【正文】 屬名；co：種名；R：株；Ⅰ：發(fā)現(xiàn)次序) 簡(jiǎn)單敘述同尾酶和同裂酶的差別。3）溫度 ：不同的限制性內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同。第三章 基因克隆的酶學(xué)基礎(chǔ) 限制性核酸內(nèi)切酶的類型，基因工程常用的是哪種限制性核酸內(nèi)切酶？（常用II型） 什么是星活性，產(chǎn)生星活性的因素可能有哪些？在非最適合的條件下酶的識(shí)別特異性降低，產(chǎn)生非特異性帶，這種活性稱星活性。9. 基因文庫(kù)的類型包括哪兩種？各有什么特點(diǎn)？10. 一般質(zhì)粒DNA的構(gòu)型有哪幾種？在瓊脂糖凝膠電泳中的有何特點(diǎn)？超螺旋質(zhì)粒DNA、開環(huán)質(zhì)粒DNA、線狀質(zhì)粒DNA在瓊脂糖凝膠電泳的特點(diǎn)是：電泳的泳動(dòng)速度由大到小分別是：超螺旋質(zhì)粒DNA線狀質(zhì)粒DNA開環(huán)質(zhì)粒DNA11. 堿裂解法提取質(zhì)粒DNA的原理，分析影響試驗(yàn)結(jié)果的各種可能因素。探針按核酸分子分：DNA探針和RNA探針；按標(biāo)記物的不同：放射性標(biāo)記探針和非放射性標(biāo)記探針。(5)Mg2+濃度：常用 ； 影響：酶的活性、引物模板退火、特異性167。mol/L，特異性、保真性；167。濃度高，非特異性擴(kuò)增增加； 179。影響PCR擴(kuò)增的影響因素：167。 pH值：偏堿性，帶負(fù)電荷 220。電壓高則快 216。2. DNA凝膠電泳中影響電泳遷移率的因素主要有哪些？1）分子本身的影響 216。濃度越大，復(fù)性越容易。DNA變性后，它的一系列性質(zhì)發(fā)生變化，如紫外吸收(260 nm)值升高（增色效應(yīng)）, 粘度降低等，如DNA增加25－40%. %。只有測(cè)試合格了，才能投放市場(chǎng)。首先，通過(guò)該項(xiàng)技術(shù)可以提供人們所需要的特性，改良培育新品種；第二，延長(zhǎng)食品保存時(shí)間或增加營(yíng)養(yǎng)成分；第三，將抗蟲防菌基因轉(zhuǎn)入到作物中，使作物本身產(chǎn)生抵抗病蟲害侵襲的能力， 減少了農(nóng)藥的使用量，有利于環(huán)境保護(hù)；第四，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及基因食物在醫(yī)學(xué)方面得到廣泛研究和應(yīng)用。1）、目的基因的分離2）、DNA的體外重組（載體、受體系統(tǒng)等）3）、重組DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞及其篩選4）、基因在受體細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增、表達(dá)、檢測(cè)及其分析。定義：在體外把核酸分子（DNA的分離、合成）插入載體分子，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合（重組DNA），引入原先沒(méi)有這類分子的受體細(xì)胞內(nèi)，穩(wěn)定地復(fù)制表達(dá)繁殖，培育符合人們需要的新品種（品系），生產(chǎn)人類急需的藥品、食品、工業(yè)品等。特征：具跨越天然物種屏障的能力?；蚬こ淘谑称饭I(yè)上有何應(yīng)用發(fā)展？主要是通過(guò)基因重組，使各種轉(zhuǎn)基因生物提高生產(chǎn)谷氨酸、調(diào)味劑、酒類和油類等有機(jī)物的產(chǎn)率；或者改良這些有機(jī)物組成成分，提高利用價(jià)值。人們對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的主要擔(dān)憂在于環(huán)境方面。因此公眾完全可以安全地消費(fèi)、大膽地食用轉(zhuǎn)基因食品。 DNA的分子特性與利用 原核生物和真核生物的基因表達(dá)調(diào)控有何差別？1）原核基因表達(dá)調(diào)控的三個(gè)水平：轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控、翻譯水平調(diào)控、蛋白質(zhì)加工水平的調(diào)控原核基因表達(dá)調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控。 DNA復(fù)性及其影響因素。（附加：注意：將熱變性的DNA驟然冷卻至低溫時(shí)，DNA不可能復(fù)性。分子的大?。盒t快 216。電壓太高則結(jié)果不準(zhǔn)確常用3~5V/CM3）支持物介質(zhì) 216。 離子濃度：離子濃度高_(dá) 電流大_發(fā)熱快_膠溶解 220。(1)Taq酶：常用1U/25181。酶的活性；167。(3)模板：主要考慮純度及使用量，對(duì)純度要求不高，但含有酚、氯仿等雜質(zhì)則難以成功。(6)PCR反應(yīng)程序設(shè)定：變性溫度和時(shí)間、引物退火溫度Tm與時(shí)間、引物延伸溫度與時(shí)間和循環(huán)數(shù)4. PCR引物設(shè)計(jì)的原則，若給一指定DNA序列并需要通過(guò)PCR擴(kuò)增此序列，如何設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物？（關(guān)于如何設(shè)計(jì)這個(gè)問(wèn)題，靠自己了）引物設(shè)計(jì)原則： G+C含量4555%； Tm值高于55； 引物特異性； 引物擴(kuò)增跨度； 是否形成引物二聚體5. 定量PCR的原理？Ct值的含義。標(biāo)記類型：按核酸分子的不同：可分為DNA探針和RNA探針根據(jù)標(biāo)記物的不同：可分放射性標(biāo)記探針和非放射性標(biāo)記探針；雙鏈DNA探針標(biāo)記主要方法：切口平移法、隨機(jī)引物合成法；7. Southern雜交一般過(guò)程及影響雜交因素。堿裂解法原理：在堿性條件下，雙連DNA氫鍵斷裂，結(jié)構(gòu)破壞變性，環(huán)狀超螺旋質(zhì)粒不充分變性。產(chǎn)生Star活性的因素：（書上P46P47答案）高濃度甘油，堿性pH，存在Mn2+，低離子強(qiáng)度，低鹽濃度，低pH 結(jié)合已做的實(shí)驗(yàn)，分析影響酶切的因素。大多數(shù)是37 oC，少數(shù)要求4065 oC。同尾酶：來(lái)源不同，識(shí)別的序列不同，但能切出相同的粘性末端，連接后不能被相關(guān)的酶同時(shí)切割。） 連接酶主要有哪些類型？有何異同點(diǎn)？影響連接酶連接效果的因素主要有哪些？類型：DNA連接酶和RNA連接酶異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：都能以DNA為模板，從539。 影響因素：（影響因素就四個(gè)，后面分析覺得煩的話大家自己看著辦啦）1）連接所用的目的片段的狀態(tài)： 185。連接效果最好在37 ℃，但形成的互補(bǔ)不穩(wěn)定。 ATP：反復(fù)凍熔，ATP活性降低，ATP溶解度不高，連接緩沖液宜分裝； 185。 185。在體系中加一點(diǎn)切載體的酶，只要連接后原來(lái)的酶切位點(diǎn)消失。 質(zhì)粒的不相容性及其分子機(jī)理。這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能，如有利于進(jìn)行篩選的標(biāo)志基因、單一的限制酶切點(diǎn)等。重組體分子的選擇方法主要有哪些？并簡(jiǎn)單闡述其原理。用已學(xué)過(guò)的重組體分子的選擇與鑒定技術(shù)，試設(shè)計(jì)一個(gè)試驗(yàn)方案，假如一特異PCR擴(kuò)出的基因或基因片斷重組進(jìn)T載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，如何鑒定并獲得真實(shí)轉(zhuǎn)化子？(自理)第五章 基因的克隆一般方法基因的克隆方法主要有哪些？并闡述其克隆原理（至少3種，都是書上找的，自選哈，建議必選DD RTPCR和SSH，原因請(qǐng)看下題）？1）差減雜交（SH）通過(guò)DNA復(fù)性動(dòng)力學(xué)原理富集目的基因序列，并以此構(gòu)建減數(shù)文庫(kù)的方式來(lái)進(jìn)行目的基因分離克隆的。4）DNA代表性差異分析（DNA RDA）代表性差別分析是通過(guò)突變型（驅(qū)趕DNA，driver DNA）與野生型（檢測(cè)DNA，tester DNA）基因組之間的差異來(lái)分離和鑒定突變基因的方法。[參考文獻(xiàn)：，2006，34（15）：36253628）]6）cDNA微陣列建立一套統(tǒng)一且具有高質(zhì)量、高代表性的cDNA列陣膜，在這一列陣膜上每個(gè)cDNA克隆都有固定的位置和編號(hào)，這樣大大方便了數(shù)據(jù)的綜合比較分析，并可對(duì)每個(gè)cDNA克隆子進(jìn)行定量分析。l 所需的mRNA量少。l 工作量大。（P221）抑制性差減雜交的原理與應(yīng)用。酵母雙雜交技術(shù)、噬菌體表面展示技術(shù)的原理。B．噬菌體表面展示技術(shù)原理：當(dāng)外源DNA片段插入絲狀噬菌體基因組的一個(gè)外被蛋白基因中時(shí)，如果兩者讀碼框結(jié)構(gòu)保持一致，這個(gè)外源DNA片段所編碼的產(chǎn)物可與此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表達(dá)，并顯示在噬菌體的表面。216。 用TDNA片段做probe篩選突變體文庫(kù)，獲得陽(yáng)性克隆。 把陽(yáng)性克隆轉(zhuǎn)化突變體進(jìn)行功能互補(bǔ)及進(jìn)行測(cè)序分析?；蚩寺”磉_(dá)系統(tǒng)成熟、完善； 242。缺乏對(duì)真核生物蛋白質(zhì)的復(fù)性功能； 242。甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)：252。 可高密度發(fā)酵252。（1）表達(dá)蛋白用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究 ——主要考慮保持蛋白質(zhì)原有的功能不變；表達(dá)策略：融合表達(dá)和直接表達(dá)（2）表達(dá)蛋白用作抗原——主要考慮表達(dá)蛋白的快速提純；表達(dá)策略：以包涵體形式合成目的蛋白和融合表達(dá)目標(biāo)蛋白（不用去除標(biāo)簽蛋白）（3）表達(dá)蛋白用作結(jié)構(gòu)研究——表達(dá)蛋白以天然可溶形式產(chǎn)生；表達(dá)時(shí)考慮因素：表達(dá)溫度（高溫促進(jìn)包涵體的形成）；表達(dá)水平（高表達(dá)促成包涵體的形成）；表達(dá)載體受體菌。植物基因工程什么叫轉(zhuǎn)基因植物？植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線主要包括哪些？利用DNA重組技術(shù)，在離體條件下對(duì)不同生物的DNA進(jìn)行加工，并按照人們的意愿和適當(dāng)?shù)妮d體重新組合，再將重組DNA轉(zhuǎn)入生物體或細(xì)胞內(nèi)，并使其在生物體內(nèi)或細(xì)胞中表達(dá)的植物。對(duì)報(bào)告基因來(lái)講，還可以利用報(bào)告基因的顯色或發(fā)光特性進(jìn)行選擇與 鑒定出現(xiàn)轉(zhuǎn)基因沉默現(xiàn)象的可能原因分析。通過(guò)這次實(shí)踐，使我對(duì)村委會(huì)實(shí)務(wù)有所了解，也為我今后的順利工作打下了良好的基礎(chǔ)。一封信件沒(méi)有及時(shí)收發(fā)，很有可能造成工作的失誤、嚴(yán)重的甚至?xí)斐删薮蟮慕?jīng)濟(jì)損失。每次郵遞員送來(lái)的信件，我都要親自檢查有無(wú)開封、損壞的函件，如果發(fā)現(xiàn)有損壞的函件，我馬上聯(lián)絡(luò)接收人親自來(lái)查收。在工作之余，我還經(jīng)常去村民家里，幫助他們做一些我力所能及的事情，也讓我收獲了很多知識(shí)，學(xué)會(huì)了許多技能。在這里，我感受到了村民們的純樸，也體會(huì)到了農(nóng)村生活的不易，更加深刻的認(rèn)識(shí)到了作為當(dāng)代大學(xué)生身上肩負(fù)的使命。第一，該村村委會(huì)的工作人員文化水平相對(duì)偏低，在村務(wù)工作的處理上，方式方法比較粗放。三、實(shí)習(xí)的心得體會(huì)剛開始去村村委會(huì)實(shí)習(xí)的時(shí)候，我的心情充滿了激動(dòng)、興奮、期盼、喜悅。不僅是進(jìn)行了一次良好的校外實(shí)習(xí)......本文來(lái)自公務(wù)員之家，查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。二、實(shí)習(xí)內(nèi)容及過(guò)程為了達(dá)到畢業(yè)實(shí)習(xí)的預(yù)期目的。在實(shí)習(xí)過(guò)程中，積極肯干，虛心好學(xué)、工作認(rèn)真負(fù)責(zé)，勝任單位所交給我的工作，并提出一些合理化建議，多做實(shí)際工作，為企業(yè)的效益和發(fā)展做出貢獻(xiàn)。三是在實(shí)習(xí)單位受到認(rèn)可并促成就業(yè)......本文來(lái)自公務(wù)員之家，查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。是的，頂崗實(shí)習(xí)的生活是艱辛的挑戰(zhàn)的。對(duì)我們湖南人來(lái)說(shuō)菜里面沒(méi)有一點(diǎn)辣椒是吃不下的，因此在那里的時(shí)候開始一段時(shí)間都只是吃一點(diǎn)點(diǎn)飯，很快身材就“苗條”啦。所以這個(gè)一定要很認(rèn)真的做，不能粗心大意，害別人幫你善后。就這樣到我正式獨(dú)立上崗時(shí)，我也像我?guī)煾的菢营?dú)立上崗啦，并不用要人幫忙啦。曾經(jīng)問(wèn)過(guò)師哥師姐，答案卻是相差甚大，一切都是未知數(shù)。另外在這里,學(xué)校的領(lǐng)導(dǎo)和老師都給了我很多幫助。他們無(wú)論在教學(xué)技能和教學(xué)經(jīng)驗(yàn)上都能給我們很多指導(dǎo)和幫助。而我們每個(gè)禮拜也會(huì)去聽指導(dǎo)老師的課，從他們身上，我們能夠看到自己的不足，使自己在教學(xué)實(shí)際中揚(yáng)長(zhǎng)避短。我機(jī)械得重復(fù)了在臺(tái)下不知念了多少遍的開場(chǎng)白。等我大汗淋漓的走下講臺(tái)，我知道我已成功地走出第一步。我?guī)е邼c忐忑抱著課本和教案走上講臺(tái)時(shí)，盡管我做了很多準(zhǔn)備，但當(dāng)我真正面對(duì)那么多雙眼睛時(shí)，我還是緊張了。短暫的猶豫之后，我剩下來(lái)的只有微笑，因?yàn)槲蚁肫鹆四蔷湓?.....本文來(lái)自公務(wù)員之家，查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。下面我對(duì)自己的頂崗生活進(jìn)行一個(gè)小小的總結(jié)。二、掌握重難點(diǎn)，清晰理思路一直都聽說(shuō)講課是一門藝術(shù)，老師是演員，他們?cè)谡n堂上扮演形形色色的角色。三、板書不發(fā)愁上課的過(guò)程中板書是不可或缺的，由于在實(shí)習(xí)之前我沒(méi)有很好的練板書以至于剛開始時(shí)都搞不清楚......本文來(lái)自公務(wù)員之家，查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。公司多年來(lái)集中有限資源、充分挖掘出了自身的比較競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，通過(guò)觀念創(chuàng)新、技術(shù)創(chuàng)新、服務(wù)創(chuàng)新來(lái)保證企業(yè)高速發(fā)展。以下是我的畢業(yè)實(shí)習(xí)報(bào)告總結(jié)：工作能力：在實(shí)習(xí)過(guò)程中，積極肯干，虛心好學(xué)、工作認(rèn)真負(fù)責(zé)，勝任單位所交給我的工作，并提出一些合理化建議，多做實(shí)際工作，為企業(yè)的效益和發(fā)展做出貢獻(xiàn)。在人生的岔路口徘徊，想搭上青春的最后一班列車。同時(shí)，頂剛實(shí)習(xí)也圓了我兒時(shí)的夢(mèng)想，當(dāng)一名光榮的人民教師！懷揣著為四年大學(xué)生活畫上最濃重一筆的愿望和兒時(shí)最初的夢(mèng)想，來(lái)到了我的目的地——縣鎮(zhèn)中學(xué)。讓我欲哭無(wú)淚的是領(lǐng)導(dǎo)讓我教八年級(jí)三班和四班的語(yǔ)文。沒(méi)幾天活動(dòng)就從我們這些大學(xué)生和新入編的教師開始，很郁悶的是我是語(yǔ)文教研組第一個(gè)吃螃蟹的人，并且那天才上午告訴我，叫我下午放學(xué)后留一個(gè)班聽我的課！頓覺眼前一片黑暗，趕緊急急忙忙開始準(zhǔn)備了！最終我選擇了八三班，上課前告訴自己不要緊張結(jié)果還是很不安，因?yàn)閬?lái)了七八個(gè)語(yǔ)文老師還有張校長(zhǎng)。從第一次見面學(xué)生們作自我介紹開始場(chǎng)面就很火，后來(lái)上課的時(shí)候有些學(xué)生也是一點(diǎn)規(guī)矩都不懂：別的同學(xué)回答問(wèn)題，有在下面笑的，有起哄的，還有說(shuō)話嘮嗑的；站的時(shí)候沒(méi)有站相，坐的時(shí)候怎么做的都有，五花八門（趴著的，斜著的，靠墻的，杵著的......）大多數(shù)學(xué)生上課不積極舉手，很多時(shí)候我動(dòng)員半天，好說(shuō)歹說(shuō)人家就是無(wú)動(dòng)于衷，上課就干等著老師喂，很多時(shí)候我開玩笑問(wèn)他們：“都活著嗎？”“能出氣唄？”課堂紀(jì)律我得節(jié)節(jié)強(qiáng)調(diào)，節(jié)節(jié)給他們上思想教育課！可我不想耽誤正常的教學(xué)活動(dòng)，終于把我氣得氣急敗壞——哭啦！事后全班同學(xué)給我道歉，不過(guò)讓我欣慰的是，八四班真的變化很大......本文來(lái)自公務(wù)員之家，查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。我在學(xué)校的把關(guān)，自己的努力下，在廣州找到了我的第一個(gè)實(shí)習(xí)的地方廣州塑料五金模具廠。雖然我學(xué)的專業(yè)是設(shè)計(jì)，但我還是剛剛才出來(lái)的，沒(méi)有啥經(jīng)驗(yàn)，所以要從低做起。攻絲的時(shí)候，最怕的就是攻著攻著，絲攻突然斷掉了，半節(jié)卡在孔里。所以獨(dú)自一個(gè)人在那里弄，弄了半天也沒(méi)弄出來(lái)，心里更加慌了。從最開始的是銑鍵槽，一般都是8厘和6厘的。經(jīng)過(guò)一個(gè)多月的學(xué)習(xí)，基本上能車出工廠所需要的零件，但也有一些沒(méi)有掌握到，像滾筒啊，我就不會(huì)車了......本文來(lái)自公務(wù)員之家，查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。在這一周的時(shí)間里我基本上就沒(méi)有什么事情做，天天在各種機(jī)床旁看別人加工物品，有時(shí)也幫他們做一些我力所能及的事情。但我們錯(cuò)了，它一樣有矮小的房屋，有骯臟的街道，有沿街行討的乞丐。所幸之后的一個(gè)星期的培訓(xùn)，那里的領(lǐng)導(dǎo)和帶我們的師傅給了我們極大的關(guān)懷和支持，對(duì)我們盛情款待，百般呵護(hù)，無(wú)論在生活上還是在感情上都給予了極大的幫助，使我們煩燥不安的心情暫時(shí)平靜下來(lái)。在酒店實(shí)習(xí)的這段日子里發(fā)生了很多事，比如有的同學(xué)在寢室洶酒，鬧得寢室不得安寧，有的同學(xué)晚上下班后，跑到外面去溜或上網(wǎng)，還有的同學(xué)因某些因素跟酒店員工爭(zhēng)吵等等。有的客人對(duì)自己的親朋好友和善、友愛，但對(duì)服務(wù)員卻是冷言冷語(yǔ)的；有的客人因?yàn)樾那椴缓?，就拿服?wù)員出氣，故意找服務(wù)員的碴；還有的素