atp生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)技術(shù)的建立及-wenkub
2023-01-17 00:20:48 本頁面
【正文】 獲得準(zhǔn)入 。 6. 國(guó)內(nèi)尚無該技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的報(bào)道。期和無進(jìn)展生存期。細(xì)胞活性的檢測(cè)方法。因此所測(cè)得的熒光強(qiáng)度反映了活細(xì)胞的數(shù)量。對(duì)某些藥物的測(cè)試結(jié)果存在假陰性理想的藥敏檢測(cè)方法應(yīng)該具備的條件1. 操作簡(jiǎn)便，可以標(biāo)準(zhǔn)化，便于推廣2. 標(biāo)本可評(píng)價(jià)率高3. 檢測(cè)敏感、可靠、客觀4. 4. 具備產(chǎn)業(yè)化條件2. ATP生物熒光藥敏檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn) :敏感性好 可檢測(cè)最少 10個(gè)細(xì)胞。標(biāo)本可評(píng)價(jià)率不高，僅有 70～ 80％陽性預(yù)測(cè)值較低，僅有 70～ 80％胸腺嘧啶核苷摻入法 (3HTdR)人為判斷因素較大，難以推廣實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，需要 2周以上l 因此如何選擇有效藥物，進(jìn)行有的放矢的治療早已成為化療界所關(guān)注的問題。ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)技術(shù) (ATPTCA)的建立及其 臨床應(yīng)用研究答辯提綱l第一部分： ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)技術(shù)概述l第二部分： ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)技術(shù)及質(zhì)量 l 標(biāo)準(zhǔn)的建立l第三部分： ATPTCA技術(shù)的臨床應(yīng)用研究第一部分ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)技術(shù)概述技術(shù)概述研究背景l(fā) 化學(xué)治療是腫瘤的三大治療手段之一。1. 主要的藥敏檢測(cè)方法及其 存在的問題藥敏檢測(cè)方法 存在問題 集落形成法 （HTCA）測(cè)試藥物種類和數(shù)量有限可適用標(biāo)本類型不廣，目前僅用于血液腫瘤 而其他技術(shù)則一般需要 500個(gè)細(xì)胞以上可評(píng)價(jià)率高 標(biāo)本可評(píng)價(jià)率在 90%以上快速檢測(cè) 完成 ATP檢測(cè)僅需 30分鐘，而其它方法需 1～ 4小時(shí)的孵育時(shí)間量程寬 檢測(cè)線性范圍為 10～ 100000個(gè)細(xì)胞 /孔（ 96孔培養(yǎng)板）精密度好 變異系數(shù)（ CV） 小于 10%，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（ 10%）的范圍內(nèi)結(jié)果準(zhǔn)確 整體預(yù)測(cè)值為 86%檢測(cè)效率高 同時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)評(píng)估化療藥物 6個(gè)劑量下對(duì)腫瘤的殺傷作用高通量檢測(cè) 適合 9 38 1536孔板檢測(cè)分析自動(dòng)化程度高 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算機(jī)軟件自動(dòng)分析，分析結(jié)果直觀可靠穩(wěn)定性好 具備產(chǎn)業(yè)化條件 3. ATPTCA技術(shù)原理：在有氧條件下 , 熒光酶（ luciferase） 可以催化熒光素（luciferin） 釋放出熒光（波長(zhǎng)為 562nm） ，同時(shí) ATP轉(zhuǎn)變成 AMP。比較藥物系列濃度對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的不同抑制率，參照相應(yīng)判斷指標(biāo)，從而可以評(píng)估該化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。2. 自自 1988年，年， Sevin首先將此方法用于新鮮腫瘤組織的藥敏檢測(cè)，在首先將此方法用于新鮮腫瘤組織的藥敏檢測(cè)，在歐洲和美國(guó)已經(jīng)進(jìn)行了大量的臨床應(yīng)用研究。 4. NIH的的 GOG (Gynecologic Oncology Group)項(xiàng)目組認(rèn)為項(xiàng)目組認(rèn)為 ATPTCA是是最有發(fā)展前途的一種藥敏試驗(yàn)方法，已納入重點(diǎn)科研項(xiàng)目最有發(fā)展前途的一種藥敏試驗(yàn)方法，已納入重點(diǎn)科研項(xiàng)目 (1998)。國(guó)內(nèi)尚無該技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的報(bào)道。2. ，美國(guó)全國(guó)醫(yī)療保險(xiǎn)協(xié)會(huì)年，美國(guó)全國(guó)醫(yī)療保險(xiǎn)協(xié)會(huì) (Health Maintenance Organization)認(rèn)為，該技術(shù)是一項(xiàng)精確和可靠的并能指導(dǎo)醫(yī)認(rèn)為，該技術(shù)是一項(xiàng)精確和可靠的并能指導(dǎo)醫(yī)生選擇用藥的生選擇用藥的 先進(jìn)技術(shù)先進(jìn)技術(shù) ，建議在全美進(jìn)行醫(yī)療保險(xiǎn)賠付。內(nèi)獲得醫(yī)療保險(xiǎn)賠付。成纖維 細(xì)胞 細(xì)胞 1025%1020%10%以 MCF7細(xì)胞系作為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系，按 2023個(gè)細(xì)胞 /孔接種濃度接種至 96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)七天后，要求測(cè)定的 RLU值 400000。精密度 敏感度第三部分ATPTCA體外藥敏檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用研究 ATPTCA 藥物測(cè)試方式評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)敏感 (SS)： IC5025%及 IC90100%PPC中度敏感 (IS)： IC5025%及 IC90100%PPC輕度敏感 (MS)： IC5025%及 IC90100%PPC耐藥 (R)： IC5025%及 IC90100%PPCIC90:抑制 90%腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的血漿峰值濃度百分比IC50:抑制半數(shù)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的血漿峰值濃度百分比PPC:一定臨床用藥劑量對(duì)應(yīng)的血漿峰值濃度臨床相關(guān)性研究病人資料臨床相關(guān)性研究病人資料體外檢測(cè) (SS+IS)體內(nèi)耐藥（ SD+PD）181332*34例卵巢癌中可評(píng)價(jià)標(biāo)本為 32例，標(biāo)本可評(píng)價(jià)率為 %胸水活檢發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，淋巴結(jié)病理活檢證實(shí)為絨毛膜上皮癌， HCG激素水平為 600u/ml。中度敏感中度敏感 MS8(SS+MS)/n腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)強(qiáng)敏感強(qiáng)敏感 SS輕度敏感輕度敏感 LS耐藥耐藥 (SS+MS)/n羥基喜樹堿羥基喜樹堿 原用途：消化道和泌尿系腫瘤原用途：消化道和泌尿系腫瘤 45=腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng) 長(zhǎng)春瑞賓長(zhǎng)春瑞賓 (Vinorelbine,體外有效率＝體外有效率＝ =329討論 34例卵巢癌體外藥敏檢測(cè)結(jié)果表明， ATPTCA技術(shù)可反映不同病人對(duì)藥物的敏感性的個(gè)體差別，標(biāo)本可評(píng)價(jià)率高，其結(jié)果與臨床療效及相關(guān)臨床資料有較好的吻合性：整體預(yù)測(cè)值 %，陽性預(yù)測(cè)值 % ，陰性預(yù)測(cè)值 % ，敏感性 90% ，特異性% 。填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)在該領(lǐng)域的空白。果與臨床療效及相關(guān)臨床資料有較好的吻合性。治療具有實(shí)際指導(dǎo)意義。 ，傅軍等 .人乳腺癌細(xì)胞異質(zhì)性及其生物學(xué)行為研究 .中華腫瘤雜志。衷心感謝我的導(dǎo)師張偉研究員三年來對(duì)我的辛勤教誨和培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室劉毅、曲平、劉朝陽老師都給予我熱情的幫助、支持和指導(dǎo)，我的師弟黃泓，王小兵也參與了部分研究工作，在此表示最衷心的感謝。本課題系由腫瘤醫(yī)院婦
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