【正文】 AFM1 AFM2黃曲霉毒素難溶于水、己烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙腈和二甲基甲酰胺等有機溶劑，分子量為312～346，熔點為200～300℃。其毒性因動物的種類、年齡、性別和體況以及營養(yǎng)狀況的不同有差異，年幼動物、雄性動物較敏感。　黃曲霉毒素的來源和種類黃曲霉毒素(aflatoxin,AF)主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類有毒次生代謝物[2]。河南工業(yè)大學(xué) 2010屆畢業(yè)論文液質(zhì)聯(lián)用法測定糧食作物中黃曲霉毒素研究畢業(yè)論文目 錄1 引言 1　背景介紹 1　黃曲霉毒素的來源和種類 1　黃曲霉毒素的危害 1 黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì) 1　黃曲霉毒素的分布 3　黃曲霉毒素的防治 3　不同種類的糧食作物中黃曲霉毒素成份的介紹 3　大豆 3　花生 4　小麥 4　玉米 4　黃曲霉毒素檢測方法 5　薄層色譜法(TLC) 5　高效液相色譜法(HPLC) 6　親和柱高效液相色譜法(IAGHPLC) 6　酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA) 7　液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC—MS) 7　色譜條件的選擇 8　流動相的選擇 8　容量因子的選擇 8　本課題研究的意義 82 實驗 9　實驗儀器 9 試劑與溶液 9 10　樣品前處理 10 色譜條件 10 質(zhì)譜條件 103 結(jié)果與討論 10 提取液的選擇 10 色譜條件的優(yōu)化 11 流動相的選擇 11 流速的選擇 11 進樣量的選擇 12 色譜柱及柱溫的選擇 12 方法的靈敏度 12　黃曲霉毒素B1的標準曲線 13 重復(fù)性與檢出限 14　樣品測定 14　根據(jù)質(zhì)譜圖分析黃曲霉毒素BBGG MM2 17結(jié) 論 21致 謝 22參考文獻 23231 引言　背景介紹黃曲霉毒素(aflatoxin,AF)是對人類和動物危害大的真菌毒素之一。AF是一類結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)相似的真菌次級代謝物，目前已發(fā)現(xiàn)有20種之多，已確定結(jié)構(gòu)的有AFBAFBAFM1等18種，它們的基本結(jié)構(gòu)中都含有二呋喃環(huán)和氧雜萘鄰?fù)?，前者為其毒性結(jié)構(gòu)，后者可能與其致癌有關(guān)[3]。黃曲霉毒素主要危害動物的肝臟器官，有誘導(dǎo)突變、抑制免疫和致癌的作用，可引起人和動物的急性中毒、慢性中毒和引起癌癥。黃曲霉毒素對光、熱和酸穩(wěn)定，耐高溫，通常加熱處理對其破壞很小，只有在熔點溫度下才發(fā)生分解?！↑S曲霉毒素的分布黃曲霉毒素存在于土壤、動植物、各種堅果、特別是花生和核桃中。華中、華南、華北產(chǎn)毒株多，產(chǎn)毒量也大，東北、西北地區(qū)較少?！〔煌N類的糧食作物中黃曲霉毒素成份的介紹　大豆原料大豆和豆粕在運輸、貯藏過程中，若水分、溫度控制不當，很容易受到霉菌污染，發(fā)生霉變。黃曲霉毒素主要由黃曲霉菌(Aflavus)和寄生曲霉菌(Aparasiticus)產(chǎn)生，其他如Aspergillus nomius和Aspergillus niger也可以產(chǎn)生，黃曲霉毒素產(chǎn)毒溫度為28~32℃，相對濕度為85%以上[8]。同時在比較多的樣品中都檢測到了MM2，盡管MM2的毒性相對于BB2要弱一些，但是由于其在一些樣品花生及其制品中竟然達到了4ppb，表明MM2可能不僅僅是由BB2在體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化而成，僅存在于動物乳汁及乳制品中，在花生及其制品長期不良儲存條件下或加工過程中，各種產(chǎn)毒霉菌的嚴重污染也有可能導(dǎo)致MM2的產(chǎn)生[10]。小麥是富糖類的糧食，與我國其他主要糧食作物(水稻、玉米)相比，其所含成分是最適合于霉菌生長并產(chǎn)生毒素的基質(zhì)，我國小麥中的霉菌污染以曲霉為主，曲霉中又以黃曲霉( Aspergillusf lavus)污染最為嚴重，在相對濕度60%條件下，℃，℃，℃[12]。環(huán)境溫度超過30℃，黃曲霉菌落生長都較迅速，高水活度的培養(yǎng)條件下在10天時間里菌絲基本覆蓋90mm的培養(yǎng)皿。毒理學(xué)研究表明，黃曲霉毒素能夠造成動物精神癲癇而導(dǎo)致死亡。AF的檢測程序可分為3個步驟：萃取、凈化、測定?！”由V法(TLC)TLC法是傳統(tǒng)的檢測AFB1最常用方法，是應(yīng)用最早、最廣的分離、分析技術(shù)，曾是我國測定食品及飼料中AFB1的國家標準方法之一，其原理是：樣品經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，在365 nm波長的紫外光照射下，黃曲霉毒素BB2產(chǎn)生紫色熒光，GG2產(chǎn)生綠色熒光，然后根據(jù)其在薄層板上顯示的熒光的最低檢出來定量。盧艷杰等介紹了過壓薄層色譜法OPLC結(jié)合光度計，成功地對多種食品中的黃曲霉毒素BB2 、G1和G2進行測定，同時該方法還適用于樣品的提純和分離，一次可對十個樣品進行分析，做到快速、有效、低耗地定量食品中的AFB。樣品經(jīng)提取、凈化后，選擇適宜的流動相通過高效液相色譜柱，使多種AF同時分離出來，用熒光檢測器檢測。因此，通常用兩種方法來提高B1和G1的熒光性，一是通過改變流動相或改進檢測器來降低物質(zhì)熒光性的損失，二是對熒光性弱的物質(zhì)進行柱前或柱后衍生以增強其熒光性。該方法大大簡化了樣品的前處理過程，同時利用高效液相色譜進行定量和定性，可以同時測出AF的總量和AFMAFBAFBAFGAFG2各自含量。該方法具有快速、靈敏、特異性強、成本低等特點，適合于 AFB 大批樣品的檢測。在酶的催化作用下，底物發(fā)生降解反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)，通過酶標檢測儀測出酶底物的降解量，從而推知被測樣品中的抗原量。 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)解決了傳統(tǒng)液相檢測器靈敏度和選擇性不夠的缺點，提供了可靠、精確的相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)信息，簡化了試驗步驟，節(jié)省了樣品準備時間和分析時間，特別是適合親水性強、揮發(fā)性強的有機物，熱不穩(wěn)定化合物及生物大分子的分離分析，因此是對食品的生產(chǎn)、運輸?shù)冗^程進行質(zhì)量監(jiān)控的有效分析手段，在食品工業(yè)中一定會得到更加廣泛的應(yīng)用。隨著分析效率、分析時間、靈敏度在食品質(zhì)量控制、毒性分析等方面顯得越來越重要，UPLC—MS/MS必然扮演著越來越重要的角色[12]。 K1與K2容量因子是衡量色譜柱對某組分保留能力總的平衡常數(shù)，分配系數(shù)是反映組分與固定相，流動之間的熱力學(xué)平衡常數(shù)，其中Vs/Vm稱為相比，是固定相體積與流動相體積之比。容量因子越大，溶質(zhì)的保留時間也越長。因此，許多研究者在不同的領(lǐng)域研究。液相色譜（LC）可以直接分析不揮發(fā)性化合物、極性化合物和大分子化合物（包括蛋白質(zhì)、脂肪、多糖及多聚物等）,分析范圍廣，而且不需衍生化步驟。2 實驗　實驗儀器1200LC—6310MSDTrap 系統(tǒng)，美國安捷倫公司出品。SHA—C水浴恒溫振蕩器，金壇市華豐儀器有限公司出品。甲醇(一級色譜純)，天津市四友精細化學(xué)品有限公司出品。純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司。　樣品前處理稱取粉碎過篩（10目）樣品20 g（ g）于250mL的具塞錐形瓶中，加入5g氯化鈉和30mL正己烷，搖勻，在25℃水浴恒溫振蕩器中振蕩30min，經(jīng)15cm快速定性濾紙將正己烷濾去。用萬分之一電子分析天平準確稱取200mg C18，用少量脫脂棉堵