【正文】 物的控釋聚合物微球、藥物結(jié)晶的粉末、控釋脂質(zhì)體藥物等。近年來(lái)，超臨界萃取技術(shù)已在化工、冶金、食品、醫(yī)藥、生物等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。 3．噴霧干燥法 將生物大分子藥物及其穩(wěn)定劑的混合粉末（或水溶液）與溶有高分子聚合物的有機(jī)溶液混合形成混懸液（或乳濁液），將此混懸液（或乳濁液）經(jīng)噴嘴霧化干燥制得微球。以下介紹幾種常用于制備多肽、蛋白質(zhì)等生物大分子藥物微球的方法。首次經(jīng)FDA批準(zhǔn)的蛋白質(zhì)類藥物微球制劑是醋酸亮丙瑞林（leuprolide acetate）聚丙交酯—乙交酯微球。目前已有用PEG修飾蛋白質(zhì)分子以延長(zhǎng)蛋白質(zhì)藥物在血漿中的半衰期。噴霧干燥的缺點(diǎn)是操作過(guò)程中損失大（特別是小規(guī)模生產(chǎn)），水分含量高。此外水分也可以影響蛋白質(zhì)的化學(xué)穩(wěn)定性。在凍干過(guò)程中還應(yīng)考慮藥物的含水量與餅狀物的物理狀態(tài)（無(wú)定性或晶形）。在蛋白質(zhì)類藥物凍干過(guò)程中常加入某些凍干保護(hù)劑來(lái)改善產(chǎn)品的外觀和穩(wěn)定性，如甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、右旋糖酐等。 （一）冷凍干燥蛋白質(zhì)藥物制劑用冷凍干燥法制備蛋白質(zhì)類藥物制劑時(shí)主要考慮兩個(gè)問(wèn)題，一是選擇適宜的輔料，優(yōu)化蛋白質(zhì)藥物在干燥狀態(tài)下的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。 8．金屬離子 一些金屬離子，如鈣、鎂、鋅與蛋白質(zhì)結(jié)合，使整個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)更加緊密、結(jié)實(shí)、穩(wěn)定。 6．大分子化合物 研究表明很多大分子化合物具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)的作用。此外它們使水分子聚集在蛋白質(zhì)周圍被優(yōu)先水化，所有這些都使蛋白質(zhì)更加緊密穩(wěn)定。還原糖與氨基酸有相互作用，因此避免使用。 2．表面活性劑 由于離子型表面活性劑會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性，所以在蛋白質(zhì)藥物，如α2b干擾素、GCSF、組織溶纖酶原激活素等制劑中均加入少量非離子表面活性劑，如吐溫80來(lái)抑制蛋白質(zhì)的聚集，其機(jī)理可能是因?yàn)楸砻婊钚詣﹥A向于排列在氣—液界面上，從而使蛋白質(zhì)離開界面來(lái)抑制蛋白質(zhì)的變性。蛋白類藥物的穩(wěn)定劑有以下幾類： 1．緩沖液 因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的物理化學(xué)穩(wěn)定性與pH值有關(guān)，通常蛋白質(zhì)的穩(wěn)定pH值范圍很窄，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)木彌_系統(tǒng)，以提高蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定性。凍干粉型比較穩(wěn)定，但工藝較為復(fù)雜。對(duì)于注射給藥則采用適當(dāng)?shù)妮o料，設(shè)計(jì)合理的處方與工藝，而非注射給藥還需解決生物利用度問(wèn)題。免疫測(cè)定通常是采用免疫化學(xué)法，例如一種蛋白質(zhì)與含適當(dāng)比例的特異抗體血清，即免疫血清（用動(dòng)物免疫所得）混合，則會(huì)形成沉淀，這種建立在沉淀反應(yīng)基礎(chǔ)上的免疫化學(xué)方法非常適合于蛋白質(zhì)的定性及定量分析、蛋白質(zhì)制劑（混雜有其他蛋白質(zhì)）的均一性試驗(yàn)以及蛋白質(zhì)混合物組分的鑒定。 4．生物活性測(cè)定與免疫測(cè)定 重組DNA和雜交瘤技術(shù)產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行生物活性的測(cè)定，蛋白質(zhì)藥物制劑的穩(wěn)定性也應(yīng)檢測(cè)其生物活性。 3．電泳 電泳技術(shù)是根據(jù)在電場(chǎng)的作用下，蛋白質(zhì)在載體凝膠上產(chǎn)生特征性遷移，遷移率是所帶凈電荷及其大小的函數(shù)，以此來(lái)分離混合蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的遠(yuǎn)紫外圓二色譜直接反映蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，一種不對(duì)稱分子如蛋白質(zhì)大分子可顯示圓二色譜。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在溶液中聚集時(shí)，由于光散射，在310~400nm處有一傾斜基線，這使得吸收測(cè)定傾向于280nm。 2．光譜法 通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)吸收、輻射、散射光的定量分析可以提供有價(jià)值的信息，了解蛋白質(zhì)的量、構(gòu)象和聚集傾向。藥典中胰島素一般用生物效價(jià)法測(cè)定，因此在使用時(shí)應(yīng)建立RPHPLC與生物效價(jià)法之間的相互關(guān)系。反相色譜法是以非極性固定相與含水的極性流動(dòng)相為基礎(chǔ)的分析方法，對(duì)于大分子蛋白質(zhì)，以C4或 C8烷基鍵合于硅膠上或聚合物擔(dān)體上作固定相，固定相應(yīng)有較寬范圍的孔體積（直徑約300nm或更大），以便分子量約為5000或更大的蛋白質(zhì)能夠充分?jǐn)U散到固定相骨架中。 （2）由非共價(jià)鍵引起的不穩(wěn)定性：引起蛋白質(zhì)不可逆失活作用的下列主要類型，即聚集（aggregation）、宏觀沉淀、表面吸附與蛋白質(zhì)變性，這些都是由于與空間構(gòu)象有關(guān)的非共價(jià)鍵引起，這些現(xiàn)象在開發(fā)蛋白質(zhì)與多肽類藥物制劑中常會(huì)帶來(lái)許多困難。二硫鍵把同一肽鏈（肽鏈內(nèi)）或不同肽鏈（肽鏈間）的不同部分連接起來(lái)，對(duì)穩(wěn)定蛋白質(zhì)的構(gòu)象起重要作用。影響氨基酸消旋作用的因素有溫度、pH值、離子強(qiáng)度和金屬離子螯合作用。影響氧化的因素有溫度、pH值、緩沖介質(zhì)、催化劑的種類和氧的強(qiáng)度等。不完全水解是在酶或稀酸等較溫和的條件下進(jìn)行，水解產(chǎn)物有肽段與氨基酸。水解分完全水解與不完全水解。雖然大多數(shù)降解過(guò)程在升高溫度時(shí)發(fā)生，但是蛋白質(zhì)穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明其降解過(guò)程不符合 Arrhenius關(guān)系，故蛋白質(zhì)類藥物穩(wěn)定性的加速實(shí)驗(yàn)中應(yīng)慎重選擇其最高溫度。 2．蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定性 蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性對(duì)于蛋白質(zhì)類藥物的制劑研究、生產(chǎn)、貯存等極為重要。氨基酸在紫外230nm顯示強(qiáng)吸收。由于蛋白質(zhì)分子中存在極性基團(tuán)如NH3+、COO、NHOH、SH等，可形成水化層而穩(wěn)定。 （二）蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 1．蛋白質(zhì)的一般理化性質(zhì) 蛋白質(zhì)的分子量，小的有幾千，如胰島素（單體6000）；大的上千萬(wàn)，如斑紋病毒（煙草）（6180。疏水作用力也稱疏水鍵，疏水鍵是兩個(gè)疏水基為了避開水相而群集在一起的作用力，在維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)方面起重要作用，也是形成生物膜的主要作用力。這種空間排布的變化，僅涉及到氫鍵等次級(jí)鍵的生成與斷裂，但不涉及共價(jià)鍵的生成與斷裂。四級(jí)結(jié)構(gòu)可以由兩個(gè)以上的小亞基聚合而成。 2．蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)包括二級(jí)、三級(jí)與四級(jí)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)多肽鏈中許多氨基酸按一定的順序排列，每種蛋白質(zhì)都有特定的氨基酸排列順序。蛋白質(zhì)分子量很大，一般在5103~5106。另一方面這類藥物對(duì)酶敏感又不易穿透胃腸粘膜，故只能注射給藥，使用很不方便。表191 已批準(zhǔn)上市的生物技術(shù)藥物產(chǎn)品藥品名稱用 途批準(zhǔn)時(shí)間人胰島素糖尿病治療藥1982人生長(zhǎng)激素（hGH）治療侏儒癥1985α2b干擾素治療毛細(xì)胞白血病、乙型肝炎1986OKT3單抗（小鼠抗T細(xì)胞單抗）急性肝移植排斥反應(yīng)1986乙肝疫苗預(yù)防乙型肝炎1986組織溶纖酶原激活素急性心肌梗死1987人促紅細(xì)胞生成素（EPO）慢性腎衰貧血1987Γlb干擾素慢性肉芽腫疾病1990GM集落刺激因子（GMCSF）骨髓移植中性、白細(xì)胞減少癥1991G集落刺激因子（GCSF）腫瘤化學(xué)輔助治療、白血病、艾滋病1991白細(xì)胞介素2腎細(xì)胞癌1992凝血VIII因子血友病1992人腫瘤壞死因子突變體肺、胃、結(jié)腸腫瘤1995幼畜腹瀉疫苗預(yù)防仔豬腹瀉上市αn3干擾素生殖器疣1989小鼠抗 CD3抗體腎移植排斥反應(yīng)1986單克隆抗體（診斷劑）結(jié)腸、直腸、卵巢癌診斷1992重組DNA酶α囊性纖維變性，改進(jìn)胸功能1994抗血小板凝聚單克隆抗體防動(dòng)脈突然關(guān)閉高危性血管成形術(shù)病人1995重組葡糖腦苷脂米葡糖腦酶戈謝?。ǜ髌鞴俜e聚葡糖腦苷脂）1994重組β16干擾素緩解上皮癌、腎癌、多發(fā)性骨髓瘤1993環(huán)孢素 A抑制T淋巴細(xì)胞功能1996降鈣素治療骨質(zhì)疏松1996重組γ干擾素免疫功能障礙、癌癥、感染性疾病1992奧曲肽（octreotide）胃腸胰內(nèi)分泌腫瘤、消化性潰瘍出血、肢端肥大癥、垂體瘤、柯興氏綜合癥、糖尿病等1998*grlanulocyte／macrophage colony—stimulating factor（GM—CSF），粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子表192 部分正在研究的生物技術(shù)及其他來(lái)源的蛋白質(zhì)藥物藥 物作用與用途血管緊張素 D抑制劑降壓心房肽激素（atriopeptins）調(diào)節(jié)心血管功能降鈣素基因相關(guān)因子血管舒張藥Β內(nèi)啡肽鎮(zhèn)痛神經(jīng)生長(zhǎng)因子，hNGF刺激神經(jīng)生長(zhǎng)和修復(fù)，癡呆促胃液素抑制劑減少胃酸分泌腦啡肽刺激淋巴細(xì)胞母細(xì)胞化促胸腺生成素選擇性T細(xì)胞分化激素腫瘤壞死因子控制多形核細(xì)胞功能表皮生長(zhǎng)因子，hNGF促進(jìn)表皮生長(zhǎng)，癡呆生長(zhǎng)抑素（somatostatix）抑制胃液素分泌促性腺素促進(jìn)排卵、精子生成促黃體生成素釋放激素（LHRH）促進(jìn)下丘腦性閉經(jīng)婦女排卵催產(chǎn)素促進(jìn)分娩促甲狀腺素釋放激素（TRH）延長(zhǎng)哺乳期婦女的不育和泌乳加壓素治療尿崩癥人尿激酶原溶血栓，抗凝劑人超氧化物歧化酶腎移植，燒傷白細(xì)胞介素6腫瘤、骨髓移植，刺激造血白細(xì)胞介素11促血小板生成鏈激酶，LSK溶血栓人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子神經(jīng)損傷人胰島素生長(zhǎng)因子侏儒癥肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子重型肝炎肝癌單克隆抗體肝癌乙肝單克隆抗體乙肝反義寡聚核苷酸HIV感染和艾滋病TK載體產(chǎn)生細(xì)胞腦癌巨核細(xì)胞與發(fā)育因子刺激血小板生成脂質(zhì)體包被 IL2，OTX287腫瘤抗 CD20 基因工程抗體B細(xì)胞淋巴瘤表192中所列藥物，如環(huán)孢素 A（cyclosporin A）、降鈣素（calcitonin）、促黃體生成素釋放激素（luteinizing hormone release hormone，LHRH）類似物、催產(chǎn)素、加壓素等，用提取或其他方法生產(chǎn)，已在臨床上使用。 生物技術(shù)藥物是指采用現(xiàn)代生物技術(shù)，借助某些微生物、植物或動(dòng)物來(lái)生產(chǎn)所需的藥品。第十九章 生物技術(shù)藥物制劑第一節(jié) 概述一、生物技術(shù)的基本概念 生物技術(shù)或稱生物工程（biotechnology），是應(yīng)用生物體（包括微生物、動(dòng)物細(xì)胞，植物細(xì)胞）或其組成部分（細(xì)胞器和酶），在最適條件下，生產(chǎn)有價(jià)值的產(chǎn)物或進(jìn)行有益過(guò)程的技術(shù)。采用DNA重組技術(shù)或其他生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物，也稱為生物技術(shù)藥物。 隨著生物技術(shù)藥物的發(fā)展，肽和蛋白質(zhì)藥物制劑的研究與開發(fā)，已成為醫(yī)藥工業(yè)中一個(gè)重要的領(lǐng)域，同時(shí)給藥物制劑帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。因此，運(yùn)用制劑手段將這類藥物制成口服制劑或通過(guò)其他途徑給藥，以提高其穩(wěn)定性和患者使用的順應(yīng)性，是一項(xiàng)非常有意義的工作，具有潛在的研究?jī)r(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。蛋白質(zhì)的肽鏈結(jié)構(gòu)包括氨基酸組成、氨基酸排列順序、肽鏈數(shù)目、末端組成和二硫鍵的位置等。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)可分為一、二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)。二級(jí)結(jié)構(gòu)指蛋白質(zhì)分子中多肽鏈骨架的折疊方式，即肽鏈主鏈有規(guī)律的空間排布，一般有a螺旋結(jié)構(gòu)與b折疊形式。所謂亞基，就是含有二條或多條多肽鏈的蛋白質(zhì)，這些多肽鏈彼此以非共價(jià)鍵相聯(lián)，每一條多肽鏈都有自己的三級(jí)結(jié)構(gòu)，此多肽鏈就是該蛋白質(zhì)分子的亞單位（亞基）。蛋白質(zhì)分子只有在其立體結(jié)構(gòu)呈特定的構(gòu)象（conformation）時(shí)才有生物活性，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的作用力有氫鍵、疏水作用力（hydrophobic force）、離子鍵、范德華力、二硫鍵與配位鍵。范德華力對(duì)穩(wěn)定和維持三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)十分重要。107）。 （1）旋光性：蛋白質(zhì)分子總體旋光性由構(gòu)成氨基酸各個(gè)旋光度的