wb免疫印跡實(shí)驗(yàn)常見問題全匯總-wenkub
2023-04-08 05:08:12 本頁面
【正文】 于免疫組化。做200kd蛋白的WB時(shí)要注意，分離膠最好選擇7%的；剝膠時(shí)要小心；b)，要用什么方法來增加上樣量？可以濃縮樣品，也可以根據(jù)目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白。二抗失活。？DAB 有毒，但是比較靈敏，是HRP 最敏感的底物；ECL結(jié)果容易控制，但被催化時(shí)靈敏度差一點(diǎn)，但如果達(dá)到閥值，就特別靈敏，可以檢測(cè)pg 級(jí)抗原。（10KDa），請(qǐng)問怎么做WB？a)可以選擇PSQ 膜，同時(shí)縮短轉(zhuǎn)移時(shí)間。做了很久的WB（western blot），走了很多彎路，但是WB想要做好并不難，總結(jié)WB實(shí)驗(yàn)中可能會(huì)遇到的問題，分析可能的原因及對(duì)應(yīng)的解決方案，這就是實(shí)驗(yàn)成功的基石。以下，我們先解決很多技術(shù)菌的疑惑，然后再著手匯總實(shí)驗(yàn)中常見問題和可能原因分析以及給出建議解決方案。也可以將兩張膜疊在一起，再轉(zhuǎn)移。，是怎么回事？如果能夠排除下面的幾個(gè)問題那么問題多半出現(xiàn)在一抗和抗原制備上。？NaF是一種廣譜磷酸化酶的抑制劑，一般最好加。一般地，超載30％是不會(huì)有問題的。轉(zhuǎn)移時(shí)間需要相應(yīng)延長(zhǎng)；要做分子量參照（否則出現(xiàn)雜帶不知道如何分析）。？抗體工作溶液一般不主張儲(chǔ)存反復(fù)使用，但是如抗體比較珍貴，可反復(fù)使用2－3次。轉(zhuǎn)膜緩沖液pH值與目的蛋白等電點(diǎn)相近提高轉(zhuǎn)膜緩沖液pH值凝膠與膜之間存在氣泡轉(zhuǎn)膜前要排盡氣泡轉(zhuǎn)印膜種類選擇不當(dāng)使用質(zhì)量可靠的PVDF膜或硝酸纖維
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