漢恒生物無縫克隆試劑盒使用說明(附原理)-wenkub
2023-04-19 23:32:08 本頁面
【正文】 ed pUC vector （250 ng）5 tests25 mlPositive control insert (500 ng)5 tests25 ml儲存條件20 ℃四、使用說明漢恒生物建議23個片段連接時，~ pmols，4~~ pmols。設(shè)計的引物５’需要和線性化載體末端有15~25 bp的重疊（圖中藍(lán)色和黃色片段，細(xì)節(jié)可參考圖3）；3. 按照一定比例把二者混合在HBinfusionTM的2180。HBinfusionTM無縫克隆試劑盒操作極其簡單，僅需在載體的克隆位點進(jìn)行線性化，并在插入片段PCR引物的5’端引入與載體克隆位點兩端完全一致的15~25 bp同源序列（圖1，圖3）。將上述線性化的克隆載體和帶有同源序列的PCR片段按合適比例混合，并加入HBinfusionTM Master mix，通過反應(yīng)體系中DNA外切酶、DNA聚合酶以及連接酶的在50℃反應(yīng)20 min即可快速完成定向克隆，陽性率幾近100%。預(yù)混液內(nèi)，50176。DNA拼接效率隨著拼接片段的數(shù)量增加或者拼接片段長度的增加逐漸降低。五、操作步驟1. 制備線性化載體和插入片段. 載體制備線性化處理 在目標(biāo)載體質(zhì)粒上選取合適的位點進(jìn)行單酶切或雙酶切，對酶切后的載體進(jìn)行割膠純化。因此，必須單酶切的時候建議延長酶切時間并脫磷處理（酶切2h過夜，CIP處
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