【正文】 動(dòng)物繁殖學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)作者：日期：動(dòng)物繁殖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)萊陽農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院2004年1月動(dòng)物繁殖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)一 動(dòng)物生殖器官的觀察實(shí)驗(yàn)二 動(dòng)物睪丸、卵巢及附性器官的組織學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)三 PMSG或FSH的生物測(cè)定法實(shí)驗(yàn)四 精液品質(zhì)常規(guī)檢查及理化因素的影響實(shí)驗(yàn)五 精子數(shù)量計(jì)算和畸形率的測(cè)定實(shí)驗(yàn)六 精子頂體完整率的測(cè)定實(shí)驗(yàn)七 人工授精器械的認(rèn)識(shí)及假陰道的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)八 動(dòng)物精液的冷凍操作實(shí)驗(yàn)九 動(dòng)物的發(fā)情鑒定實(shí)驗(yàn)十 母牛的直腸檢查實(shí)驗(yàn)十一 動(dòng)物的采精與輸精實(shí)驗(yàn)十二 動(dòng)物的胚胎觀察與鑒定實(shí)驗(yàn)十三 牛、羊的胚胎移植實(shí)驗(yàn)十四 卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)與體外受精實(shí)驗(yàn)一 動(dòng)物生殖器官的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼J(rèn)識(shí)各種動(dòng)物生殖器官的形態(tài)、大小，及其特點(diǎn)，為生殖器官的直腸檢查、陰道檢查、妊娠診斷及人工授精等操作奠定基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)材料各種雄性動(dòng)物生殖器官標(biāo)本、模型及掛圖各種雌性動(dòng)物活體及生殖器官標(biāo)本、模型及掛圖。解剖刀、剪刀、鑷子、卷尺、搪瓷盤。腹腔鏡：主件（觀察鏡、變壓器、光源、光纜），附件（套管針、探針、照相設(shè)備、監(jiān)視系統(tǒng)、手術(shù)器械、送氣設(shè)備、抽吸裝置）。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）雄性動(dòng)物生殖器官觀察各種動(dòng)物睪丸和附睪的形狀、相對(duì)位置和大體構(gòu)造。睪丸均為長(zhǎng)卵圓形，牛、羊、豬的睪丸相對(duì)較大，尤其是羊的最大。馬睪丸的縱軸方向與地面平行；附睪位于睪丸的背外緣，頭端在前、尾端在后。牛、羊睪丸的方向與地面垂直；其附睪位于后緣，頭端在上，尾端在下。豬睪丸的方向呈前低后高傾斜，位于股部之后；附睪位于睪丸的前上緣，頭端在下，尾端在上。副性腺：比較各種動(dòng)物副性腺的大小、形狀、位置及內(nèi)部構(gòu)造。①精囊腺：成對(duì)位于膀胱頸背面的兩旁，輸卵管的末端兩側(cè)。馬的精囊腺為長(zhǎng)圓形囊狀，牛、羊和豬的精囊腺都是由緊密的腺體組織所構(gòu)成，豬的特別發(fā)達(dá)。②前列腺：位于膀胱頸尿道開始處精囊腺之后。馬的前列腺，由兩個(gè)側(cè)葉和一個(gè)峽所構(gòu)成，形似蝴蝶。牛和豬的前列腺分為體部和彌散部?jī)刹糠?，羊的前列腺最不發(fā)達(dá)，只有彌散部。③尿道球腺：位于骨盆出口附近的尿道兩旁，各有一個(gè)排出管開口于尿道內(nèi)。豬的尿道球腺最為發(fā)達(dá)，呈圓柱狀，上面覆蓋的尿道肌很薄。其它家畜的呈球狀，上面覆蓋的尿道肌較厚。在尿生殖道骨盆部的腹面中線上作縱切口，觀察尿道上壁的精阜，上有射精孔。前列腺的開口在兩側(cè)，尿道球腺的開口在其后方。陰莖和龜頭：陰莖由白膜內(nèi)的兩個(gè)陰莖海綿體和其腹面的尿道海綿體組成，為陰莖的勃起組織。馬的陰莖長(zhǎng)而粗大，龜頭窩內(nèi)有尿道突，牛的陰莖在陰囊之后形成一“S”狀彎曲。羊的陰莖比牛的細(xì)小，尿道突細(xì)而長(zhǎng)，綿羊的較長(zhǎng)，山羊的較短。豬的陰莖“S”狀彎曲在陰囊之前，龜頭呈螺旋狀。（二）雌性動(dòng)物生殖器官雌性動(dòng)物可以觀察生殖器官的標(biāo)本、模型及掛圖，也可以采用腹腔鏡法進(jìn)行活體觀察。生殖器官的組成及位置雌性動(dòng)物的生物器官包括：卵巢、輸卵管、子宮、陰道、尿生殖前庭、陰唇和陰蒂。前四部分稱為內(nèi)生殖器官，后三部分稱為外生殖器官，也稱外陰部。雌性動(dòng)物的整個(gè)生殖器官都位于骨盆腔和骨盆腔前方的腹腔內(nèi)，上面為直腸和小結(jié)腸，下面是膀胱。卵巢①觀察未孕動(dòng)物性周期各時(shí)期卵巢的外形并測(cè)量其體積。②作卵巢的水平切面，觀察其內(nèi)部構(gòu)造。馬的卵巢：為豆形，體積如鴿蛋大，成熟后卵巢的一邊（自由邊）內(nèi)陷形成排卵窩，朝向內(nèi)側(cè)的輸卵管傘。發(fā)情周期的不同時(shí)期馬卵巢的直徑大小不等。牛的卵巢：為橢圓形，沒有排卵窩，如青棗大，排卵以后多不形成紅體，黃體往往凸出于卵巢表面。其位置在兩側(cè)子宮角尖端的外側(cè)下方。羊的卵巢：比牛的圓，體積也小，其他特點(diǎn)同牛。豬的卵巢：有很發(fā)達(dá)的卵巢囊，卵巢和輸卵管傘有時(shí)被包在卵巢囊內(nèi)，其形狀隨機(jī)體成熟的程度而有不同。幼小母豬卵巢的形狀極似腎臟，接近性成熟時(shí)為桑椹形，達(dá)到性成熟時(shí)似串狀葡萄。輸卵管觀察輸卵管的形狀及其與卵巢、子宮角的關(guān)系。馬的輸卵管有很多彎曲，傘較發(fā)達(dá)。牛、羊的輸卵管彎曲較少，傘不發(fā)達(dá)。豬的輸卵管有許多小彎曲，輸卵管傘最發(fā)達(dá)。其傘的開口接近卵巢囊的底部。各種動(dòng)物輸卵管的子宮端均與子宮角尖端相連，馬及豬的輸卵管與子宮角之間具有明顯界限，牛、羊的則不明顯。子宮①觀察子宮角和子宮體的形狀、粗細(xì)、長(zhǎng)度及粘膜上的特點(diǎn)（沿子宮大彎切開）；②觀察子宮頸的粗細(xì)、長(zhǎng)度及其構(gòu)造特點(diǎn)；③沿陰道上面縱切，觀察陰道和子宮頸及前庭的關(guān)系。馬：其整個(gè)子宮呈“丫”形，子宮角為扁帶狀。小彎在上，大彎在下，子宮頸外口突入陰道，子宮頸的肌肉層比較薄，管道比較粗。牛、羊：其子宮角的形狀如同彎曲的綿羊角，大彎向上，小彎向下，子宮粘膜上有子宮阜，且羊子宮阜的中央有一個(gè)小的凹陷。牛、羊子宮頸的肌肉層發(fā)達(dá)，堅(jiān)硬，管道細(xì)且有大而厚的皺襞，子宮頸外口突出于陰道，但較馬的短，似菜花樣。豬：其子宮角長(zhǎng)而有許多彎曲，子宮頸與子宮體、陰道都沒有明顯的界限，子宮頸管的粘膜上有兩排交錯(cuò)的突起。陰道是由陰道穹窿至處女膜（陰道外口）的管道部分。外生殖器官：包括尿生殖前庭、陰唇及陰蒂。①尿生殖前庭：由處女膜至陰門的部分。②陰唇及陰蒂是雌性動(dòng)物生殖道的最后一部分。實(shí)驗(yàn)二 動(dòng)物睪丸、卵巢及其他性器官的組織學(xué)觀察一、目的要求：通過對(duì)雄性動(dòng)物睪丸和雌性動(dòng)物卵巢、子宮、輸卵管組織切片的觀察，了解睪丸、卵巢、子宮、輸卵管的組織結(jié)構(gòu)及其形態(tài)。了解精子的發(fā)生過程，卵子的發(fā)生、卵泡的發(fā)育過程及其形態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)材料：顯微鏡。動(dòng)物睪丸、卵巢、子宮、輸卵管的標(biāo)本及組織切片。動(dòng)物睪丸、卵巢、子宮、輸卵管的組織圖片（幻燈片）。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：（一）雄性動(dòng)物睪丸的組織學(xué)觀察：低倍鏡觀察：（1）被膜：由漿膜和白膜構(gòu)成。外層膜為一層較薄的固有鞘膜，內(nèi)層白膜為較厚的致密結(jié)締組織構(gòu)成。（2）縱隔和中隔：縱隔為由睪丸的一端伸向睪丸實(shí)質(zhì)的結(jié)締組織索，并向四周發(fā)出許多放射狀的結(jié)締組織小梁直達(dá)白膜，形成中隔。（3）小葉：由中隔將睪丸實(shí)質(zhì)分成許多基部向外，頂端向內(nèi)的錐形小葉，每個(gè)小葉由23條盤曲的精細(xì)管組成。精細(xì)管之間有疏松的結(jié)締組織，內(nèi)含有血管和間質(zhì)細(xì)胞。（4）附睪：由精細(xì)管匯合成的直精細(xì)管，穿入睪丸縱隔的結(jié)締組織，形成彎曲的睪丸網(wǎng)，睪丸網(wǎng)又分出1020條睪丸輸出管形成附睪，附睪頭也由結(jié)締組織分成若干附睪小葉，各附睪小葉的管子匯成附睪管，經(jīng)附睪體，附睪尾最后過渡為輸精管。高倍鏡觀察：從睪丸小葉中仔細(xì)觀察精細(xì)管及間質(zhì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和形態(tài)。精細(xì)管的管壁的外向由結(jié)締組織、基膜和復(fù)層的生殖上皮構(gòu)成。生殖上皮又由生精細(xì)胞和支持細(xì)胞組成。仔細(xì)觀察精子發(fā)生周期中主要階段和支持細(xì)胞形態(tài)：（1）支持細(xì)胞：又稱足細(xì)胞和塞托利氏細(xì)胞。為高柱狀或錐狀細(xì)胞。從基膜一直伸達(dá)精細(xì)管的管腔，該細(xì)胞高低不等，界限不清，細(xì)胞核較大位于細(xì)胞基部，著色淺，核仁明顯。支持細(xì)胞的游離端常嵌含有許多精子，其側(cè)面嵌含各個(gè)發(fā)育階段的生精細(xì)胞，并對(duì)生精細(xì)胞起支持、營(yíng)養(yǎng)、保護(hù)、促使其發(fā)育的作用。（2）精原細(xì)胞：是精子形成過程的干細(xì)胞，位于基膜，細(xì)胞為多邊形或圓形，核大而圓，染色較深。仔細(xì)觀察A、B、中間型三類。（3）初級(jí)精母細(xì)胞：由精原細(xì)胞分裂而成，位于精原細(xì)胞內(nèi)側(cè)，排列成幾層，細(xì)胞呈圓形，體積較大，著色深，經(jīng)第一次成熟分裂形成二個(gè)次級(jí)精母細(xì)胞。（4）次級(jí)精母細(xì)胞：由初級(jí)精母細(xì)胞分裂而成，位于初級(jí)精母細(xì)胞內(nèi)側(cè)，細(xì)胞體積較小，呈圓形，細(xì)胞核為球形，染色質(zhì)呈細(xì)粒狀，不見核仁，由于其存在時(shí)間很短，很快經(jīng)過第二次成熟分裂成為二個(gè)精子細(xì)胞，因而在切片上很難找到。（5）精子細(xì)胞：由次級(jí)精母細(xì)胞分裂而成，位于精母細(xì)胞內(nèi)側(cè)，靠近細(xì)管的管腔，排成數(shù)層，細(xì)胞呈圓形，體積更小，核小呈球狀，染色深，核仁清晰。精子細(xì)胞不再分裂，在支持細(xì)胞頂部經(jīng)過變態(tài)過程成為精子。（6）精子：由精子細(xì)胞變態(tài)形成，位于精細(xì)管的管腔內(nèi)，剛形成的精子頭部常深入支持細(xì)胞游離端，尾部朝管腔，隨著精子發(fā)育成熟，便脫離支持細(xì)胞，游離在管腔內(nèi)，精子分頭、頸、尾三部分，形似蝌蚪，頭部多呈扁卵圓形，染色深。（7）附睪管：管壁由環(huán)形平滑肌纖維和假復(fù)層柱狀纖毛細(xì)胞和基底細(xì)胞組成，柱狀細(xì)胞有分泌作用，基底細(xì)胞緊貼基膜，外形為圓形或卵圓形，染色較淺，核呈球形，精子在附睪管內(nèi)借助分泌液，纖毛運(yùn)動(dòng)和管壁蠕動(dòng)來運(yùn)行。（二）雌性動(dòng)物卵巢的組織學(xué)觀察：卵巢的組織由被膜、皮質(zhì)和髓質(zhì)組成。低倍鏡觀察：（1）被膜：卵巢表面由特殊的生殖上皮被覆，生殖上皮多為單層立方形細(xì)胞組成。生殖上皮下面有一層致密結(jié)締組織形成的白膜。（2）皮質(zhì)：位于卵巢的外周，占大部分，與髓質(zhì)無明顯界限，由許多不同發(fā)育期的卵泡和少量黃體等組成。（3）髓質(zhì)：位于卵巢的中央（馬屬動(dòng)物例外），由富有彈性纖維的疏松結(jié)締組織構(gòu)成。內(nèi)有大量的血管、淋巴管和少量平滑肌纖維。高倍鏡觀察：主要觀察卵巢皮質(zhì)部不同發(fā)育階段的卵泡，每個(gè)卵泡都由位于中央的卵母細(xì)胞和圍繞在卵母細(xì)胞周圍的卵泡細(xì)胞組成。（1）原始卵泡：位于生殖上皮層內(nèi)，中間為一卵原細(xì)胞，周圍由一層扁平卵泡細(xì)胞所圍繞。（2）初級(jí)卵泡：卵泡呈球形，卵原細(xì)胞位于卵泡中央，周圍包有一層立方或柱狀的卵泡細(xì)胞。卵原細(xì)胞的體積較大，中央有個(gè)圓形的泡狀核，核內(nèi)染色質(zhì)較少，著色較淺，核仁明顯。（3）次級(jí)卵泡：其主要變化是卵原細(xì)胞體積增大，卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞共同分泌出粘多糖，聚集在顆粒細(xì)胞與卵黃膜之間形成透明帶。（4）三級(jí)卵泡：出現(xiàn)小的卵泡腔，隨著卵泡的生長(zhǎng)，許多小腔合并為一個(gè)大的卵泡腔；卵母細(xì)胞被擠向一邊，并包裹在一團(tuán)顆粒細(xì)胞中，形成半島突出在卵泡腔內(nèi)，稱卵丘；在顆粒層外周形成兩層卵泡膜；卵的透明帶周圍的柱狀上皮細(xì)胞呈放射狀排列，稱為放射冠，放射冠細(xì)胞有微絨毛，并伸入透明帶內(nèi)。（5）成熟卵泡：三級(jí)卵泡繼續(xù)生長(zhǎng)，卵泡液增多，卵泡腔增大，卵泡擴(kuò)展到整個(gè)皮質(zhì)部而突出卵巢表面。（6）黃體：是排卵后的卵泡轉(zhuǎn)變成的富于血管的內(nèi)分泌器官，牛、羊、豬的黃體位于卵巢皮質(zhì)，突出于卵巢表面，馬的黃體則完全埋藏在卵巢基質(zhì)內(nèi)。黃體由顆粒黃體細(xì)胞和泡膜黃體細(xì)胞組成，顆粒黃體細(xì)胞占多數(shù)，大部分位于黃體中間，細(xì)胞呈多面體，著色淺，排列緊密，含有球形細(xì)胞核；泡膜黃體細(xì)胞則小，大部分位于黃體外周，包在顆粒黃體細(xì)胞外周或位于其之間，核占胞體的大部分，核與胞質(zhì)染色較深。（7）閉鎖卵泡：卵巢內(nèi)在各個(gè)發(fā)育階段逐漸退化的卵泡叫閉鎖卵泡，即退化的卵母細(xì)胞存在于未破裂的卵泡中，可觀察到萎縮的卵母細(xì)胞和膨脹塌陷的透明帶。（三）雌性動(dòng)物子宮、輸卵管的組織學(xué)觀察：1．子宮子宮的組織構(gòu)造從外向里為漿膜、肌層和粘膜。肌肉層的外層薄，為縱行的肌纖維；內(nèi)層厚，為螺旋形的環(huán)狀肌纖維。子宮頸肌可看作子宮肌的附著點(diǎn)，同時(shí)也是子宮的括約肌，其內(nèi)層特別厚，且有致密的膠原纖維和彈性纖維，是子宮頸皺襞的主要構(gòu)成部分，內(nèi)外兩層交界處有交錯(cuò)的肌束和血管網(wǎng)，固有層含有子宮腺，子宮腺以子宮角最發(fā)達(dá)，子宮體較少，子宮頸則在皺襞之間的深處有腺狀結(jié)構(gòu)，其余部分為柱狀細(xì)胞，能分泌粘液。2．輸卵管輸卵管的管壁組織結(jié)構(gòu)從外向內(nèi)由漿膜、肌層和粘膜組成，肌層可分為內(nèi)層環(huán)狀或螺旋狀肌束和外層縱行肌束，其中混有斜行纖維，使整個(gè)管壁能協(xié)調(diào)的收縮。肌層從卵巢端到子宮端逐漸增厚，輸卵管粘膜形成若干初級(jí)縱襞，在壺腹部又分出許多次級(jí)縱襞。輸卵管上皮細(xì)胞有柱狀纖毛細(xì)胞和無纖毛細(xì)胞，柱狀纖毛細(xì)胞在輸卵管的卵巢端，特別在傘，越向子宮端越少，這種細(xì)胞伸入管腔。實(shí)驗(yàn)三 PMSG或FSH的生物測(cè)定法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏y(cè)定PMSG（或FSH）的活性，掌握該激素的簡(jiǎn)易效價(jià)測(cè)定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理FSH為垂體促性腺激素，作用于即將達(dá)到性成熟年齡的雌性小白鼠，可促進(jìn)卵巢上的卵泡發(fā)育，分泌雌激素。在雌激素的作用下，又可促進(jìn)子宮、卵巢及整個(gè)生殖器官的發(fā)育、增大。PMSG因?yàn)橐埠?