昆蟲桿狀病毒載體ppt課件-wenkub
2023-01-23 04:46:36 本頁面
【正文】 可使之保持穩(wěn)定和感染能力。 ?桿狀病毒的基因組為單一 閉合環(huán)狀雙鏈 DNA 分子， 大小為80~ 160kb，其基因組可在昆蟲細(xì)胞核復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。 ?利用該表達(dá)系統(tǒng)獲得重組蛋白可用于藥物開發(fā)、疫苗生產(chǎn)、生物殺蟲劑等多個領(lǐng)域。昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) 高遄 生物化學(xué)與分子生物 2120422 原核細(xì)胞系統(tǒng) ?大腸桿菌細(xì)胞 ?操作簡便 ?周期短、收益大 ?表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定 ?相對分子質(zhì)量有限 ?不能對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行一些翻譯后加工 、修飾 體外基因 表達(dá)系統(tǒng) 真核細(xì)胞系統(tǒng) ?哺乳動物細(xì)胞 ?酵母細(xì)胞 ?昆蟲細(xì)胞（ 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) ） ?獨(dú)特特性 前言 高表達(dá) 低成本 安全性高 大規(guī)模生產(chǎn) 前言 ?昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是目前國內(nèi)外十分推崇的 真核表達(dá)系統(tǒng) 。據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，已有 1000 余種外源基因在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中得到了成功地表達(dá)，其中約有 95% 的外源重組蛋白能夠被正確的轉(zhuǎn)譯后加工修飾，具有與天然蛋白相同的生物活性。 DNA 復(fù)制后組裝在桿狀病毒的核衣內(nèi)，后者具有較大的柔韌性，可容納較大片段的外源 DNA 插入，因此是表達(dá)大片段 DNA 的理想載體。 ? P10 蛋白 為另一類高效表達(dá)的極晚期蛋白，也是一類病毒復(fù)制 非必需成分 ，可在細(xì)胞中形成纖維狀物質(zhì)，可能與 細(xì)胞溶解 有關(guān)。能為外源 DNA提供多種可插入的位置或插入方案。 桿狀病毒載體 ?由于 多角體基因 被破壞，則不能形成多角體。 ?具體方法有以下幾種： 基因 基因 Bacmid ? Luckow 等開發(fā)。該載體可像質(zhì)粒一樣在大腸桿菌中生長，又對鱗翅目昆蟲細(xì)胞具有感染性。 Bacmid ?在 Bacmid 中，外源基因被核多角體啟動子控制，并包含了多種抗性基因及 LacZ 缺失標(biāo)記，極大地方便了重組病毒的篩選及鑒定。還能夠解決培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞成本高，難于規(guī)?；a(chǎn)等問題。因此，在眾多昆蟲細(xì)胞系中 鱗翅目 昆蟲細(xì)胞系應(yīng)用最為廣泛。 ?相對于已知的上百萬種昆蟲以及昆蟲細(xì)胞系的廣泛用途來說，已經(jīng)建立的細(xì)胞系還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，仍需建立更多的昆蟲細(xì)胞系以滿足實(shí)際需要。 對比實(shí)驗(yàn)證明，在昆蟲細(xì)胞發(fā)生的糖基化位點(diǎn)與哺乳動物細(xì)胞中完全一致，但修飾的寡糖種類卻不完全一樣。因?yàn)榕囵B(yǎng)昆蟲幼蟲和蛹遠(yuǎn)比培養(yǎng)細(xì)胞簡單、廉價，而且利用昆蟲幼蟲或蛹能夠顯著提高外源基因的表達(dá)水平。 ④ 基因容量大 ：昆蟲桿狀病毒的基因組為單一閉合環(huán)狀雙鏈DNA分子，大小為 80 ～ 200kb，其基因組可在昆蟲細(xì)胞核中復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。 我們感興趣的另外一個特點(diǎn)是在昆蟲桿狀病毒載體內(nèi)還可多基因同時表達(dá)，具有在同一個感染昆蟲細(xì)胞內(nèi)同時表達(dá)多個外源基因的能力。 現(xiàn)有研究也表明其啟動子在哺乳動物細(xì)胞中沒有活性，因此在表達(dá)癌基因或有潛在毒性的蛋白質(zhì)時可能優(yōu)于其他表達(dá)系統(tǒng)。其中，在生物分子研究中，具有代表性的是重組蛋白的表達(dá)，是目前桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用最多的領(lǐng)域。
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