血紅蛋白的提取與分離-wenkub
2024-11-04 07 本頁(yè)面
【正文】 i225。,〔四〕緩沖溶液(huǎn chōnɡ r243。tǐ)過(guò)程,蛋白質(zhì)分子量的大小(d224。nlǐ)—分子篩效應(yīng),③分子量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法(wng)：分配色譜法,①性質(zhì)：一些微小(wēixiǎo)多孔的球體，內(nèi)含許多貫穿的通道,概念：根據(jù)被別離物質(zhì)的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，來(lái)進(jìn)行別離,第十頁(yè)，共六十三頁(yè)。,〔三〕 凝膠色譜法,②實(shí)例(sh237。h243。nx236。xu233。a (n m) ,③蛋白質(zhì)可以含有一條或n條肽鏈、肽鏈通過(guò)化學(xué)鍵〔如二硫鍵〕互相連接(li225。)氨基，另一端只有一個(gè)(yī ɡ232。 duō duān)；多肽鏈的空間結(jié)構(gòu)千差萬(wàn)別,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)(ji233。n),第四頁(yè)，共六十三頁(yè)。,分子結(jié)構(gòu)(fēn zǐ ji233。,根本組成(zǔ ch233。ng)，細(xì)胞中含量最多的有機(jī)物,組成(zǔ ch233。ng d224。專題(zhuānt237。nb225。nɡ)元素,C、H、O、N,一、根底知識(shí),含量(h225。nɡ)單位,氨基酸,氨基酸通式(tōngsh236。 ɡ242。,生理功能,細(xì)胞和生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，是人體發(fā)育和組織更新的主要原料，具有運(yùn)輸、調(diào)節(jié)、免疫(miǎny236。g242。)羧基〔不計(jì)R基上的氨基和羧基〕。njiē)，具有不同的空間結(jié)構(gòu),④關(guān)于蛋白質(zhì)相對(duì)分子量的計(jì)算(j236。18,第七頁(yè)，共六十三頁(yè)。)的方法別離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子, 蛋白質(zhì)別離和提取(t237。ng)、變性(bi224。ng d224。l236。,①大多數(shù)凝膠是由多糖類化合物〔如葡聚糖或瓊脂糖〕構(gòu)成的多孔小球體，內(nèi)部(n232。fǎ)進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。xiǎo),依據(jù)(yīj249。nɡ y232。nɡ suān)、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液,能夠抵抗外界的酸或堿的對(duì)溶液的PH值的影響，維持PH根本不變,作用,第十四頁(yè)，共六十三頁(yè)。 suān)和弱酸(ru242。調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同PH范圍內(nèi)使用的緩沖液,第十五頁(yè)，共六十三頁(yè)。tā)所對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽,第十六頁(yè)，共六十三頁(yè)。ng)結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察(紅色)和科學(xué)研究(活性),第十七頁(yè)，共六十三頁(yè)。n),帶電粒子在電場(chǎng)作用(zu242。i di224。,類型(l232。),由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N甲叉雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用(zu242。,第二十二頁(yè)，共六十三頁(yè)。y242。d236。y242。)測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？,使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(di224。n yǒnɡ)遷移率和分子量的對(duì)數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。n)操作,樣品處理——粗別離(fēnl237。ng f232。nɡ)及作用,本課題可選用豬、牛、羊或其他(q237。),①洗滌(xǐd237。nb225。),E、低速(dī s249。h243。bāo)破裂〕,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白,(4)別離血紅蛋白(xu232。i)溶液,①過(guò)程,將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min,第三十二頁(yè)，共六十三頁(yè)。h243。,用濾紙(lǜzhǐ)過(guò)濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體,③別離(fēnl237。ng d224。)樣品中分子量較小的雜質(zhì),①過(guò)程(gu242。,凝膠色譜(s232。,底塞中插入的玻璃管的上部不得超出(chāochū)橡皮塞的凹穴底面，否那么難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)別離不徹底,本卷須知：,⑤安裝其他(q237。,第三十九頁(yè)，共六十三頁(yè)。ili224。,注意(zh249。o)存在：,因?yàn)闅馀?q236。,液面不要低于凝膠外表，否那么可能有氣泡混入，影響(yǐngxiǎng)液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的別離效果,注意(zh249。)與洗脫,①調(diào)節(jié)(ti225。,第四十六頁(yè)，共六十三頁(yè)。,討論(tǎol249。)：正確的加樣操作,不要觸及破壞凝膠面,貼壁加樣,使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng),在血紅蛋白的整個(gè)過(guò)程中不斷用磷酸緩沖液處理的目的是什么？,第四十八頁(yè)，共六十三頁(yè)。)蛋白，因此在凝膠色譜別離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣
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