過氧化物酶ppt課件-wenkub
2023-01-20 19:57:24 本頁面
【正文】 甲氧基苯酚氧化成紅棕色的 4鄰甲氧基苯酚，其反應(yīng)為： 2022/2/2 本實(shí)驗(yàn)用紫外吸收法測(cè)定產(chǎn)物 4－鄰甲氧基苯酚在 470nm光吸收增加值表示產(chǎn)物增加量，劃出光吸收 時(shí)間的速度曲線，求出曲線的斜率，即酶促反應(yīng)初速度，再換算為酶活力。 2022/2/2 ? 如將反應(yīng)速度對(duì) pH作曲線，典型的呈鐘罩形，但不同酶受 pH影響是不同，所以會(huì)有不同形狀，有的只有鐘罩形的一半，有的則是一直線，即受 pH影響不大。 ? 由于酶活力受 pH影響很大，因此在測(cè)定酶活力時(shí)， pH必須恒定，所以測(cè)活反應(yīng)最好在緩沖液體系中進(jìn)行。 ③傾出上清液并過濾，然后轉(zhuǎn)入 10ml容量瓶定容，搖勻后，貯于冷處備用。 ? (2)取出比色杯， 1人加酶液 (181。 2022/2/2 ? (4)操作要點(diǎn)： ? * 關(guān)鍵是酶稀釋的倍數(shù)和酶量多少要合適，使 ΔA470nm在 ~，即第 1個(gè) 30秒A470nm在 。 2022/2/2 四 . 數(shù)據(jù)處理 ? 1. 用坐標(biāo)紙作出時(shí)間 – A470nm曲線，過原點(diǎn)在直線部分作切線，求斜率 ΔA470nm /min 0 1 2 3 4 5 時(shí)間 /min 1 A 470nm 2022/2/2 ? 2. 代入下式計(jì)算酶活力 ? ΔA470nm /minmol cmcm) ? L 比色杯光徑 (1cm) 2022/2/2 實(shí)驗(yàn)三 POD蛋白濃度測(cè)定 和比活力計(jì)算 2022/2/2 一 .實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? Folin酚法（ Lowry法）測(cè)定 POD蛋白濃度的原理和方法 ? 2022/2/2 二 .實(shí)驗(yàn)原理 1． Folin酚法原理 Folin酚試劑由兩種試劑組成： 甲試劑：雙縮脲試劑 尿素加熱至 180℃ 左右，兩分子尿素縮合放出一分子氨，而形成雙縮脲。但靈敏度較低， mg級(jí)水平， 0~10 mg/mL作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2022/2/2 1951年 Lowry（勞里）在 Folin酚試劑 中引入雙縮脲反應(yīng)（加入甲試劑）即成為如今廣泛被使用的 Lowry法。 Folin酚（ Lowry）法，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，迅速，不需要特殊儀器，常用作蛋白質(zhì)定量測(cè)定，文獻(xiàn)引用最多。 2022/2/2 比活力實(shí)際意義 可以說明酶的質(zhì)量好壞，純度高低。酶愈純，比活力愈高，比活力不再升高，酶就相當(dāng)純了，因此比活力用以衡量生產(chǎn)工藝優(yōu)劣、生產(chǎn)效率高低。 * 侍測(cè)樣品 x為 POD酶原液，輕輕倒置搖勻后用注射器加 50181。加一管搖一管，直接取，二人可合作，乙試劑比重大，一定要搖起來。 2022/2/2 2. 計(jì)算樣品 (POD)蛋白質(zhì)濃度 根據(jù) 7號(hào)待測(cè)樣品管光吸收值從曲線上查出對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)含量代入下式： 7號(hào)樣品對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)含量 ( 181。 2022/2/2 四 . 數(shù)據(jù)處理 1. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量 ( 15,30,45,60,75181。 2022/2/2 ： * 定量測(cè)定要求各種試劑量取準(zhǔn)確，正確規(guī)范使用移液管。 2022/2/2 三、操作步驟 每人取 16支試管，按下表平行操作 ： 1 2 3 4 5 6 7 8 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液 /mL 0 — — 待測(cè)蛋白質(zhì)溶液 /mL — — — — — — dH2O/mL 0 甲試劑 /mL 混勻，于室溫放置 10min 乙試劑 /mL 迅速混勻，室溫放置 30min后，以 dH2O為空白，在 640nm處比色 A640nm(1) A640nm (2) A640nm 2022/2/2
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