高效液相色譜儀的應(yīng)用-wenkub
2023-05-14 05:04:22 本頁(yè)面
【正文】 s LC600 3 高效液相色譜儀展示 3 高效液相色譜儀展示 3 高效液相色譜儀展示 3 高效液相色譜儀展示 ? 貯液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中 具有不同的分配系數(shù)。 ? 高 效： 一根柱子可以分離 100 種以上的組分。 ? 柱色譜：吸附、分配、離子交換、凝膠柱色譜。 ? 凝膠色譜 (排阻色譜 )：是利用凝膠對(duì)不同組分因分子大小不同而阻滯作用不同使混合物得以分離。檢測(cè)限越小，儀器性能越好。靈敏度越高，檢測(cè)限越小。可掩蔽噪聲和小峰，它與整個(gè)液相色譜系統(tǒng)有關(guān)。 ? 分配系數(shù)（ K）：分配平衡后，組分在固定相與流動(dòng)相中的濃度之比。 ? 死時(shí)間：流動(dòng)相通過(guò)色譜系統(tǒng)的時(shí)間。它反映檢測(cè)器本底的高低?，F(xiàn)代分析儀器應(yīng)用技術(shù) ? — 高效液相色譜儀 ? 主講： 李春萍 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 15991386045 02987092379 內(nèi)容 ?色譜法基本知識(shí) ?高效液相色譜相關(guān)內(nèi)容 ?影響分離的因素 ?實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作 ?主要分析步驟 一、色譜分析法 – 起源 – 基本概念 – 分類 起源 :1906年俄國(guó)植物學(xué)家米哈伊爾 ? 噪聲：由未知的偶然因素引起的基線起伏現(xiàn)象。在 HPLC中為溶劑峰前沿出現(xiàn)的時(shí)間。 K與組分、固定相、流動(dòng)相及溫度有關(guān)。 ? 線性范圍：當(dāng)注入最小至最大進(jìn)樣量時(shí)，檢測(cè)器響應(yīng)處于與進(jìn)樣量成正比的范圍。它是沒(méi)有考慮噪聲，其高低變化并不能嚴(yán)格表示檢測(cè)器的檢測(cè)能力。 色譜法分類 按分離的機(jī)理可分為： ? 吸附色譜：是利用吸附劑表面對(duì)不同組分吸附性能的差別而使混合物得以分離。 ? 親和色譜、毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電色譜。 按流動(dòng)相狀態(tài)的不同，可分為： ? 氣相色譜法 (GC) ? 液相色譜法 (LC) ? 超臨界流體色譜 (SFC) 二、高效液相色譜相關(guān)內(nèi)容 ? 特點(diǎn) ? 研究對(duì)象 ? 高效液相色譜儀展示 ? 高效液相色譜儀工作流程 ? 高效液相色譜儀結(jié)構(gòu) ? 高效液相色譜法分類 1 HPLC特點(diǎn) 高效液相色譜法是 20世紀(jì) 60年代后期發(fā)展起來(lái)的一種新穎、快速的分離分析技術(shù)。 ? 高靈敏度： 用微升數(shù)量級(jí)的試樣可進(jìn)行分析。 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附 解吸的分配過(guò)程，各組分在 移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出。 高壓輸液系統(tǒng) 泵的保養(yǎng) ? 使用流動(dòng)相盡量要清潔； ? 進(jìn)液處的砂芯過(guò)濾頭要經(jīng)常清洗； ? 流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀； ? 避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡。 ? 轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢 ， 更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻， 使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過(guò)泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)， 過(guò)高的壓力將使柱頭損壞 。金屬管用得較多。 柱子形狀 ? 色譜柱一般長(zhǎng) 5～ 30cm，內(nèi)徑 4～ 5mm，凝膠色譜柱內(nèi)徑 3～ 12mm，制備柱內(nèi)徑較大，可達(dá) 25mm以上。 ▲ 進(jìn)樣樣品要提純并嚴(yán)格控制進(jìn)樣量； ▲ 在酸或堿性條件下使用后，應(yīng)依次用水和甲醇清洗。 光電二極管陣列檢測(cè)器 (PDA) ? 由 1024個(gè)二極管陣列組成，可檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖。其 工作原理： 樣品組分從色譜柱后流出，進(jìn)入檢測(cè)器后，經(jīng)歷霧化、流動(dòng)相蒸發(fā)和（光源光路）檢測(cè)三個(gè)步驟。 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ ELSD） 優(yōu) 點(diǎn)： 可以梯度洗脫；流動(dòng)池死體積不影響檢測(cè)靈敏度、噴霧氣體消耗量少；霧化器和漂移管易于清洗。 ? 流 動(dòng) 相： 不同極性的一元或多元溶劑。 正向色譜法 反相色譜法 固定相極性 高～中 中～低 流動(dòng)相極性 低～中 中～高 組分洗脫順序 極性小的先洗出 極性大的先洗出 分配色譜 ? 固 定 相： 早期涂漬固定液，固定液流失，較少采用； ? 化學(xué)鍵合固定相： 將各種不同基團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到硅膠表面的游離羥基上 。 陽(yáng)離子交換： RSO3H+M+=RSO3M+H+ 陰離子交換： RNR4OH+X=RNR4X+OH ? 應(yīng) 用： 離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。 充填劑多采用：一定孔徑的多孔性聚合物。 ? 固定相粒度： 降低固定相粒度可提高柱效。
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1