【正文】 ............. 4 二、課題總體進展 ............................................................................................................................ 4 1青枯病生物殺菌劑 ANTI8098A的研制與應用 ........................................................................ 4 2枯萎病生物殺菌劑 “枯特利 ”研究 ............................................................................................. 5 3生物農藥菌種資源庫建設 ........................................................................................................ 5 三、取得的主要進展 ......................................................................................................................... 6 （一） 青枯雷爾氏菌無致病力菌株免疫接種劑的研發(fā) ................................................................. 6 1 青枯雷爾氏菌致病力分化 ................................................................................................. 6 2青枯雷爾氏菌無致病力菌株鑒定 ...................................................................................... 7 3 青枯雷 爾氏菌無致病力菌株轉 GFP 基因 ........................................................................... 9 4 青枯雷爾氏菌無致病力菌株侵染特性 ............................................................................. 10 5 青枯雷爾氏菌無致病力菌株免疫接種劑的生產工藝 ........................................................ 11 6 青枯雷爾氏菌無致病力菌株接種免疫抗病特性 ............................................................... 12 7 小結與討論 .................................................................................................................... 12 （二）作物枯萎病原菌的遺傳分化及其生物防治研究 ............................................................... 13 1 作物枯萎病原菌的遺傳分化 ........................................................................................... 13 2 作物枯萎病的生物防治研究 ........................................................................................... 17 ................................................................................................ 17 生長的影響 .............................................................................. 22 .................................................................... 25 ....................................................................... 28 刀菌生防因子芽孢桿菌的復篩 ........................................................................... 31 .............................................................................................................. 32 ..................................................................................... 33 技術 ..................................................................................... 34 生防菌 JK2對西瓜枯萎病的防治效果 ........................................................................ 38 （三）生物農藥菌種資源庫建設 .............................................................................................. 42 （四）人才培養(yǎng) ....................................................................................................................... 43 （五）發(fā)表論文及出版專著 ..................................................................................................... 43 （六）專利 .............................................................................................................................. 44 （七）農藥登記證及企業(yè)標準制定 ........................................................................................... 44 四、課題目前與用戶或有關企業(yè)相互聯(lián)系、信息交流和合作情況 .................................................... 45 五、課題支撐條件落實情況 ............................................................................................................ 45 六、課題組織實施及其管理工作的經驗 ........................................................................................... 46 生物農藥研究中心科研管理規(guī)定 .............................................................................................. 46 “生物農藥研究中心 ”科管監(jiān)事會章程 ....................................................................................... 52 2 七、目前存在的問題及建議 ............................................................................................................ 55 八、簽章 ........................................................................................................................................ 55 附表 1 ............................................................................................................................................ 56 附表 2 ............................................................................................................................................ 58 3 編 報 要 求 一、格式要求 ； 級與課題規(guī)定的密級相同； A4幅面紙，文字內容一律由計算機打印填報； ，再出現時可以使用縮寫。登記證號： LS20202575。 二、 課題總體進展 （概述課題實施進展，課題已取得的階段性成果及前景評價，包括人才、專利、技術標準戰(zhàn)略在課題中的實現情況，產品研發(fā)和產業(yè)化進展等） 1青枯病生物殺菌劑 ANTI8098A的研制與應用 研究從青枯菌生物防治方法入手， 尋找對青枯病菌有強烈抑制作用的芽孢桿菌，篩選出青枯病生防菌 ANTI8098，對青枯病原菌有良好的抑制作用，經德國菌種保存中心（ DMSZ）鑒定為蠟狀芽孢桿菌，定名為 ANTI8098A。），為產業(yè)化服務；通過了浙江省醫(yī)學科學院的毒性檢測，為低毒的生物殺菌劑（ LD5050000mg /kg），對皮膚和眼睛無任何刺激；藥效通過了農業(yè)部農藥檢定所指定的檢驗，對茄科作物青枯病的防效達7585%，同時能顯著地促進植株生長，促進著花數和著果數，優(yōu)于對照的化學農藥性能指標。 2枯萎病生物殺菌劑 “枯特利 ”研究 進行了蔬菜（瓜類、豆類、茄科作物類等）枯 萎病的調查與病原菌的分離培養(yǎng)，測定了豇豆 、花生 、甜椒、辣椒、西瓜、甜瓜、黃瓜等農作物上 分離了尖孢鐮刀菌的 ITS 基因序列，并成功地登錄 GENEBANK，獲得基因序列號 9 個。生物殺菌劑 枯特利，田間平均防治效果達 75%以上 ，取得良好的經濟、生態(tài)、社會效益。 引進美國 MIDI 公司的 Sherlock 微生物鑒定儀建立了基于脂肪酸差異的菌種快速鑒定系統(tǒng)，對本項目涉及菌株進行了分類地位鑒定，同時也承接了大量外單位的菌種鑒定工作。建立了生物農藥菌種產業(yè)化應用前期研究的標準操作規(guī)程，建立了生物農藥研究柔性生產線。分離的菌株用剪葉法回接番茄組培苗， 各菌株回接 30株苗，設清水對照，將回接的組培苗置于 30℃ 人工氣候箱下， 7d后觀察回接發(fā)病率。 圖 1青枯雷爾氏菌致病性分化 圖 2弱化 指數構建 （ 2）脂肪酸差異 7 分析了 青枯雷爾氏菌脂肪酸種類變化與致病性指標 弱化指數和回接發(fā)病率的相互關系，提出了青枯雷爾氏菌脂肪酸型種下分化的分類方法。脂肪酸型的模型建立也為其他植物病原菌的致病性研究提供了思路和方法。 Phc的主要作用就象一個鐘擺裝置，由內生信號分子 3OH棕櫚酸甲基脂調控（ Clough et al., 1994。 Schell, 2020），而抑制其它一些基因的表達，例如運動性基因（ Liu et al., 2020），多聚半乳糖醛酸酶產物，含鐵細胞產物（ Huang et al., 1993。這些由 phcA直接或者間接是通過中間的調節(jié)基因進行調控（ Schell, 2020）。引物設計 ， 根據青枯雷爾氏菌的 phcA基因片段全長利用Primer5軟件設計 4對擴增引物 ， 由上海生工生物工程服務有限公司合成 ， 引物序列如下 ： 引物 1：phcA3： 5’CGACAACGAGTGGGGCTACTCGAAC3’； phcA4： 5’GGAAGG CGTTGAGGTTGT3’； 8 引物 2： phcA5： 5’TGCCTTTCCACCTTCTGT3’； phcA6： 5’AGGCG TTGAGGTTGTAGGC3’。 分析結果表明，用 2對引物擴增出三條帶 A、 B，青枯雷爾氏菌強致病力菌株擁有 A、