sds聚丙烯酰胺凝膠電泳(1)-wenkub
2023-05-21 13:12:34 本頁面
【正文】 膠孔大小，電壓梯度電荷分布不均勻?qū)е碌碾妷禾荻茸兓?，快離子、慢離子 分離膠 Ph= Ph= 電泳緩沖液由 Tris 、甘氨酸、 cl、SDS組成 ,甘氨酸等電點 = U=IR F=EQ=U/D*Q ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ， 是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn) SDS（ 十二烷基磺酸鈉 ） ， SDS能斷裂分子內(nèi)和分子間氫鍵 ， 破壞蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu) ， 強還原劑能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂 ， 蛋白質(zhì)在一定濃度的含有強還原劑的 SDS溶液中 ， 與 SDS分子按比例結(jié)合 ， 形成帶負(fù)電荷的 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物 ， 這種復(fù)合物由于結(jié)合大量的SDS， 使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài)形成僅保持原有分子大小為特征的負(fù)離子團(tuán)塊 ， 從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異 ， 由于 SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合是按重量成比例的 ， 因此在進(jìn)行電泳時 ， 蛋白質(zhì)分子的遷移速度取決于分子大小 。 SDS電泳的樣品緩沖液離子強度較低，通常是 10～ 100mmol/L 3) 二硫鍵是否完全被還原 ? 采用 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測蛋白質(zhì)分子量時 ， 只有完全打開二硫鍵 ， 蛋白質(zhì)分子才能被解聚 ， SDS才能定量地結(jié)合到亞基上而給出相對遷移率和分子量對數(shù)的線性關(guān)系 。 如電荷異?；驑?gòu)象異常的蛋白質(zhì) ， 帶有較大輔基的蛋白質(zhì) （ 某些糖蛋白 ）以及一些結(jié)構(gòu)蛋白 ， 如膠原蛋白等 。 （ 2） 10%SDS（十二烷基磺酸鈉） （ 3） ：稱取 ， 加入 50ml水，用 1mol/L鹽酸調(diào) ， 最后用蒸餾 水定容至 100ml。 （ 10）固定液：取 50%甲醇 454ml，冰乙酸 46ml混勻。 3. 實驗器材 ? 垂直板電泳裝置 ? 直流穩(wěn)壓電源 ? 移液管 ? 濾紙 ? 微量注射器 ? 大培養(yǎng)皿 分離膠 (10%.10 m l ) 濃縮膠 (5%6 m l )H 2 O ml mlA c r 30%, ml 3 0%, mlBu ffe r ol / L p H = T r i s H C l ml ol / L p H = T
高考資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1