atp生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術的建立及-wenkub
2023-01-17 00:20:48 本頁面
【正文】 獲得準入 。 6. 國內(nèi)尚無該技術產(chǎn)業(yè)化的報道。期和無進展生存期。細胞活性的檢測方法。因此所測得的熒光強度反映了活細胞的數(shù)量。對某些藥物的測試結果存在假陰性理想的藥敏檢測方法應該具備的條件1. 操作簡便，可以標準化，便于推廣2. 標本可評價率高3. 檢測敏感、可靠、客觀4. 4. 具備產(chǎn)業(yè)化條件2. ATP生物熒光藥敏檢測技術的優(yōu)點 :敏感性好 可檢測最少 10個細胞。標本可評價率不高，僅有 70～ 80％陽性預測值較低，僅有 70～ 80％胸腺嘧啶核苷摻入法 (3HTdR)人為判斷因素較大，難以推廣實驗周期長，需要 2周以上l 因此如何選擇有效藥物，進行有的放矢的治療早已成為化療界所關注的問題。ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術 (ATPTCA)的建立及其 臨床應用研究答辯提綱l第一部分： ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術概述l第二部分： ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術及質(zhì)量 l 標準的建立l第三部分： ATPTCA技術的臨床應用研究第一部分ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術概述技術概述研究背景l(fā) 化學治療是腫瘤的三大治療手段之一。1. 主要的藥敏檢測方法及其 存在的問題藥敏檢測方法 存在問題 集落形成法 （HTCA）測試藥物種類和數(shù)量有限可適用標本類型不廣，目前僅用于血液腫瘤 而其他技術則一般需要 500個細胞以上可評價率高 標本可評價率在 90%以上快速檢測 完成 ATP檢測僅需 30分鐘，而其它方法需 1～ 4小時的孵育時間量程寬 檢測線性范圍為 10～ 100000個細胞 /孔（ 96孔培養(yǎng)板）精密度好 變異系數(shù)（ CV） 小于 10%，在國家標準（ 10%）的范圍內(nèi)結果準確 整體預測值為 86%檢測效率高 同時動態(tài)檢測評估化療藥物 6個劑量下對腫瘤的殺傷作用高通量檢測 適合 9 38 1536孔板檢測分析自動化程度高 實驗數(shù)據(jù)計算機軟件自動分析，分析結果直觀可靠穩(wěn)定性好 具備產(chǎn)業(yè)化條件 3. ATPTCA技術原理：在有氧條件下 , 熒光酶（ luciferase） 可以催化熒光素（luciferin） 釋放出熒光（波長為 562nm） ，同時 ATP轉變成 AMP。比較藥物系列濃度對培養(yǎng)細胞的不同抑制率，參照相應判斷指標，從而可以評估該化療藥物對腫瘤細胞的殺傷效果。2. 自自 1988年，年， Sevin首先將此方法用于新鮮腫瘤組織的藥敏檢測，在首先將此方法用于新鮮腫瘤組織的藥敏檢測，在歐洲和美國已經(jīng)進行了大量的臨床應用研究。 4. NIH的的 GOG (Gynecologic Oncology Group)項目組認為項目組認為 ATPTCA是是最有發(fā)展前途的一種藥敏試驗方法，已納入重點科研項目最有發(fā)展前途的一種藥敏試驗方法，已納入重點科研項目 (1998)。國內(nèi)尚無該技術產(chǎn)業(yè)化的報道。2. ，美國全國醫(yī)療保險協(xié)會年，美國全國醫(yī)療保險協(xié)會 (Health Maintenance Organization)認為，該技術是一項精確和可靠的并能指導醫(yī)認為，該技術是一項精確和可靠的并能指導醫(yī)生選擇用藥的生選擇用藥的 先進技術先進技術 ，建議在全美進行醫(yī)療保險賠付。內(nèi)獲得醫(yī)療保險賠付。成纖維 細胞 細胞 1025%1020%10%以 MCF7細胞系作為標準細胞系，按 2023個細胞 /孔接種濃度接種至 96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)七天后，要求測定的 RLU值 400000。精密度 敏感度第三部分ATPTCA體外藥敏檢測技術的臨床應用研究 ATPTCA 藥物測試方式評價標準強敏感 (SS)： IC5025%及 IC90100%PPC中度敏感 (IS)： IC5025%及 IC90100%PPC輕度敏感 (MS)： IC5025%及 IC90100%PPC耐藥 (R)： IC5025%及 IC90100%PPCIC90:抑制 90%腫瘤細胞生長的血漿峰值濃度百分比IC50:抑制半數(shù)腫瘤細胞生長的血漿峰值濃度百分比PPC:一定臨床用藥劑量對應的血漿峰值濃度臨床相關性研究病人資料臨床相關性研究病人資料體外檢測 (SS+IS)體內(nèi)耐藥（ SD+PD）181332*34例卵巢癌中可評價標本為 32例，標本可評價率為 %胸水活檢發(fā)現(xiàn)癌細胞，淋巴結病理活檢證實為絨毛膜上皮癌， HCG激素水平為 600u/ml。中度敏感中度敏感 MS8(SS+MS)/n腫瘤細胞對化療藥物的反應腫瘤細胞對化療藥物的反應強敏感強敏感 SS輕度敏感輕度敏感 LS耐藥耐藥 (SS+MS)/n羥基喜樹堿羥基喜樹堿 原用途：消化道和泌尿系腫瘤原用途：消化道和泌尿系腫瘤 45=腫瘤細胞對化療藥物的反應腫瘤細胞對化療藥物的反應 長春瑞賓長春瑞賓 (Vinorelbine,體外有效率＝體外有效率＝ =329討論 34例卵巢癌體外藥敏檢測結果表明， ATPTCA技術可反映不同病人對藥物的敏感性的個體差別，標本可評價率高，其結果與臨床療效及相關臨床資料有較好的吻合性：整體預測值 %，陽性預測值 % ，陰性預測值 % ，敏感性 90% ，特異性% 。填補了國內(nèi)在該領域的空白。果與臨床療效及相關臨床資料有較好的吻合性。治療具有實際指導意義。 ，傅軍等 .人乳腺癌細胞異質(zhì)性及其生物學行為研究 .中華腫瘤雜志。衷心感謝我的導師張偉研究員三年來對我的辛勤教誨和培養(yǎng)。實驗室劉毅、曲平、劉朝陽老師都給予我熱情的幫助、支持和指導，我的師弟黃泓，王小兵也參與了部分研究工作，在此表示最衷心的感謝。本課題系由腫瘤醫(yī)院婦
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