劉寶dna甲基化ppt課件-wenkub
2023-05-27 02:48:42 本頁面
【正文】 而使外源 DNA（如轉(zhuǎn)座子）處于沉默狀態(tài)? 提高環(huán)境適應(yīng)能力：在不改變基因型的情況下產(chǎn)生可遺傳的新表型vDNA胞嘧啶甲基化的種類和形成? 從頭甲基化 腺嘌呤甲基化過程v DNA甲基化的生物學(xué)意義? 影響基因表達(dá)狀態(tài)：通過該表基因調(diào)控區(qū) DNA甲基化程度調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄(DNA腺嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶)在 DNA? 表觀遺傳變異的原因 ：是由于表觀遺傳密碼的改變，如DNA甲基化、組蛋白的公家修飾改變等。東北師范大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心v 表觀遺傳學(xué)與 DNA甲基化v DNA甲基化作用? DNA的甲基化及其方式? DNA甲基化的生物學(xué)意義? DNA胞嘧啶甲基化的種類和形成v DNA胞嘧啶甲基化檢測? 檢測方法 ： MSAP， bisulfitesequencingv 5’氮胞苷處理對水稻 DNA甲基化的影響? 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)材料? 儀器? 試劑? 實(shí)驗(yàn)方法v 5’氮胞苷處理水稻幼苗v 植物基因組 DNA的提取與純化v 基因組 DNA酶切 連接接頭v PCR擴(kuò)增 ： 預(yù)擴(kuò)增 ， 選擇性擴(kuò)增v PAGE電泳? 預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果? 注意事項與建議? 思考題? 參考文獻(xiàn)v表觀遺傳學(xué)：? 不需要基因序列改變而產(chǎn)生的可遺傳的基因表達(dá)改變；主要包括 DNA的甲基化修飾和組蛋白氨基酸的末端修飾。? DNA甲基化：復(fù)制后，經(jīng) DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（ DMT）催化，將 S腺苷酰 L甲硫氨酸 (SAM)上的甲基基團(tuán)連接到DNA識別回文序列 GATC,(de novo(maintenance圖 4Sensitivesequencing)I酶切產(chǎn)物有擴(kuò)增帶、而 HpaII CCMsp GGTGGCTTGCCmTAGGCCTGPAGE電泳 I5’…GG…CCGG…var5’氮胞苷可以與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（ DMT）結(jié)合從而抑制其活性，在 DNA復(fù)制過程中抑制維持甲基化作用，使復(fù)制后的 DNA甲基化水平降低。氣浴搖床 水浴搖床 A: NaCl， 2%CTAB。rTaq， 10XGACTGCGTACCAATTCA3180。)? 選擇性擴(kuò)增引物：H/M+AN:G)3180。C,IIDNAreactionHapII/MspI(10%冰乙酸 )，染色液 C(20%)，氯仿 :異戊醇 (24:1)，異丙醇，70%乙醇， RNA酶 A(BoricEDTA)buffer97%blue)。(1)50mg/mL,andDNA沉淀TE溶解沉淀待 DNA完全溶解后，加入 5μl不含 DNA酶的 RNA酶， 37℃ 保溫 30分鐘以除去 DNA中的 RNA。Marker（未酶切的 λDNA）估計其濃度。緩慢冷卻至室溫， 20℃ 冷凍保存?zhèn)溆谩?0mg/mL處理組， Nipponbare94℃ 變性 30秒， 56℃ 復(fù)性 30秒，72℃ 延伸 60秒 ,buffer稀釋預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物 1/10~1/40，作為PCR選擇性擴(kuò)增的 DNA模板。v按以下參數(shù)進(jìn)行 PCR擴(kuò)增反應(yīng)： 接著 94℃變性 30秒， 72℃ 延伸 80秒，共進(jìn)行 40個循環(huán)，最后 72℃ 延伸 10分鐘。自來水清洗95％酒精擦兩遍硅化：均勻擦涂親和硅化試劑于大板的一面，剝離硅化試劑于小板的一面5分鐘后， 95％酒精再擦兩遍，PAGE電泳系統(tǒng)? 尿素 PAGE膠配制
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