【正文】 屬名；co：種名；R：株；Ⅰ：發(fā)現(xiàn)次序) 簡單敘述同尾酶和同裂酶的差別。3）溫度 ：不同的限制性內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同。第三章 基因克隆的酶學基礎(chǔ) 限制性核酸內(nèi)切酶的類型，基因工程常用的是哪種限制性核酸內(nèi)切酶？（常用II型） 什么是星活性，產(chǎn)生星活性的因素可能有哪些？在非最適合的條件下酶的識別特異性降低，產(chǎn)生非特異性帶，這種活性稱星活性。9. 基因文庫的類型包括哪兩種？各有什么特點？10. 一般質(zhì)粒DNA的構(gòu)型有哪幾種？在瓊脂糖凝膠電泳中的有何特點？超螺旋質(zhì)粒DNA、開環(huán)質(zhì)粒DNA、線狀質(zhì)粒DNA在瓊脂糖凝膠電泳的特點是：電泳的泳動速度由大到小分別是：超螺旋質(zhì)粒DNA線狀質(zhì)粒DNA開環(huán)質(zhì)粒DNA11. 堿裂解法提取質(zhì)粒DNA的原理，分析影響試驗結(jié)果的各種可能因素。探針按核酸分子分：DNA探針和RNA探針；按標記物的不同：放射性標記探針和非放射性標記探針。(5)Mg2+濃度：常用 ； 影響：酶的活性、引物模板退火、特異性167。mol/L，特異性、保真性；167。濃度高，非特異性擴增增加； 179。影響PCR擴增的影響因素：167。 pH值：偏堿性，帶負電荷 220。電壓高則快 216。2. DNA凝膠電泳中影響電泳遷移率的因素主要有哪些？1）分子本身的影響 216。濃度越大，復性越容易。DNA變性后，它的一系列性質(zhì)發(fā)生變化，如紫外吸收(260 nm)值升高（增色效應(yīng)）, 粘度降低等，如DNA增加25－40%. %。只有測試合格了，才能投放市場。首先，通過該項技術(shù)可以提供人們所需要的特性，改良培育新品種；第二，延長食品保存時間或增加營養(yǎng)成分；第三，將抗蟲防菌基因轉(zhuǎn)入到作物中，使作物本身產(chǎn)生抵抗病蟲害侵襲的能力， 減少了農(nóng)藥的使用量，有利于環(huán)境保護；第四，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及基因食物在醫(yī)學方面得到廣泛研究和應(yīng)用。1）、目的基因的分離2）、DNA的體外重組（載體、受體系統(tǒng)等）3）、重組DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞及其篩選4）、基因在受體細胞內(nèi)的擴增、表達、檢測及其分析。定義：在體外把核酸分子（DNA的分離、合成）插入載體分子，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合（重組DNA），引入原先沒有這類分子的受體細胞內(nèi)，穩(wěn)定地復制表達繁殖，培育符合人們需要的新品種（品系），生產(chǎn)人類急需的藥品、食品、工業(yè)品等。特征：具跨越天然物種屏障的能力?；蚬こ淘谑称饭I(yè)上有何應(yīng)用發(fā)展？主要是通過基因重組，使各種轉(zhuǎn)基因生物提高生產(chǎn)谷氨酸、調(diào)味劑、酒類和油類等有機物的產(chǎn)率；或者改良這些有機物組成成分，提高利用價值。人們對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的主要擔憂在于環(huán)境方面。因此公眾完全可以安全地消費、大膽地食用轉(zhuǎn)基因食品。 DNA的分子特性與利用 原核生物和真核生物的基因表達調(diào)控有何差別？1）原核基因表達調(diào)控的三個水平：轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控、翻譯水平調(diào)控、蛋白質(zhì)加工水平的調(diào)控原核基因表達調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控。 DNA復性及其影響因素。（附加：注意：將熱變性的DNA驟然冷卻至低溫時，DNA不可能復性。分子的大?。盒t快 216。電壓太高則結(jié)果不準確常用3~5V/CM3）支持物介質(zhì) 216。 離子濃度：離子濃度高_ 電流大_發(fā)熱快_膠溶解 220。(1)Taq酶：常用1U/25181。酶的活性；167。(3)模板：主要考慮純度及使用量，對純度要求不高，但含有酚、氯仿等雜質(zhì)則難以成功。(6)PCR反應(yīng)程序設(shè)定：變性溫度和時間、引物退火溫度Tm與時間、引物延伸溫度與時間和循環(huán)數(shù)4. PCR引物設(shè)計的原則，若給一指定DNA序列并需要通過PCR擴增此序列，如何設(shè)計擴增引物？（關(guān)于如何設(shè)計這個問題，靠自己了）引物設(shè)計原則： G+C含量4555%； Tm值高于55； 引物特異性； 引物擴增跨度； 是否形成引物二聚體5. 定量PCR的原理？Ct值的含義。標記類型：按核酸分子的不同：可分為DNA探針和RNA探針根據(jù)標記物的不同：可分放射性標記探針和非放射性標記探針；雙鏈DNA探針標記主要方法：切口平移法、隨機引物合成法；7. Southern雜交一般過程及影響雜交因素。堿裂解法原理：在堿性條件下，雙連DNA氫鍵斷裂，結(jié)構(gòu)破壞變性，環(huán)狀超螺旋質(zhì)粒不充分變性。產(chǎn)生Star活性的因素：（書上P46P47答案）高濃度甘油，堿性pH，存在Mn2+，低離子強度，低鹽濃度，低pH 結(jié)合已做的實驗，分析影響酶切的因素。大多數(shù)是37 oC，少數(shù)要求4065 oC。同尾酶：來源不同，識別的序列不同，但能切出相同的粘性末端，連接后不能被相關(guān)的酶同時切割。） 連接酶主要有哪些類型？有何異同點？影響連接酶連接效果的因素主要有哪些？類型：DNA連接酶和RNA連接酶異同點：相同點：都能以DNA為模板，從539。 影響因素：（影響因素就四個，后面分析覺得煩的話大家自己看著辦啦）1）連接所用的目的片段的狀態(tài)： 185。連接效果最好在37 ℃，但形成的互補不穩(wěn)定。 ATP：反復凍熔，ATP活性降低，ATP溶解度不高，連接緩沖液宜分裝； 185。 185。在體系中加一點切載體的酶，只要連接后原來的酶切位點消失。 質(zhì)粒的不相容性及其分子機理。這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能，如有利于進行篩選的標志基因、單一的限制酶切點等。重組體分子的選擇方法主要有哪些？并簡單闡述其原理。用已學過的重組體分子的選擇與鑒定技術(shù)，試設(shè)計一個試驗方案，假如一特異PCR擴出的基因或基因片斷重組進T載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，如何鑒定并獲得真實轉(zhuǎn)化子？(自理)第五章 基因的克隆一般方法基因的克隆方法主要有哪些？并闡述其克隆原理（至少3種，都是書上找的，自選哈，建議必選DD RTPCR和SSH，原因請看下題）？1）差減雜交（SH）通過DNA復性動力學原理富集目的基因序列，并以此構(gòu)建減數(shù)文庫的方式來進行目的基因分離克隆的。4）DNA代表性差異分析（DNA RDA）代表性差別分析是通過突變型（驅(qū)趕DNA，driver DNA）與野生型（檢測DNA，tester DNA）基因組之間的差異來分離和鑒定突變基因的方法。[參考文獻：，2006，34（15）：36253628）]6）cDNA微陣列建立一套統(tǒng)一且具有高質(zhì)量、高代表性的cDNA列陣膜，在這一列陣膜上每個cDNA克隆都有固定的位置和編號，這樣大大方便了數(shù)據(jù)的綜合比較分析，并可對每個cDNA克隆子進行定量分析。l 所需的mRNA量少。l 工作量大。（P221）抑制性差減雜交的原理與應(yīng)用。酵母雙雜交技術(shù)、噬菌體表面展示技術(shù)的原理。B．噬菌體表面展示技術(shù)原理：當外源DNA片段插入絲狀噬菌體基因組的一個外被蛋白基因中時，如果兩者讀碼框結(jié)構(gòu)保持一致，這個外源DNA片段所編碼的產(chǎn)物可與此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表達，并顯示在噬菌體的表面。216。 用TDNA片段做probe篩選突變體文庫，獲得陽性克隆。 把陽性克隆轉(zhuǎn)化突變體進行功能互補及進行測序分析?；蚩寺”磉_系統(tǒng)成熟、完善； 242。缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的復性功能； 242。甲醇酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)點：252。 可高密度發(fā)酵252。（1）表達蛋白用于生物化學和分子生物學研究 ——主要考慮保持蛋白質(zhì)原有的功能不變；表達策略：融合表達和直接表達（2）表達蛋白用作抗原——主要考慮表達蛋白的快速提純；表達策略：以包涵體形式合成目的蛋白和融合表達目標蛋白（不用去除標簽蛋白）（3）表達蛋白用作結(jié)構(gòu)研究——表達蛋白以天然可溶形式產(chǎn)生；表達時考慮因素：表達溫度（高溫促進包涵體的形成）；表達水平（高表達促成包涵體的形成）；表達載體受體菌。植物基因工程什么叫轉(zhuǎn)基因植物？植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線主要包括哪些？利用DNA重組技術(shù)，在離體條件下對不同生物的DNA進行加工，并按照人們的意愿和適當?shù)妮d體重新組合，再將重組DNA轉(zhuǎn)入生物體或細胞內(nèi)，并使其在生物體內(nèi)或細胞中表達的植物。對報告基因來講，還可以利用報告基因的顯色或發(fā)光特性進行選擇與 鑒定出現(xiàn)轉(zhuǎn)基因沉默現(xiàn)象的可能原因分析。通過這次實踐，使我對村委會實務(wù)有所了解，也為我今后的順利工作打下了良好的基礎(chǔ)。一封信件沒有及時收發(fā)，很有可能造成工作的失誤、嚴重的甚至會造成巨大的經(jīng)濟損失。每次郵遞員送來的信件，我都要親自檢查有無開封、損壞的函件，如果發(fā)現(xiàn)有損壞的函件，我馬上聯(lián)絡(luò)接收人親自來查收。在工作之余，我還經(jīng)常去村民家里，幫助他們做一些我力所能及的事情，也讓我收獲了很多知識，學會了許多技能。在這里，我感受到了村民們的純樸，也體會到了農(nóng)村生活的不易，更加深刻的認識到了作為當代大學生身上肩負的使命。第一，該村村委會的工作人員文化水平相對偏低，在村務(wù)工作的處理上，方式方法比較粗放。三、實習的心得體會剛開始去村村委會實習的時候，我的心情充滿了激動、興奮、期盼、喜悅。不僅是進行了一次良好的校外實習......本文來自公務(wù)員之家，查看正文請使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。二、實習內(nèi)容及過程為了達到畢業(yè)實習的預(yù)期目的。在實習過程中，積極肯干，虛心好學、工作認真負責，勝任單位所交給我的工作，并提出一些合理化建議，多做實際工作，為企業(yè)的效益和發(fā)展做出貢獻。三是在實習單位受到認可并促成就業(yè)......本文來自公務(wù)員之家，查看正文請使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。是的，頂崗實習的生活是艱辛的挑戰(zhàn)的。對我們湖南人來說菜里面沒有一點辣椒是吃不下的，因此在那里的時候開始一段時間都只是吃一點點飯，很快身材就“苗條”啦。所以這個一定要很認真的做，不能粗心大意，害別人幫你善后。就這樣到我正式獨立上崗時，我也像我?guī)煾的菢营毩⑸蠉徖?，并不用要人幫忙啦。曾?jīng)問過師哥師姐，答案卻是相差甚大，一切都是未知數(shù)。另外在這里,學校的領(lǐng)導和老師都給了我很多幫助。他們無論在教學技能和教學經(jīng)驗上都能給我們很多指導和幫助。而我們每個禮拜也會去聽指導老師的課，從他們身上，我們能夠看到自己的不足，使自己在教學實際中揚長避短。我機械得重復了在臺下不知念了多少遍的開場白。等我大汗淋漓的走下講臺，我知道我已成功地走出第一步。我?guī)е邼c忐忑抱著課本和教案走上講臺時，盡管我做了很多準備，但當我真正面對那么多雙眼睛時，我還是緊張了。短暫的猶豫之后，我剩下來的只有微笑，因為我想起了那句話......本文來自公務(wù)員之家，查看正文請使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。下面我對自己的頂崗生活進行一個小小的總結(jié)。二、掌握重難點，清晰理思路一直都聽說講課是一門藝術(shù)，老師是演員，他們在課堂上扮演形形色色的角色。三、板書不發(fā)愁上課的過程中板書是不可或缺的，由于在實習之前我沒有很好的練板書以至于剛開始時都搞不清楚......本文來自公務(wù)員之家，查看正文請使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。公司多年來集中有限資源、充分挖掘出了自身的比較競爭優(yōu)勢，通過觀念創(chuàng)新、技術(shù)創(chuàng)新、服務(wù)創(chuàng)新來保證企業(yè)高速發(fā)展。以下是我的畢業(yè)實習報告總結(jié)：工作能力：在實習過程中，積極肯干，虛心好學、工作認真負責，勝任單位所交給我的工作，并提出一些合理化建議，多做實際工作，為企業(yè)的效益和發(fā)展做出貢獻。在人生的岔路口徘徊，想搭上青春的最后一班列車。同時，頂剛實習也圓了我兒時的夢想，當一名光榮的人民教師！懷揣著為四年大學生活畫上最濃重一筆的愿望和兒時最初的夢想，來到了我的目的地——縣鎮(zhèn)中學。讓我欲哭無淚的是領(lǐng)導讓我教八年級三班和四班的語文。沒幾天活動就從我們這些大學生和新入編的教師開始，很郁悶的是我是語文教研組第一個吃螃蟹的人，并且那天才上午告訴我，叫我下午放學后留一個班聽我的課！頓覺眼前一片黑暗，趕緊急急忙忙開始準備了！最終我選擇了八三班，上課前告訴自己不要緊張結(jié)果還是很不安，因為來了七八個語文老師還有張校長。從第一次見面學生們作自我介紹開始場面就很火，后來上課的時候有些學生也是一點規(guī)矩都不懂：別的同學回答問題，有在下面笑的，有起哄的，還有說話嘮嗑的；站的時候沒有站相，坐的時候怎么做的都有，五花八門（趴著的，斜著的，靠墻的，杵著的......）大多數(shù)學生上課不積極舉手，很多時候我動員半天，好說歹說人家就是無動于衷，上課就干等著老師喂，很多時候我開玩笑問他們：“都活著嗎？”“能出氣唄？”課堂紀律我得節(jié)節(jié)強調(diào)，節(jié)節(jié)給他們上思想教育課！可我不想耽誤正常的教學活動，終于把我氣得氣急敗壞——哭啦！事后全班同學給我道歉，不過讓我欣慰的是，八四班真的變化很大......本文來自公務(wù)員之家，查看正文請使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。我在學校的把關(guān)，自己的努力下，在廣州找到了我的第一個實習的地方廣州塑料五金模具廠。雖然我學的專業(yè)是設(shè)計，但我還是剛剛才出來的，沒有啥經(jīng)驗，所以要從低做起。攻絲的時候，最怕的就是攻著攻著，絲攻突然斷掉了，半節(jié)卡在孔里。所以獨自一個人在那里弄，弄了半天也沒弄出來，心里更加慌了。從最開始的是銑鍵槽，一般都是8厘和6厘的。經(jīng)過一個多月的學習，基本上能車出工廠所需要的零件，但也有一些沒有掌握到，像滾筒啊，我就不會車了......本文來自公務(wù)員之家，查看正文請使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。在這一周的時間里我基本上就沒有什么事情做，天天在各種機床旁看別人加工物品，有時也幫他們做一些我力所能及的事情。但我們錯了，它一樣有矮小的房屋，有骯臟的街道，有沿街行討的乞丐。所幸之后的一個星期的培訓，那里的領(lǐng)導和帶我們的師傅給了我們極大的關(guān)懷和支持，對我們盛情款待，百般呵護，無論在生活上還是在感情上都給予了極大的幫助，使我們煩燥不安的心情暫時平靜下來。在酒店實習的這段日子里發(fā)生了很多事，比如有的同學在寢室洶酒，鬧得寢室不得安寧，有的同學晚上下班后，跑到外面去溜或上網(wǎng)，還有的同學因某些因素跟酒店員工爭吵等等。有的客人對自己的親朋好友和善、友愛，但對服務(wù)員卻是冷言冷語的；有的客人因為心情不好，就拿服務(wù)員出氣，故意找服務(wù)員的碴；還有的素