【正文】 動物繁殖學實驗指導作者：日期：動物繁殖學實驗實習指導萊陽農學院動物科技學院2004年1月動物繁殖學實驗實習指導實驗一 動物生殖器官的觀察實驗二 動物睪丸、卵巢及附性器官的組織學觀察實驗三 PMSG或FSH的生物測定法實驗四 精液品質常規(guī)檢查及理化因素的影響實驗五 精子數量計算和畸形率的測定實驗六 精子頂體完整率的測定實驗七 人工授精器械的認識及假陰道的準備實驗八 動物精液的冷凍操作實驗九 動物的發(fā)情鑒定實驗十 母牛的直腸檢查實驗十一 動物的采精與輸精實驗十二 動物的胚胎觀察與鑒定實驗十三 牛、羊的胚胎移植實驗十四 卵母細胞體外培養(yǎng)與體外受精實驗一 動物生殖器官的觀察一、實驗目的認識各種動物生殖器官的形態(tài)、大小，及其特點，為生殖器官的直腸檢查、陰道檢查、妊娠診斷及人工授精等操作奠定基礎。二、實驗材料各種雄性動物生殖器官標本、模型及掛圖各種雌性動物活體及生殖器官標本、模型及掛圖。解剖刀、剪刀、鑷子、卷尺、搪瓷盤。腹腔鏡：主件（觀察鏡、變壓器、光源、光纜），附件（套管針、探針、照相設備、監(jiān)視系統(tǒng)、手術器械、送氣設備、抽吸裝置）。三、實驗內容（一）雄性動物生殖器官觀察各種動物睪丸和附睪的形狀、相對位置和大體構造。睪丸均為長卵圓形，牛、羊、豬的睪丸相對較大，尤其是羊的最大。馬睪丸的縱軸方向與地面平行；附睪位于睪丸的背外緣，頭端在前、尾端在后。牛、羊睪丸的方向與地面垂直；其附睪位于后緣，頭端在上，尾端在下。豬睪丸的方向呈前低后高傾斜，位于股部之后；附睪位于睪丸的前上緣，頭端在下，尾端在上。副性腺：比較各種動物副性腺的大小、形狀、位置及內部構造。①精囊腺：成對位于膀胱頸背面的兩旁，輸卵管的末端兩側。馬的精囊腺為長圓形囊狀，牛、羊和豬的精囊腺都是由緊密的腺體組織所構成，豬的特別發(fā)達。②前列腺：位于膀胱頸尿道開始處精囊腺之后。馬的前列腺，由兩個側葉和一個峽所構成，形似蝴蝶。牛和豬的前列腺分為體部和彌散部兩部分，羊的前列腺最不發(fā)達，只有彌散部。③尿道球腺：位于骨盆出口附近的尿道兩旁，各有一個排出管開口于尿道內。豬的尿道球腺最為發(fā)達，呈圓柱狀，上面覆蓋的尿道肌很薄。其它家畜的呈球狀，上面覆蓋的尿道肌較厚。在尿生殖道骨盆部的腹面中線上作縱切口，觀察尿道上壁的精阜，上有射精孔。前列腺的開口在兩側，尿道球腺的開口在其后方。陰莖和龜頭：陰莖由白膜內的兩個陰莖海綿體和其腹面的尿道海綿體組成，為陰莖的勃起組織。馬的陰莖長而粗大，龜頭窩內有尿道突，牛的陰莖在陰囊之后形成一“S”狀彎曲。羊的陰莖比牛的細小，尿道突細而長，綿羊的較長，山羊的較短。豬的陰莖“S”狀彎曲在陰囊之前，龜頭呈螺旋狀。（二）雌性動物生殖器官雌性動物可以觀察生殖器官的標本、模型及掛圖，也可以采用腹腔鏡法進行活體觀察。生殖器官的組成及位置雌性動物的生物器官包括：卵巢、輸卵管、子宮、陰道、尿生殖前庭、陰唇和陰蒂。前四部分稱為內生殖器官，后三部分稱為外生殖器官，也稱外陰部。雌性動物的整個生殖器官都位于骨盆腔和骨盆腔前方的腹腔內，上面為直腸和小結腸，下面是膀胱。卵巢①觀察未孕動物性周期各時期卵巢的外形并測量其體積。②作卵巢的水平切面，觀察其內部構造。馬的卵巢：為豆形，體積如鴿蛋大，成熟后卵巢的一邊（自由邊）內陷形成排卵窩，朝向內側的輸卵管傘。發(fā)情周期的不同時期馬卵巢的直徑大小不等。牛的卵巢：為橢圓形，沒有排卵窩，如青棗大，排卵以后多不形成紅體，黃體往往凸出于卵巢表面。其位置在兩側子宮角尖端的外側下方。羊的卵巢：比牛的圓，體積也小，其他特點同牛。豬的卵巢：有很發(fā)達的卵巢囊，卵巢和輸卵管傘有時被包在卵巢囊內，其形狀隨機體成熟的程度而有不同。幼小母豬卵巢的形狀極似腎臟，接近性成熟時為桑椹形，達到性成熟時似串狀葡萄。輸卵管觀察輸卵管的形狀及其與卵巢、子宮角的關系。馬的輸卵管有很多彎曲，傘較發(fā)達。牛、羊的輸卵管彎曲較少，傘不發(fā)達。豬的輸卵管有許多小彎曲，輸卵管傘最發(fā)達。其傘的開口接近卵巢囊的底部。各種動物輸卵管的子宮端均與子宮角尖端相連，馬及豬的輸卵管與子宮角之間具有明顯界限，牛、羊的則不明顯。子宮①觀察子宮角和子宮體的形狀、粗細、長度及粘膜上的特點（沿子宮大彎切開）；②觀察子宮頸的粗細、長度及其構造特點；③沿陰道上面縱切，觀察陰道和子宮頸及前庭的關系。馬：其整個子宮呈“丫”形，子宮角為扁帶狀。小彎在上，大彎在下，子宮頸外口突入陰道，子宮頸的肌肉層比較薄，管道比較粗。牛、羊：其子宮角的形狀如同彎曲的綿羊角，大彎向上，小彎向下，子宮粘膜上有子宮阜，且羊子宮阜的中央有一個小的凹陷。牛、羊子宮頸的肌肉層發(fā)達，堅硬，管道細且有大而厚的皺襞，子宮頸外口突出于陰道，但較馬的短，似菜花樣。豬：其子宮角長而有許多彎曲，子宮頸與子宮體、陰道都沒有明顯的界限，子宮頸管的粘膜上有兩排交錯的突起。陰道是由陰道穹窿至處女膜（陰道外口）的管道部分。外生殖器官：包括尿生殖前庭、陰唇及陰蒂。①尿生殖前庭：由處女膜至陰門的部分。②陰唇及陰蒂是雌性動物生殖道的最后一部分。實驗二 動物睪丸、卵巢及其他性器官的組織學觀察一、目的要求：通過對雄性動物睪丸和雌性動物卵巢、子宮、輸卵管組織切片的觀察，了解睪丸、卵巢、子宮、輸卵管的組織結構及其形態(tài)。了解精子的發(fā)生過程，卵子的發(fā)生、卵泡的發(fā)育過程及其形態(tài)。二、實驗材料：顯微鏡。動物睪丸、卵巢、子宮、輸卵管的標本及組織切片。動物睪丸、卵巢、子宮、輸卵管的組織圖片（幻燈片）。三、實驗內容：（一）雄性動物睪丸的組織學觀察：低倍鏡觀察：（1）被膜：由漿膜和白膜構成。外層膜為一層較薄的固有鞘膜，內層白膜為較厚的致密結締組織構成。（2）縱隔和中隔：縱隔為由睪丸的一端伸向睪丸實質的結締組織索，并向四周發(fā)出許多放射狀的結締組織小梁直達白膜，形成中隔。（3）小葉：由中隔將睪丸實質分成許多基部向外，頂端向內的錐形小葉，每個小葉由23條盤曲的精細管組成。精細管之間有疏松的結締組織，內含有血管和間質細胞。（4）附睪：由精細管匯合成的直精細管，穿入睪丸縱隔的結締組織，形成彎曲的睪丸網，睪丸網又分出1020條睪丸輸出管形成附睪，附睪頭也由結締組織分成若干附睪小葉，各附睪小葉的管子匯成附睪管，經附睪體，附睪尾最后過渡為輸精管。高倍鏡觀察：從睪丸小葉中仔細觀察精細管及間質細胞的結構和形態(tài)。精細管的管壁的外向由結締組織、基膜和復層的生殖上皮構成。生殖上皮又由生精細胞和支持細胞組成。仔細觀察精子發(fā)生周期中主要階段和支持細胞形態(tài)：（1）支持細胞：又稱足細胞和塞托利氏細胞。為高柱狀或錐狀細胞。從基膜一直伸達精細管的管腔，該細胞高低不等，界限不清，細胞核較大位于細胞基部，著色淺，核仁明顯。支持細胞的游離端常嵌含有許多精子，其側面嵌含各個發(fā)育階段的生精細胞，并對生精細胞起支持、營養(yǎng)、保護、促使其發(fā)育的作用。（2）精原細胞：是精子形成過程的干細胞，位于基膜，細胞為多邊形或圓形，核大而圓，染色較深。仔細觀察A、B、中間型三類。（3）初級精母細胞：由精原細胞分裂而成，位于精原細胞內側，排列成幾層，細胞呈圓形，體積較大，著色深，經第一次成熟分裂形成二個次級精母細胞。（4）次級精母細胞：由初級精母細胞分裂而成，位于初級精母細胞內側，細胞體積較小，呈圓形，細胞核為球形，染色質呈細粒狀，不見核仁，由于其存在時間很短，很快經過第二次成熟分裂成為二個精子細胞，因而在切片上很難找到。（5）精子細胞：由次級精母細胞分裂而成，位于精母細胞內側，靠近細管的管腔，排成數層，細胞呈圓形，體積更小，核小呈球狀，染色深，核仁清晰。精子細胞不再分裂，在支持細胞頂部經過變態(tài)過程成為精子。（6）精子：由精子細胞變態(tài)形成，位于精細管的管腔內，剛形成的精子頭部常深入支持細胞游離端，尾部朝管腔，隨著精子發(fā)育成熟，便脫離支持細胞，游離在管腔內，精子分頭、頸、尾三部分，形似蝌蚪，頭部多呈扁卵圓形，染色深。（7）附睪管：管壁由環(huán)形平滑肌纖維和假復層柱狀纖毛細胞和基底細胞組成，柱狀細胞有分泌作用，基底細胞緊貼基膜，外形為圓形或卵圓形，染色較淺，核呈球形，精子在附睪管內借助分泌液，纖毛運動和管壁蠕動來運行。（二）雌性動物卵巢的組織學觀察：卵巢的組織由被膜、皮質和髓質組成。低倍鏡觀察：（1）被膜：卵巢表面由特殊的生殖上皮被覆，生殖上皮多為單層立方形細胞組成。生殖上皮下面有一層致密結締組織形成的白膜。（2）皮質：位于卵巢的外周，占大部分，與髓質無明顯界限，由許多不同發(fā)育期的卵泡和少量黃體等組成。（3）髓質：位于卵巢的中央（馬屬動物例外），由富有彈性纖維的疏松結締組織構成。內有大量的血管、淋巴管和少量平滑肌纖維。高倍鏡觀察：主要觀察卵巢皮質部不同發(fā)育階段的卵泡，每個卵泡都由位于中央的卵母細胞和圍繞在卵母細胞周圍的卵泡細胞組成。（1）原始卵泡：位于生殖上皮層內，中間為一卵原細胞，周圍由一層扁平卵泡細胞所圍繞。（2）初級卵泡：卵泡呈球形，卵原細胞位于卵泡中央，周圍包有一層立方或柱狀的卵泡細胞。卵原細胞的體積較大，中央有個圓形的泡狀核，核內染色質較少，著色較淺，核仁明顯。（3）次級卵泡：其主要變化是卵原細胞體積增大，卵母細胞和顆粒細胞共同分泌出粘多糖，聚集在顆粒細胞與卵黃膜之間形成透明帶。（4）三級卵泡：出現(xiàn)小的卵泡腔，隨著卵泡的生長，許多小腔合并為一個大的卵泡腔；卵母細胞被擠向一邊，并包裹在一團顆粒細胞中，形成半島突出在卵泡腔內，稱卵丘；在顆粒層外周形成兩層卵泡膜；卵的透明帶周圍的柱狀上皮細胞呈放射狀排列，稱為放射冠，放射冠細胞有微絨毛，并伸入透明帶內。（5）成熟卵泡：三級卵泡繼續(xù)生長，卵泡液增多，卵泡腔增大，卵泡擴展到整個皮質部而突出卵巢表面。（6）黃體：是排卵后的卵泡轉變成的富于血管的內分泌器官，牛、羊、豬的黃體位于卵巢皮質，突出于卵巢表面，馬的黃體則完全埋藏在卵巢基質內。黃體由顆粒黃體細胞和泡膜黃體細胞組成，顆粒黃體細胞占多數，大部分位于黃體中間，細胞呈多面體，著色淺，排列緊密，含有球形細胞核；泡膜黃體細胞則小，大部分位于黃體外周，包在顆粒黃體細胞外周或位于其之間，核占胞體的大部分，核與胞質染色較深。（7）閉鎖卵泡：卵巢內在各個發(fā)育階段逐漸退化的卵泡叫閉鎖卵泡，即退化的卵母細胞存在于未破裂的卵泡中，可觀察到萎縮的卵母細胞和膨脹塌陷的透明帶。（三）雌性動物子宮、輸卵管的組織學觀察：1．子宮子宮的組織構造從外向里為漿膜、肌層和粘膜。肌肉層的外層薄，為縱行的肌纖維；內層厚，為螺旋形的環(huán)狀肌纖維。子宮頸肌可看作子宮肌的附著點，同時也是子宮的括約肌，其內層特別厚，且有致密的膠原纖維和彈性纖維，是子宮頸皺襞的主要構成部分，內外兩層交界處有交錯的肌束和血管網，固有層含有子宮腺，子宮腺以子宮角最發(fā)達，子宮體較少，子宮頸則在皺襞之間的深處有腺狀結構，其余部分為柱狀細胞，能分泌粘液。2．輸卵管輸卵管的管壁組織結構從外向內由漿膜、肌層和粘膜組成，肌層可分為內層環(huán)狀或螺旋狀肌束和外層縱行肌束，其中混有斜行纖維，使整個管壁能協(xié)調的收縮。肌層從卵巢端到子宮端逐漸增厚，輸卵管粘膜形成若干初級縱襞，在壺腹部又分出許多次級縱襞。輸卵管上皮細胞有柱狀纖毛細胞和無纖毛細胞，柱狀纖毛細胞在輸卵管的卵巢端，特別在傘，越向子宮端越少，這種細胞伸入管腔。實驗三 PMSG或FSH的生物測定法一、實驗目的測定PMSG（或FSH）的活性，掌握該激素的簡易效價測定方法。二、實驗原理FSH為垂體促性腺激素，作用于即將達到性成熟年齡的雌性小白鼠，可促進卵巢上的卵泡發(fā)育，分泌雌激素。在雌激素的作用下，又可促進子宮、卵巢及整個生殖器官的發(fā)育、增大。PMSG因為也含有