細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(已修改)
2025-08-27 20:38 本頁(yè)面
【正文】 細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí) 覃兆鮮 細(xì)胞培養(yǎng)理論部分內(nèi)容 細(xì)胞培養(yǎng)概念： 細(xì)胞培養(yǎng)是指用機(jī)械法或酶消化法從組織中分離出細(xì)胞，并摹擬體內(nèi)環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度、酸堿度和營(yíng)養(yǎng)條件下，使其生長(zhǎng)增殖，并維持其正常結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù) . 細(xì)胞培養(yǎng)原理： 細(xì)胞培養(yǎng)原理簡(jiǎn)單的來說，就是在體外營(yíng)造一個(gè)同機(jī)體內(nèi)細(xì)胞生存環(huán)境相似的人工環(huán)境，從而可以使細(xì)胞在體外生存、生長(zhǎng)、增殖 體內(nèi)、外細(xì)胞的差異 體內(nèi)細(xì)胞： 機(jī)體神經(jīng)體液調(diào)節(jié) 和其他類型細(xì)胞影響 基因表達(dá)受到外來信號(hào)調(diào)節(jié) 增殖過程中不斷發(fā)生著分化 （由一般到特殊） 高度特化的結(jié)構(gòu)和功能 ?體外細(xì)胞： 失去機(jī)體神經(jīng)體液調(diào)節(jié)和 其他類型細(xì)胞影響 細(xì)胞的許多外來信號(hào)被切斷 特定分化基因表達(dá)減弱或停止 而進(jìn)化中保守的增殖活動(dòng)維持 （由特殊到一般） 與體內(nèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的差異 特征： 失去原有形態(tài)，分化特性減弱 形態(tài)和功能趨于單一 一定代數(shù)后衰老死亡， 或發(fā)生轉(zhuǎn)化， 獲不死性而成為能無限傳代 體外培養(yǎng)細(xì)胞類型 貼壁依賴性細(xì)胞 貼附于玻璃、或塑料等無活性物質(zhì)的表面生長(zhǎng)、生存和維持。 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞 細(xì)胞懸浮于液體培養(yǎng)基中增殖。 細(xì)胞周期 細(xì)胞周期：細(xì)胞前一次分裂結(jié)束開始至本次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的時(shí)相過程 .G0期：細(xì)胞不再沿周期進(jìn)行，進(jìn)入休眠狀態(tài)， G1期， DNA復(fù)制前期，主要進(jìn)行 RNA合成和蛋白質(zhì)合成，為染色體復(fù)制做準(zhǔn)備 ,S期 DNA復(fù)制期，完成 DNA復(fù)制 ,G2期 DNA復(fù)制后期，為紡錘絲的形成做準(zhǔn)備 ,M 期 :有絲分裂期。 群體中多數(shù)細(xì)胞處于間期，少數(shù)處于分裂期。分裂期較短。 ?整個(gè)細(xì)胞周期可劃分為 G1 → S → G2 → M → G1 ，如下圖所示： 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 體外培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到一定密度后，都需傳代。傳代的頻率或間隔與培養(yǎng)液的性質(zhì)、接種細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞增殖速度等有關(guān)。接種細(xì)胞數(shù)量大、細(xì)胞基數(shù)大、相同增殖速度條件下，細(xì)胞數(shù)量增加與飽和速度相對(duì)要快。連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系比初代培養(yǎng)細(xì)胞增殖快，培養(yǎng)液中血清含量多時(shí)細(xì)胞增殖比少時(shí)快。細(xì)胞增殖一代，一般要經(jīng)過以下三個(gè)階段： 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖 :可用 MTT法測(cè)定。用BRDU檢測(cè)有絲分裂的細(xì)胞。 ?BRDU （５－ 溴 ２－ 脫氧尿嘧啶核苷 )與胸腺嘧啶結(jié)構(gòu)相似，在 DNA合成過程中與胸腺嘧啶一樣能摻入細(xì)胞 DNA中，用 BRDU單克隆抗體免疫細(xì)胞化學(xué)法可檢測(cè) BRDU標(biāo)記的結(jié)果，可直接觀察 DNA的合成過程，從而能客觀地評(píng)價(jià)培養(yǎng)細(xì)胞的增殖分化情況，同時(shí)能避免對(duì)細(xì)胞的放射性損害。 細(xì)胞調(diào)亡 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞自身程序結(jié)束 ,生命主動(dòng)死亡的過程，具有特征的形態(tài)和生化改變，是由基因控制的自主有序的 ,有選擇性的自我消亡過程，這種淘汰機(jī)制是保證生命進(jìn)化的基礎(chǔ)。 細(xì)胞凋亡特征 凋亡發(fā)生的過程表現(xiàn)（細(xì)胞縮小 → 致密染色質(zhì)邊集 → 核碎片 → 凋亡小體） 喪失了特殊的表面結(jié)構(gòu)（微絨毛等）和接觸 區(qū)，形成光滑的輪廓，從周圍活細(xì)胞中分離出來 細(xì)胞縮?。孩侔麧{細(xì)胞器集中 ②胞膜出芽或起泡
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