高效毛細(xì)管電泳ppt課件-wenkub
2023-05-22 12:08:52 本頁面
【正文】 溶液 帶正電荷 ，在管壁和溶液之間形成雙電層。 13 （ 2）有效淌度（ μef） 我們不可能在無限稀釋而又沒有其它離子、酸度等影響下進(jìn)行工作，有效淌度是實(shí)際的離子電泳淌度。 平衡時(shí)，電場力和摩擦力相等，即 qE = fvep 電泳速度為 棒狀粒子）(4 qEfqEv ep ? ? ???11 不同物質(zhì)在同一電場中，由于它們的有效電荷、形狀大小的差異，它們的電泳速度不同，所以可能實(shí)現(xiàn)分離 球形粒子）(6 qEfqEv ep ? ? ???我們把溶質(zhì)在給定溶液中和單位電場強(qiáng)度下的電泳速度稱為電泳淌度，用 μep表示。 第二節(jié) 基本原理 一、電泳和電泳淌度 1. 電泳與電泳速度 9 在一定電場強(qiáng)度作用下，溶質(zhì)帶電粒子在溶液中的定向移動（遷移），這種現(xiàn)象稱為電泳。 7 一般幾十秒至十幾分，最多半小時(shí)，即可完成一個(gè)試樣的分析。色譜中所用的一些名詞概念和基本理論，如保留值、塔板理論、速率理論等均可借用于毛細(xì)管電泳中。 第一節(jié) 毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)和分類 一、電泳和色譜 4 電泳是溶液中帶電粒子在電場力作用下發(fā)生定向運(yùn)動，因粒子所帶電荷數(shù)、形狀、大小等不同，導(dǎo)致不同的遷移速度而分離。 2 毛細(xì)管電泳（ capi1lary electrphoresis， CE）和傳統(tǒng)電泳的根本區(qū)別在于前者設(shè)法使電泳過程在散熱效率極高的毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行，從而確保引入高的電場強(qiáng)度，全面改善分離質(zhì)量。1 第十章 高效毛細(xì)管電泳法 電泳是溶液中帶電粒子在電場力作用下，以不同的速度向電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。 20世紀(jì) 30－ 40年代 蒂塞利烏斯(） 建立了移動界面電泳，將電泳發(fā)展成分離技術(shù) 獲得 1948年諾貝爾化學(xué)獎 3 l967年 Hjerten最先提出在高電場強(qiáng)度，直徑為 3mm的毛細(xì)管中作自由溶液的毛細(xì)管區(qū)帶電泳，開創(chuàng)了 CE的先河。色譜是不同組分在流動相的推動下，由于在固定相流動相中的分配系數(shù)不同，導(dǎo)致不同的遷移速度而分離。 5 6 二、毛細(xì)管電泳的特點(diǎn) 1. 柱效高 高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬塊 /米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬。 通過改變操作模式和緩沖液的成分， CE有很大的選擇性，可以根據(jù)不同的分子性質(zhì)，對極廣泛的對象進(jìn)行有效的分離。帶電粒子在電場中遷移時(shí)，所受的電場力為 q: 溶質(zhì)離子所帶的有效電荷 E: 電場強(qiáng)度 帶電粒子在溶液中運(yùn)動時(shí)受到的阻力即摩擦力為 qEF E ?epf fvF ? epv 是電泳速度 10 f為摩擦系數(shù)，其大小與帶電粒子的大小、形狀以及介質(zhì)粘度有關(guān)。 ? ? ????4qEv epep2．電泳淌度 12 所以淌度不同是電泳分離的內(nèi)因和前提。 （ 3）表觀淌度（ μap） 在有電滲存在下，測得的實(shí)際離子淌度稱為表觀淌度或凈淌度，是有效淌度 μef和電滲淌度μos的矢量和。 Zeta電位 16 由于溶液中的陽離子實(shí)際上是溶劑化的， 在外電場的作用下，溶劑化的陽離子向負(fù)極移動， 將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動，這就是毛細(xì)管電泳中的電滲現(xiàn)象。即 EEv osos?????? ε、 η－分別是電泳介質(zhì)的介電常數(shù)和粘度 , ζ－毛細(xì)管壁的 Zeta電位，它近似等于擴(kuò)散層與緊密層界面上的電位。但如果將毛細(xì)管內(nèi)壁改性，比如在在內(nèi)壁表面涂漬或鍵合一層陽離子表面活性劑，將使壁表面帶正電荷，則電滲流帶負(fù)電荷，向正極移動。 20 HPLC流動相的流形為拋物線形的層流，在管壁處的速度為零，管中心的速度是平均速度的 2倍， 引起的譜峰展寬較大。 21 22 陽離子： vap＝ vos+vef 陰離子： vap＝ vos－ vef 中性分子： vap＝ vos 當(dāng)把試樣從陽極端注入到毛細(xì)管內(nèi)時(shí)，不同電性的粒子將按不同的速度向負(fù)極遷移，從負(fù)極端先后流出毛細(xì)管。 ② 改變電滲流的大小和方向，可以改變分離效率和選擇性。 24 三、 HPCE中影響電滲流的因素 電滲流速度和電場強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時(shí)，電滲流速度正比于工作電壓。 26 緩沖溶液離子強(qiáng)度，影響雙電層的厚度、溶液粘度和工作電流，明顯影響電滲流大小。 溫度每變化 1度，將引起背景電解質(zhì)溶液粘度變化 2%～ 3%； 29 5. 添加劑的影響 （ 1）加入濃度較大的中性鹽，如 K2SO4，溶液離子強(qiáng)度增大，電滲流減小。因?yàn)槊?xì)管中，沒有固定相，不存在組分在固定相中分配和保留。 Vap小， tm長，譜峰展寬。 在實(shí)
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