12第六章-細胞培養(yǎng)(已修改)
2025-08-16 07:01 本頁面
【正文】 第六章 細胞培養(yǎng) 一 .單細胞的分離 細胞培養(yǎng) :指將植物單細胞或細胞團直接在培養(yǎng)基中進 行培養(yǎng)的一系列培養(yǎng)方式 . 特點 :操作簡單 ,重復(fù)性好 ,群體大 應(yīng)用：篩選突變體，遺傳轉(zhuǎn)化，生產(chǎn)次生代謝物 (一 ) 由植物器官分離單細胞 (葉片 ) (1)研缽中加入 10g葉片 +40ml研磨介質(zhì) 蔗糖 20 μmol/L MgCl210mμol/L TrisHCl緩沖液 20μmol/L (2)兩層細紗布過濾 (3)中低速離心 ,凈化細胞 例 :石刁柏植物葉片細胞的分離 (1)葉片消毒 ,切 1cm2小塊 (2)10ml培養(yǎng)基 + ?勻漿 (3)無菌過濾器過濾 (4)低速離心 .棄去上清液 ?細胞懸浮于培養(yǎng)中 機械法分離細胞的優(yōu)點 不受酶的傷害作用 無需質(zhì)壁分離 產(chǎn)量低 a. 60～ 80日齡植株上切取幼嫩的完全展開葉 ,表 面消毒 ,無菌水沖洗 機械法分離細胞的缺點 ,解剖刀將葉片切成 4cm 4cm小塊 . 2g碎葉片置于裝有 20ml無菌酶溶液組成的三角瓶中 酶溶液組成 %離析酶 %甘露醇 1%硫酸葡聚糖鉀 ,使酶滲透入葉片組織 ,120r/min,25 0C, 30min更換酶溶液 1次 . 第一個 30min的酶溶液棄掉 第 2個 30min后的酶溶液含有海綿薄壁細胞 第 3個和第 4個 30min后的酶溶液含柵欄組織 2次后即可培養(yǎng) . (二 ).由愈傷組織分離單細胞 方法 :、易散碎的愈傷組織轉(zhuǎn)移到裝有適當(dāng)液 體培養(yǎng)基的三角瓶中 ,將三角瓶置于搖床上以 80～ 100
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