離子交換層析ppt課件-wenkub
2023-05-27 12:40:56 本頁面
【正文】 具有更活潑的離子或基團 , ? 改變?nèi)芤旱? pH 或離子強度 ? *增強洗脫液與離子交換劑的結(jié)和力 ? *降低待分離物與離子交換劑的結(jié)合力 ? 洗脫方式 :梯度洗脫 離子交換層析分離氨基酸及其測定 ? (一 )原理 ? 氨基酸是兩性電解質(zhì)，各有一定的等電點（ pI）。離子交換層析 ? 概述： ? 用于生物大分子物質(zhì)如酶、蛋白質(zhì)、多肽、核酸、寡核苷酸、病毒、噬菌體、多糖的分離和純化。在溶液 pH 小于其 pI 值時均帶正電荷，反之則帶負電荷。賴氨酸帶正電荷，與樹脂緊密結(jié)合而不被洗脫?；撬峄鶊F能夠與帶正電荷的陽離子發(fā)生可逆的離子交換反應。 ? ? 稱取天冬氨酸 、 賴氨酸各 10 mg 溶于 10 ml ? 檸檬酸鈉緩沖液中 。（方法同凝膠層析法）加樣 8滴。 檢測：從第 2管起每收集管中加入 ml茚三酮顯色液 ，充分混合 ， 沸水浴 10～ 15分鐘 ， 自來水冷卻 ， 觀察氨基酸與茚三酮的顯色反應 ， 若生成紫色化合物 ， 則說明收集到氨基酸 。當?shù)谝环逡怀霈F(xiàn)，換用，直至第二峰收集完畢。 ? (三 )操作 ? ：將 Dowex50裝柱后，用 脂 5分鐘。 ? 賴氨酸 pI ＞ pH 檸檬酸鈉緩沖液帶正電荷 。 ? 氨基酸可與茚三酮反應生成有色化合物。在 pH ，天冬氨酸、賴氨酸各帶有負電荷和正電荷。 ? 一 .離子交換劑 : ? 在惰性載體上引入 (以共價結(jié)合的方式 )帶有電荷的活性基團 . ? ? (1)陽離子交換劑 : ? 載體上帶有 負電荷 的功能基團 ,能結(jié)合溶液中的正電荷 . ? (2)陰離子交換劑 : ? 載體上帶
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