量為 207mg，結(jié)果表明金 絲桃素制劑療效優(yōu)于斯托寧。在光照條件下，金絲桃素吸收光子，然后激發(fā)單線態(tài)氧，產(chǎn)生的單線 態(tài)氧進(jìn)而破壞細(xì)胞膜，干擾蛋白質(zhì)和核酸的合成。最近美國(guó)學(xué)者對(duì)合成的金絲桃素治療艾滋病進(jìn)行的Ⅰ期臨床觀察，口服或者注射病人均出現(xiàn)了嚴(yán)重的毒性反應(yīng)。 其他 （ 1）酒精成癮（ Alcoholism） 由于酒精成癮和抑郁癥的形成是由相同的影響神經(jīng)系統(tǒng)的化學(xué)物質(zhì)引起的，因此貫葉連翹不僅 再抗抑郁方面有良好的效果，其在治療酒精成癮上也有很好的成效。結(jié)果表明，貫葉連翹提取物 LI160 在減少焦慮和軀體形式抱怨上明顯優(yōu)于安慰劑。所有患者每天治療兩次，共計(jì) 16天，治療前后均對(duì)手術(shù)傷口測(cè)量 Surface Perimeter Area （ SPA）。瞬態(tài)空 化泡崩潰時(shí)，形成局部熱點(diǎn)，可達(dá) 5000K 以上（相當(dāng)太陽(yáng)表面的溫度），壓力可達(dá)數(shù)百乃至上千個(gè)大氣壓（相當(dāng)大洋深海處壓力）。 因而超聲波的振動(dòng)作用提高了破碎速度 ， 縮短了破碎時(shí)間 ， 促進(jìn)了化學(xué)成分向溶劑中溶解 。而超聲用于中藥的提取則能明顯地減少溶劑耗量、縮短萃取時(shí)間，在較低的溫度下就可實(shí)現(xiàn)高的提取率，而且不會(huì)破壞中藥中的有效成分，可廣泛用于中藥中皂苷、生物堿、黃酮、蒽醌類、有機(jī)酸 及多糖等成分 的提取。目前微波提取大多應(yīng)用于水提和醇提的項(xiàng)目。 微波提取優(yōu)點(diǎn) （ 1） 保護(hù)有效成分 傳統(tǒng)熱萃取是以熱傳導(dǎo)、熱輻射等方式由外向里進(jìn)行，而微波輔助提取是里外同時(shí)加熱。 （ 3） 超常的 提取能力 同樣的原料用常規(guī)方法需兩、三次提凈，在微波場(chǎng)下可一次提凈，大大簡(jiǎn)化工藝流程。喬秀文等[57]采用正交試驗(yàn)法，利用微波提取紫草多糖最佳工藝為：固液比 1:15，提取功率 250W，提取時(shí)間 6min，連續(xù)提取三次；任光明等 [58]用微波提取生地多糖，通過(guò)正交試驗(yàn)確定在料液比 1:40，提取溫度 70℃，提取功率 500W，只需提取 60s 就達(dá)到最高提取率。雖然幾十年前已有人從槐米中提取出“蘆丁”作為心血管病輔助治療藥，但在醫(yī)藥市場(chǎng)上蘆丁始終是一個(gè)并不引人注目的小品種。 （ 3） 蒽醌類物質(zhì)提取 許多蕙醒化合物都具有生物活性，具有抑菌、 抗氧化 (如大黃素 )、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等功效，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)。微波輔助提取法僅需 10 min，而索氏法和超聲法分別需要 90、 30min，說(shuō)明微 波輔助提取法用于中藥大黃的提取 ,具有高效、省時(shí)的特點(diǎn)。許多生物堿是治病良藥，如毛莨科黃連根莖中的小蘗堿是黃連素的主要成分，有抗菌消炎作用；蘿芙木中的利血平能降血壓；石蒜中的加蘭他敏對(duì)小兒麻痹后遺癥有療效，罌粟果皮中所含的嗎啡堿是著名鎮(zhèn)痛劑；奎寧堿是有價(jià)值 的解熱藥；三尖杉?jí)A和長(zhǎng)春花堿是治癌良藥；秋水仙素（堿）能人工誘變產(chǎn)生多倍體。方馥蕊等 [66]在探討提高檳榔中檳榔堿提取率的方法的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用微波提取法提取檳榔堿，采用薄層掃描儀檢測(cè)，與溶劑法和超聲法相比，檳榔堿的提取率明顯提高。劉永練等 [68]采用微波提 取人參中的皂苷，用 50%乙醇回流、超聲和微波提取時(shí)間分別為 、 ，而提取率分別為 ％、 ％、 ％，可見(jiàn)微波的提取率高而時(shí)間又短。含揮發(fā)油的中草藥或提取出的揮發(fā)油大多具有發(fā)汗、理氣、止痛、抑菌、矯味等作用。往揮發(fā)油粗產(chǎn)品中加人乙醇溶解，放 入 15℃冰箱中冷凍 48h,離心分離去除樹(shù)脂狀物質(zhì)，過(guò)濾，濾液進(jìn)行真空濃縮后，即得香附揮發(fā)油，產(chǎn)率約 24%，純度高達(dá) %。 微波提取設(shè)備 對(duì)于微波設(shè)備來(lái)講，提取效果主要取決以下因素：微波場(chǎng)強(qiáng)密度、溶媒與物料投放比、提取溫度、作用時(shí)間、溫升速率和物料粉碎程度等。管道形式有單管型、陣列型、螺旋形。不足之處是只適用粉狀物料提取，大型微波提取設(shè)備的管道過(guò)長(zhǎng)，容易發(fā)生堵塞，能量轉(zhuǎn)換效率一般，壓力可變性差、不適應(yīng)多 種工藝參數(shù)調(diào)整?，F(xiàn)場(chǎng)實(shí)踐證實(shí)一臺(tái) 1 立方微波提取設(shè)備處理能力相當(dāng) 5～ 8 立方常規(guī)動(dòng)態(tài)提取罐處理能力。 大孔吸附樹(shù)脂法 大孔吸附樹(shù)脂概述 大孔吸附樹(shù)脂的是 20 世紀(jì)六十年代發(fā)展起來(lái)的新型高分子的吸附劑。由于其本身的范德華力或氫鍵的作用而具有吸附性，同時(shí)又具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和很高 的比表面積而具有篩選性能。極性吸附樹(shù)脂是指含酰胺基、氰基、酚羥基 等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹(shù)脂，它們通過(guò)靜電相互作用吸附極性物質(zhì)。當(dāng)用水膨脹裝柱后，加入樣品，用同一溶劑洗脫時(shí)，由于各組分分子量不同，受凝膠網(wǎng)孔半徑的限制也不同，大分子將不能滲入凝膠顆粒內(nèi)部，所以在顆粒件隨溶劑移動(dòng)，并隨溶劑一起先從柱底端流出，而小分子的物質(zhì)則可以滲入擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)部，受到的阻力增大，流速減慢，流出得就慢，所以較晚出來(lái)。 Sephadex LH20除了分子篩特性，可以根據(jù)分子質(zhì)量大小分離物質(zhì)外，還在極性與非極性溶劑組成的混合溶劑中常常起到反相分配層析的效果。分析色譜需要全面反映樣品組成的信息，不需要收集特定的餾分，洗脫液通常廢棄 ； 而制備色譜中，目標(biāo)產(chǎn)物的純度、產(chǎn)量、生產(chǎn)周期、運(yùn)行成本等成為主要的考慮因素，因此制備色譜與分析色譜在操作參數(shù)的優(yōu)化上有很大不同。對(duì)于工業(yè)生產(chǎn)型制備高效液相色譜，經(jīng)濟(jì)效益是其整個(gè)純化過(guò)程考慮的核心因素，純化樣品量為千克至噸級(jí)。研究表明該天然藥物與合成藥物相比 具有不良反應(yīng)少，短期安全性高，患者依從性好等特點(diǎn)。目前對(duì)貫葉連翹的研究還處在較低的水平，其提取物中金絲桃素等有效成分的含量偏低，不