【正文】 動物性農(nóng)產(chǎn)品加工實 驗 指 導(dǎo)（自編教材）聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院實驗管理中心編印 目 錄實驗一 雙水相萃取法富集分離螺旋藻藻藍蛋白的研究 1實驗二 超濾法生產(chǎn)大豆?jié)饪s蛋白 4實驗三 豬胰脂肪酶的分離純化及其性質(zhì)研究 5實驗四 超高壓技術(shù)應(yīng)用于食品新產(chǎn)品開發(fā) 8實驗五 肉的品質(zhì)評定及其超高壓處理技術(shù) 10實驗六 各種肉制品的加工生產(chǎn) 13實驗七 甜酒釀的制作 17實驗八 果味酸乳的制作 19實驗九 平板菌落計數(shù) 21實驗十 原料乳的驗收 23實驗十一 各種乳制品的加工 27實驗十二 各種農(nóng)產(chǎn)品機械與設(shè)備的工作原理 35實驗十三 鮮切果蔬抑菌涂膜保鮮實驗 37實驗十四 食品包裝市場調(diào)查 38實驗一 雙水相萃取法富集分離螺旋藻藻藍蛋白的研究一、實驗?zāi)康淖寣W(xué)生掌握雙水相體系的構(gòu)建和天然產(chǎn)物的提取方法。二、實驗要求(1)上課前應(yīng)閱讀本任務(wù)書中相應(yīng)的部分，明確實驗的內(nèi)容和要求。(2)根據(jù)實驗內(nèi)容閱讀教材中的有關(guān)章節(jié)，弄清基本概念和方法，使實驗?zāi)茼樌瓿?。三、實驗原理雙水相系統(tǒng)是指某些親水性高分子聚合物的水溶液超過一定濃度后可形成兩相，并且在兩相中水分均占很大比例，Albert sson于20 世紀50 年代后期開發(fā)了雙水相萃取法。70 年代以后，眾多科學(xué)家發(fā)展了雙水相萃取技術(shù)在生物分離過程中的應(yīng)用，為蛋白質(zhì)特別是胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分離與純化開辟了新的途徑。四、實驗材料、儀器和試劑（粗五號字宋體）螺旋藻、PEG4000、硫酸鈉、氯化鉀、分光光度計、50ml量筒4個、500ml燒杯4個、電子天平、NaH2PO42H2O、Na2HPO412H2O五、實驗步驟或方法螺旋藻細胞的破碎及其含量計算準(zhǔn)確稱取0. 5 g 螺旋藻粉，加入100 mL p H 為7. 0 的0. 01 mol/ L 的磷酸緩沖液，采用反復(fù)凍融(3次) 的方法對藻體細胞進行破碎，在顯微鏡下觀察計數(shù)細胞破碎率可達到90 %以上。將破碎的螺旋藻細胞懸濁液于4 000 r/ min 離心20 min，傾倒上清液可得到含藻藍蛋白的粗提液。測粗提液在6650 nm下的吸光度，計算藻藍蛋白的含量。螺旋藻中以藻膽蛋白吸收光譜的差異作為其檢定的標(biāo)準(zhǔn)。藻藍蛋白( PC) 在620 nm 處有最大光吸收值，其含量測定計算方法如式(1) 所示。藻藍蛋白的純度為溶液在620和280 nm 的吸光度的比值。PC=*A620 (1)其中，藻藍蛋白的質(zhì)量濃度( g/ L)， A620代表波長在620 nm 處的吸光度。相圖的繪制準(zhǔn)確稱取質(zhì)量分數(shù)為50%的PEG原液于試管中，加入19%硫酸鈉原液，混合，直至試管開始出現(xiàn)混濁為止，計量加入硫酸鈉的量，再加入適量水，使體系變澄清，計量加入的水，并繼續(xù)加入硫酸鈉，使系統(tǒng)再次變混濁，如此反復(fù)操作，計算達到混濁時PEG和硫酸鈉在系統(tǒng)中的質(zhì)量分數(shù)，得出PEG和硫酸鈉的相圖。雙水相萃取方法在粗提液中加入一定量的PEG和無機鹽，充分振蕩使成相物質(zhì)溶解，同時完成了藻藍蛋白在雙水相系統(tǒng)中的分配過程。此雙水相系統(tǒng)靜置一定時間，當(dāng)兩相達到相分離，分別用移液管抽取上下相的溶液，在波長280、6650 nm下測吸光度，計算藻藍蛋白的質(zhì)量濃度和純度。最佳提取條件為：12 % PEG4000、15 % Na2 SO4 、1 % KCl。六、實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)處理（或?qū)嶒瀳D像、現(xiàn)象等）藻藍蛋白收率、分配系數(shù)經(jīng)雙水相系統(tǒng)萃取過的螺旋藻細胞破碎液(粗提液) 中，藻藍蛋白富集于雙水相系統(tǒng)的上相中,因此計算藻藍蛋白收率( E) 、分配系數(shù)( K) 如下式:　　　式中的V 代表溶液體積，下標(biāo)0 ,t ,b 分別代表粗提液、萃取后雙水相系統(tǒng)上相和下相的溶液。繪制PEG硫酸鈉雙水相相圖，并計算藻藍蛋白收率( E) 、分配系數(shù)( K)。七、思考題雙水相體系的原理是什么？雙水相相圖的作用是什么？雙水相萃取法與什么優(yōu)點？參考文獻：劉楊,王雪青,龐廣昌,謝卓峰. 雙水相萃取法富集分離螺旋藻藻藍蛋白的研究. 海洋科學(xué), 2008,32(7):3037.附錄：磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer, PB）試劑： NaH2PO42H2O Na2HPO412H2O配制方法：配制時，（PB），根據(jù)需要可配制不同濃度的PB和PBS。（1）； (或 NaH2PO4H2O )加重蒸水至1000ml溶解。（2）： （或 Na2HPO47H2O Na2HPO42H2O ）加重蒸水至1000ml溶解。（3）：取19ml 12H2O,（～）。若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調(diào)整，室溫保存即可。（～）pH (ml) (ml) 實驗二 超濾法生產(chǎn)大豆?jié)饪s蛋白一、實驗?zāi)康淖寣W(xué)生掌握超濾方法大豆分離蛋白的制備方法。二、實驗要求(1)上課前應(yīng)閱讀本任務(wù)書中相應(yīng)的部分，明確實驗的內(nèi)容和要求。(2)根據(jù)實驗內(nèi)容閱讀教材中的有關(guān)章節(jié)，弄清基本概念和方法，使實驗?zāi)茼樌瓿?。三、實驗原理目前?yīng)用于食品的大豆蛋白有大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白,目前膜分離已經(jīng)應(yīng)用于這兩種大豆蛋白的生產(chǎn)中。膜分離過程沒有相變,能夠保持天然蛋白質(zhì)的物理化學(xué)特性。超濾能夠截留傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝中流失的清蛋白,提高蛋白質(zhì)回收率。與冷凍干燥、蒸發(fā)相比，膜分離能耗較少；根據(jù)實際應(yīng)用的需要膜分離可以在低溫、常溫和較高的溫度下進行。四、實驗材料、儀器和試劑大豆粕、氫氧化鈉、電子天平、超濾設(shè)備、磨醬機五、實驗步驟或方法實驗步驟：低溫脫脂豆粕→稀堿浸提(料液比1 : 15，在400r/ min 下攪拌30min，調(diào)pH ) →離心分離(在3 500r/ min 下離心15min，保留上清液) →沉淀重復(fù)上面的步驟→預(yù)處理(過60 目尼龍濾篩) →超濾→蛋白濃縮液。工藝要點：1）、將大豆粕干法粉碎至4060目，然后加水混合，用磨醬機磨細。2）、第一次浸提時加水為大豆重的15倍，：1較好，進行攪拌30min。3）、超濾。六、實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)處理記錄實驗過程和實驗過程中的現(xiàn)象。七、思考題超濾的原理是什么？超濾過程受什么因素的影響？超濾在食品中的應(yīng)用。實驗三 豬胰脂肪酶的分離純化及其性質(zhì)研究一、 實驗?zāi)康谋緦嶒炛饕獙W(xué)生進行酶的分離純化、酶的鑒定、酶活性和特性等分析技術(shù)的訓(xùn)練。使學(xué)生在大學(xué)四年當(dāng)中可以得到良好的科學(xué)素養(yǎng)的熏陶和科學(xué)興趣的培養(yǎng)，并讓其中一些基礎(chǔ)好、有潛力的本科生通過循序漸進和適當(dāng)?shù)膶W(xué)習(xí)和訓(xùn)練，具備從事科研工作的基礎(chǔ)知識能力和前沿洞察力，使學(xué)生的知識、能力和素質(zhì)全面協(xié)調(diào)發(fā)展。二、 實驗原理采用層析設(shè)備純化脂肪酶，并鑒定脂肪酶，測定脂肪酶的活性。三、實驗要求(1)上課前應(yīng)閱讀本任務(wù)書中相應(yīng)的部分，明確實驗的內(nèi)容和要求。(2)根據(jù)實驗內(nèi)容閱讀教材中的有關(guān)章節(jié)，弄清基本概念和方法，使實驗?zāi)茼樌瓿?。四、實驗材料、儀器和試劑新鮮豬胰臟、SephadexG100、低溫離心機、真空凍干機、層析工作站系統(tǒng)、低溫層析柜、紫外分光光度計、磁力攪拌器、真空泵、聚乙烯醇、橄欖油、酚酞、透析袋、羅丹明B、硝基苯酚、異丙醇、無水乙醇等。五、實驗步驟或方法粗豬胰脂肪酶的制備取新鮮豬胰臟50g切成薄片，用組織搗碎機攪成胰漿， ，用磁力攪拌器攪拌2h，用雙層紗布過濾，取溶液，接著1500r/min 離心去除沉淀，溶液加入冷卻到5℃的丙酮150ml， 用磁力攪拌器繼續(xù)攪拌30min，用低溫離心機4℃，2000r/min 離心20min，取沉淀，然后用200ml 75%的丙酮溶解攪拌，再離心。沉淀放在低溫真空干燥機中凍干。凍干的固體粉末加入到冷卻5℃的氯仿甲醇( 2:1)100ml 中，用磁力攪拌器攪拌20min，用低溫離心機離心，2000r/min，倒掉上層溶液，沉淀溶于50ml乙醚中，攪拌離心，沉淀再溶于50ml丙酮溶液，攪拌離心。沉淀放在低溫真空干燥機中凍干。凍干粉末溶于20ml ，攪拌20min，在8000r/min 離心30min，取上層溶液，加入硫酸銨，飽和度為60%，同時調(diào)節(jié)pH ，靜止30min，離心取沉淀，沉淀溶于10ml ，透析，用PEG20000濃縮，真空低溫凍干即得粗豬胰脂肪酶。粗脂肪酶的純化上步凍干粉末溶于緩沖液( ) ，進行凝膠層析，填料選為SephdaxG 100， 。將含有胰脂肪酶的小管收集，超濾濃縮，在真空低溫凍干，獲得的粉末就是豬胰脂肪酶。利用Sephadex G100純化粗酶液(1) Sephadex G100的預(yù)處理 g Sephadex G100，至于燒杯中，加入蒸餾水，輕輕攪拌，棄去懸浮顆粒，如此反復(fù)洗滌幾次后，加入過量( )緩沖液，室溫下溶脹72 h。(2) 裝柱 cm，長50 cm的層析柱，垂直固定在鐵架臺上，將層析柱下端的止水螺絲旋緊，向柱中加入約5~7 ，然后緩慢加入溶脹好的凝膠，注意使柱中無氣泡，打開出樣閥。凝膠緩緩下沉，繼續(xù)加入，用玻璃棒輕輕攪拌，使柱中無界限。待凝膠柱裝好后，在凝膠表面放一層濾紙，避免上樣時破壞膠面。用緩沖液平衡層析柱，并打開恒流泵控制流速為12 mL/h。(3) 上樣將柱的上端打開，用吸管將凝膠上面的緩沖液吸出，不要吸凈，留一薄層液面，以免空氣進入。沿管壁緩緩加入樣品，注意不要打亂凝膠表面。擰開下端的螺旋夾，使樣品進入凝膠中，快要進完時，加1~2 mL緩沖液沖洗柱壁，隨即用多量的洗脫液洗脫。(4) 洗脫、收集當(dāng)樣品完全進入凝膠后，用( )緩沖液洗脫樣品， mL/min，并分管收集，收集100管。(5) 凝膠柱的重復(fù)使用與保存當(dāng)樣品的各組分全部洗脫下來之后，即可加入新的樣品，繼