【正文】 溫 州 醫(yī) 學(xué) 院 本科畢業(yè)論文 題 目 ： 不同廠家卡馬西平片溶出度 考察 導(dǎo)師姓名 ： 崔 虓 導(dǎo)師單位： 溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院 藥劑科 學(xué)生姓名 ： 曾大利 學(xué)院（部） ： 溫州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 專業(yè)班級(jí) ： 藥學(xué)三班 完成時(shí)間 ： 2021 年 6 月 22 日 2 目 錄 第 1 章 外文文獻(xiàn)翻譯及原稿 ????????????????? ??? （ 2） 外文文獻(xiàn)翻譯 ??????????????????????? （ 2） 外文文獻(xiàn)原稿 ?????????????????? ????? （ 11） 第 2 章 專業(yè)文獻(xiàn)綜述 ??????????????????????? （ 17） 中外文摘要及關(guān)鍵詞 ?????????????????? ? （ 18） 正文 ???????????????????????????? （ 18） 參考文獻(xiàn) ??????????????????????? ?? （ 24） 第 3 章 溫州醫(yī)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）任務(wù)書 ???????????? （ 27） 第 4 章 溫州醫(yī)學(xué)院 本科 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告 ????????? （ 34） 第 5 章 溫州醫(yī)學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）工作進(jìn)度表 ???????? （ 39） 第 6 章 溫州醫(yī)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）工作指導(dǎo)、檢查登記表 （ 41） 第 7 章 溫州醫(yī)學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）評(píng)審表 ?????????? （ 42） 第 8 章 溫州醫(yī)學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） ?????????????? （ 45） 目錄 ????????????????????????????? （ 46） 中外文 摘要及關(guān)鍵詞 ??????????????????? ?? （ 47） 正文 ???????? ???????????????????? （ 47） 致謝 ?????????????????????????? ??? （ 49） 參考文獻(xiàn) ??????????????????????????? （ 49） 第 9 章 溫州醫(yī)學(xué)院優(yōu)秀畢業(yè)論文申請(qǐng)表 ???????????? ?? （ 51） 第 10 章 本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）實(shí)驗(yàn)記錄 ????????????? （ 54） 3 溫州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院畢業(yè)論文 外文文獻(xiàn)翻譯及原稿 一個(gè)簡單的方法監(jiān)測癲癇病人中奧卡西平，卡馬西平，及它們的主要代謝物 拉莫三嗪 的血藥濃度 Loretta Franceschi?, Mario Furlanut 摘 要 ： 一種快速的，有選擇性的，靈敏度高的反向高效液相色譜法同時(shí)測定血漿樣品中奧卡西平，其主要代謝產(chǎn)物（單羥基和雙羥基卡馬西平），拉莫三嗪，卡馬西平和卡馬西平 環(huán)氧丙烷的方法已實(shí)現(xiàn)。 在固相色譜柱（ SPE）上提取得到被分析組分，在 Zorbax SBCN 柱上實(shí)現(xiàn)色譜分離。 在紫外吸收波長為 214nm下，該色譜峰面積比用于定量分析。這高效液相色譜法已成功的用于對(duì)我們研究所中癲癇患者得血藥濃度監(jiān)測的日常評(píng)價(jià)，以及用 于關(guān)于病人由于藥物誘導(dǎo)或抑制 OXC代謝產(chǎn)生治療效果的藥代動(dòng)力學(xué)研究。 關(guān)鍵詞 ：奧卡西平；代謝物； HPLC；監(jiān)測 1. 前言 奧卡西平（ OXC）， 10 酮基卡馬西平（ CBZ）衍生物，是一個(gè)比較新的抗癲癇藥物，其作用機(jī)制與適應(yīng)癥與卡馬西平相似。口服給藥后， OXC 被胃腸道完全吸收，迅速且?guī)缀跬耆?96%98%）得降解為藥理活性代謝物單羥基衍生物（ MHD）。 MHD主要通過與葡萄醛酸結(jié)合而代謝，另外一小部分 MHD被氧化成二羥基衍生物（ DHD） [1]。 DHD是一個(gè)無藥理活性得代謝物，同時(shí)也參與了卡馬西平的代謝途徑。（圖 1.） OXC可以作為單一療法以及與其他 AEDs（抗癲癇藥物）聯(lián)合的多療法，如拉莫三嗪 （ LTG），丙戊酸（ VAL），托吡酯（ TPM）的和非班酯（ FBM）。我們研究所的癲癇患者通常用CBZ或 OXC與 LTG等其他抗癲癇藥物聯(lián)用進(jìn)行治療。 雖然目前沒有數(shù)據(jù)顯示， OXC血藥濃度監(jiān)測對(duì)癲癇患者的藥物治療有用，藥物誘導(dǎo)或抑制的相互作用清楚得表明，對(duì)照 LTG[2,3]可被視為一個(gè)理由，對(duì)可能會(huì)由于 OCX相互作用而進(jìn)行仔細(xì)的監(jiān)測。另一個(gè)原因是實(shí)施一分析程序的同時(shí)測定 LTG,CBZ,CBZ 10,11環(huán)氧化物（ CBZ epox）， OXC和其主要代謝物而不受其他目前 相關(guān)的藥物（如苯妥英，乙琥胺， 非班酯 ， 苯巴比妥和丙戊酸）干擾，可以不需要改變分析程序時(shí)，藥物在不同的樣本中測試會(huì)改變。這樣可以節(jié)省雙方的時(shí)間和金錢。 HPLCUV方法目前用于 OXC治療藥物監(jiān)測（ TDM）的做法也只是分析這種藥物和它的代謝產(chǎn)物 [4,5]；有些是反向選擇 [6,7]，并要求昂貴的手性柱和長度的分析倍。 由于 OXC與 CBZ有一個(gè)化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)很相似， Lensmeyer[8]提出的操作程序是目前 HPLC 4 法發(fā)展的出發(fā)點(diǎn)。不過，我們決定要修改方法，因?yàn)?lensmeyer 的分析程序不允許量化 LTG和 DHD ，因?yàn)檫@兩個(gè)組分是一起洗脫出的。 2. 材料與方法 標(biāo)準(zhǔn) OXC,MHD和 DHD由 Novartis Pharma (Basel, Switzerland)友好提供； LTG由GlaxoSmithKline (Verona, Italy)提供； CBZ, CBZepox, and cyeptamide (CYE)購自 SigmaAldrich (Steinheim, Germany). CYE,CBZ儲(chǔ)存溶液（ 1μ gμ l1） ,在 80℃下儲(chǔ)存， CBZepox and LTG 制成甲醇溶液， MHD和 DHD溶于去離子水中， OXC溶于丙酮中，丙酮醇流動(dòng)相包含 CBZ, CBZepox, OXC, MHD, DHD 和 LTG，內(nèi)標(biāo)物溶液（ 100ngμ g1） , 水 /乙腈 (3/1)制成。 試劑與萃取劑 所有溶劑為 HPLC等級(jí)： 乙腈和醋酸購自 Merck (Darmstadt,Germany)。 甲醇來自 Carlo Erba (Milano,Italy)。 醋酸銨和三乙胺來自 SigmaAldrich (Steinheim, Germany).固相萃 取柱（ SPE） Isolute C8柱（ EC） 含有 200毫克的穩(wěn)定相，并以 3ml容積規(guī)格購自 StepBio(Bologna, Italia).在 MilliQ Plus 的試劑級(jí)別的給水系統(tǒng)中的水是去離子的，過濾且凈化的，來自Millipore (St. Quentin, France). 色譜條件 HPLC系統(tǒng)包括一個(gè) 126溶劑傳遞裝置模型 (Beckman Instruments, Berkerley, CA)，一個(gè)LC 295 UVVIS 模型 (Perkin Elmer, USA),設(shè)在 214nm，與一個(gè) 406接口單元模型 (Beckman Instruments, Berkerley,CA)連接，用于一個(gè) GOLD色譜工作儀 (version 6) (Beckman Instruments). 色譜分離分別采用一個(gè) Zorbax SBCN柱 Hewlett Packard (USA), 250mm .,粒子大小 5m，一個(gè)保護(hù)柱 LichroCART 44 RP8, 5 m (Merck, Darmstadt, Germany)被 連接到保護(hù)分析柱上。柱子和前置柱分別被設(shè)在 50℃的恒溫箱 中（ Jones Chromatographic,USA）。流動(dòng)相由水 /乙腈 /甲醇 /乙酸 /三乙胺（體積比為 725/150/125/1/）混合，超聲脫氣 Branson (USA)。流動(dòng)相 PH用乙酸調(diào)整為 LTG與 DHD峰的完全分離（圖 2）。 流速設(shè)為 12mlmin1。 制備標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品 標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品包括 CBZ,CBZepox,OXC, MHD, DHD, 和 LTG添加已知含量的分析物于空白血漿中。他們包括每批患者的樣本。 樣品制備 我們結(jié)合含 30μ l CYE(.)（ 100ngμ l1）的 500μ l 血清和 500μ l飽和的醋酸銨溶液?；旌虾?，樣品被轉(zhuǎn)移至含 3ml甲醇的萃取柱，然后 3ml水洗。在用 3ml水洗萃取柱后，樣品將 在3ml甲醇中被洗脫出來。然后在 40℃的氮?dú)饬魍ㄏ抡舭l(fā)有機(jī)相，殘留物用 200μ l水 /乙腈 （ 3/1）溶解，然后取 50μ l注入到 HPLC系統(tǒng)中。 3. 結(jié)果 選擇性 用上述的色譜條件我們可靠地將六個(gè)組分與內(nèi)標(biāo)物分離。色譜性能良好，使所有物質(zhì)峰形與合適的保留時(shí)間有效。在一個(gè)干擾研究中，提取空白血漿與抗癲癇藥物或內(nèi)標(biāo)物共同洗脫 5 得到了一個(gè)游離的峰。（圖 .3.）在對(duì) 病人的多藥療法中，非班酯，加巴噴丁， 托吡酯，乙拉西坦和乙琥胺在這過程中不被提取，因?yàn)樗鼈儾粩嗟仉x解。丙戊酸酸和苯妥英分別提取，而不是共同與有趣的組分被洗脫出來。苯巴比妥（ Pb ）和 MHD是共同洗脫出來 的。因此，在有PB和 OXC9（和 MHD）存在時(shí)，樣品用鹽酸（ 1N）和乙醚預(yù)處理。在 SPE程序允許 PB通過并進(jìn)入有機(jī)相并在此后從水相中柱提取其他組分前進(jìn)行樣品酸化。 線性 我們的線性方法檢查是通過三份標(biāo)準(zhǔn)品分析的，在范圍為 gml1 的 CBZ， gml1的 CBZepox， gml1的 OXC， gml1的 MHD， gml1DHD 和 gml1的 LTG是優(yōu)良的。（圖 .4.） 回收率 提取回收率（在五種不同濃度下評(píng)價(jià)以及在相同濃度下對(duì)血漿樣本提取物和未提取標(biāo)準(zhǔn)物的峰面積比較評(píng)價(jià)）很好。 OXC為 %， MHD為 %， DHD為 為 ， CBZepox為 ， LTG為 。 限 量 在信噪比 3： 1下，限量為 OXC（ gml1） ,MHD( gml1),DHD、 LTG、 CBZ和 CBZepox（ gml1）。 日內(nèi)和日間精密度與準(zhǔn)確度 在三個(gè)不同濃度下，范圍為 OXC（ gml1）， MHD和 CBZ（ 120μ gml1）， DHD,CBZepox和 LTG（ 110μ gml1），制備五組質(zhì)量控制樣品。相同的提取樣本跑了三次后計(jì)算日內(nèi)準(zhǔn)確度，在連續(xù)四天分析后計(jì)算日間準(zhǔn)確度。（表 1）對(duì)于所有組分，由變異系數(shù)（ CV）確定的日內(nèi)和日間精密度低于 6%。 4. 討論 這項(xiàng)研究的目的是如何用 HPLCUV法同時(shí)測量聯(lián)合用 CBZ或 OXC與 LTG和其他抗癲癇藥物進(jìn)行治療的癲癇患者的血漿中 CBZ,OXC 和它們的主藥代謝產(chǎn)物及 LTG。該法適用于用這些藥進(jìn)行單一或多療法的病人。我們選擇 SPE樣品前處理，因?yàn)檫@種技術(shù)比起液液萃取能獲得回收率高且更潔凈的樣本。 該法非常靈敏且其重現(xiàn)性非常好， 用 高效液相色譜技術(shù)，再加上紫外檢測 允許同時(shí)測定人血漿中三種抗癲癇藥物（ OXC,CBZ和 LTG）和它們的主藥代謝物（ MHD,DHD和 CBZepox）。 在我國實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過數(shù)月 的例行評(píng)價(jià)這種方法 ，我們結(jié)論是，它對(duì)這些藥物的 TDM有用處。 通過使用這一程序，提取 不 需要超過 30分鐘，色譜分離 只 需時(shí) 17分鐘 ，且色譜系統(tǒng)呈現(xiàn)長期的穩(wěn) 定 性； 在 進(jìn)行 1200 次分 析后 ， 色譜 分 離才 變差 （ 寬峰 和 低分 辨率 ）。 6 圖 、卡馬西平、及其主要代謝產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 7 （圖 .2.）提取物的色譜圖沒有（ A）和有 (B)進(jìn)行 PH調(diào)節(jié) [OXC: 奧卡西平 , CBZ: 卡馬西平 , MHD: 單羥基卡馬西 平衍生物 ,DHD: 雙羥基卡馬西平衍生物 , CBZepox: 卡馬西平 10,11環(huán)氧化物 , LTG: 拉莫三嗪 和 CYE: 內(nèi)標(biāo)物 (cyeptamide)]. 8 (圖 .3.)不含藥物的血漿色譜圖 表 9 （圖 .4.） OXC， CBZ,MHD,DHD, CBZepox ,LTG的標(biāo)準(zhǔn)曲線 參考文 獻(xiàn)： [1] Flesh G. Overview of the clinical pharmacokiics of Drug Invest 2021。24(4):185– 203. [2] Beello P, Furlanut Jr M, Baraldo M, Tonon A, Furlanut M. Therapeutic drug monitoring of lamotrigine in patients suffering from resistant partial seizures. Eur Neurol 2021。48:200– 3. [3] Morris RG, Black AB, Harris AL, Batty AB, Sallustio BC. Lamotrigine and therapeutic drug monitoring: retrospective survey following th