市場(chǎng)營(yíng)銷第三章基因工程第一節(jié)基因工程工具酶wangjx-wenkub
2023-03-29 11:44:16 本頁(yè)面
【正文】 起的 dsDNA，過(guò)度反應(yīng)將導(dǎo)致 DNA降解 4. 用途 1) 核酸（ DNA）標(biāo)記 2) 基因突變 缺失 3) DNA序列測(cè)定時(shí)作順序缺失 5. 使用注意事項(xiàng) 1) 正式使用前，測(cè)定在一定條件下酶的反應(yīng)速度 2) 在一定條件下， ExoIII不能作用 GC富集區(qū) (來(lái)自于 cDNA加尾 ) dsDNA結(jié)構(gòu) : 切口 , 缺口 , 斷口 缺口 (gap) 切口 (nick) 斷口 (cut) 339。 4. 產(chǎn)生粘性末端可以是 15個(gè)核苷酸。 CTCGAG 5’ GAATTC3’ 3’ CTTAAG 5’ 5’ GTTAAC3’ 3’ CAATTG 5’ EcoRⅠ 的識(shí)別序列 HaeⅠ 的識(shí)別序列 5’ NNNNNNNGAATTCNNNNNNNN3’ 3’ NNNNNNNCTTAAGNNNNNNNN5’ 5’ NNNNNG 3’ NNNNNCTTAAp EcoRⅠ 的識(shí)別序列和酶切切口（粘端） pAATTCNNNNNN339。 EcoRI— Escherichia coli RI HindⅢ — Haemophilus influensae d Ⅲ SacI (II)— Streptomyces achromagenes I (Ⅱ ) （三）、限制酶的特點(diǎn) 1. 識(shí)別順序和酶切位點(diǎn) １）識(shí)別４ 8個(gè)相連的核苷酸 MboI NGATCN； AvaII GG(A/T)CC BamHI GGATCC： PpuMI PuGG(A/T)CCPy Not I GCGGCCGC； SfiI GGCC N N N N N GGCC CCGGN’ N’ N’ N’ N’ CCGG Fok I 5’ ＧＧＡＴＧ (Ｎ )93’ 3’ ＣＣＴＡＣ (Ｎ )135’ 外側(cè)，產(chǎn)生５’ 端突起 ２）富含ＧＣ ３）對(duì)稱性 — 雙對(duì)稱 EcoRI 5’ G A A T T C3’ 3’ C T T A A G5’ ４）切點(diǎn)大多數(shù)在識(shí)別順序之內(nèi)，也有例外 ５）限制酶切后產(chǎn)生兩個(gè)末端，末端結(jié)構(gòu)是５’ Ｐ和３’ ＯＨ 2. 末端種類 １）３’ 端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 Pst I 5’ CTGCAG3’ 5’ CTGCA G3’ 3’ GACGTC5’ 3’ G ACGTC5’ ２）５’ 端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 EcoRI 5’ GAATTC3’ 5’ GOH PAATTC3’ 3’ CTTAAG5’ 3’ CTTAAP HOG5’ 粘性末端能與另一個(gè)相同的粘連末端相連接，任何兩個(gè)具有相同識(shí)別位點(diǎn)的 DNA分子經(jīng)限制酶切割后能夠重新連接成新的重組 DNA分子。 上述三個(gè)系統(tǒng)中，只有 II型限制酶與甲基化酶具有相當(dāng)高的核苷酸識(shí)別特異性，因而被廣泛用于基因工程中。第一節(jié) 基因工程中的工具酶 ? 限制性內(nèi)切酶 — 主要用于 DNA分子的特異切割 ? DNA甲基化酶 — 用于 DNA分子的甲基化 ? 核酸酶 — 用于 DNA和 RNA的非特異性切割 ? 核酸聚合酶 — 用于 DNA和 RNA的合成 ? 核酸連接酶 — 用于 DNA和 RNA的連接 ? 核酸末端修飾酶 — 用于 DNA和 RNA的末端修飾 ? 其它酶類 用于生物細(xì)胞的破壁 ， 轉(zhuǎn)化 ， 核酸純化 ， 檢測(cè)等 一、限制性內(nèi)切酶 （一）、限制修飾系統(tǒng)的種類 （二）、限制性內(nèi)切酶的定義、命名 （三）、限制酶的特點(diǎn) （四）、異源同序酶（ isoschizomer，同裂酶） （五）、 限制酶的用途 （一）、限制修飾系統(tǒng)的種類 1. I型 ： 由三個(gè)基因構(gòu)成， hsdR； hsdM； hsdS（ host specificity for DNA restriction modification and specificity）位于染色體上，三個(gè)基因構(gòu)成一個(gè)復(fù)合體，限制酶需要 ATP、Mg2+、 SAM（５ — 腺苷甲硫氨酸），無(wú)特異切割位點(diǎn)。 （二）、限制性內(nèi)切酶的定義、命名 1. 定義 ： 廣義指上述三個(gè)系統(tǒng)中的限制酶； 狹義指 II型限制酶。在進(jìn)行 DNA重組時(shí)，應(yīng)用限制酶
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