蛋白誘導(dǎo)ljppt課件-wenkub
2023-05-14 04:15:24 本頁(yè)面
【正文】 的影響，故可在SDS或尿素等存在的條件下進(jìn)行純化，這對(duì)一些溶解度不佳的重組蛋白的純化尤其有利 。?識(shí)別標(biāo)簽 β半乳糖苷酶（ lacZ） 谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶（ GST） 多聚組氨酸（ polyhis） 人工 7肽 FLAG 人工標(biāo)簽選擇表達(dá)載體常用的關(guān)鍵元件：?jiǎn)?dòng)子和調(diào)節(jié)序列（表達(dá)強(qiáng)弱、細(xì)胞或組織特異性、表達(dá)調(diào)節(jié)等，如本實(shí)驗(yàn)的乳糖操縱子。實(shí)驗(yàn)四基因的誘導(dǎo)表達(dá)與融合蛋白的純化實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握基因誘導(dǎo)表達(dá)的原理與方法?掌握蛋白質(zhì)純化的基本原理?鞏固蛋白質(zhì)電泳的基本方法基因工程的下游技術(shù)基因的誘導(dǎo)表達(dá)和重組蛋白的純化一、基因表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)載體 (含有表達(dá)元件 )IPTG誘導(dǎo)啟動(dòng)子載體 (tac/trc/lacpUC,pTZ,pSK,pBluescript,pGEM)表達(dá)宿主T7噬菌體啟動(dòng)子載體 (不依賴大腸桿菌 RNAP,T7lac)PL啟動(dòng)子載體 (溫度敏感 )原核 (大腸桿菌 物美價(jià)廉 、枯草芽孢桿菌 )真核（釀酒酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞）二、表達(dá)瓶頸?蛋白翻譯后 折疊 、 修飾 ；?蛋白翻譯后 易降解 、形成 包涵體 ；?蛋白 分離純化 、復(fù)性；?基因表達(dá)調(diào)控。）融合基因（純化、標(biāo)簽，或增強(qiáng)蛋白可溶性等。四、表達(dá)體系選擇?常用體系 — 大腸桿菌體系 （菌株 +載體） 依據(jù)： 蛋白大小 （ 100 amino acid residue） 蛋白數(shù)量 蛋白活性要求 （產(chǎn)生抗體、生物學(xué)研究、 結(jié)構(gòu)研究）主要表達(dá)小的細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子 五、實(shí)驗(yàn)流程： 細(xì)菌 親和層析IPTG誘導(dǎo)細(xì)菌總蛋白重組蛋白融合蛋白乳糖操縱子的特性SDSPAGE初步分析六
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