基因工程工具酶簡化版(已修改)
2025-06-07 06:03 本頁面
【正文】 第二章 基因工程的工具酶 一、限制性核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn) 第一節(jié) 限制性核酸內(nèi)切酶 ?限制 (restriction) ?修飾 (modification) ? 限制性核酸內(nèi)切酶的生物學功能：自我保護功能 (只切外來的 DNA，自身 DNA被甲基化后切不動 ) ?核酸酶：水解斷裂多核苷酸鏈的兩個相鄰核苷酸的3,5磷酸二酯鍵 核糖核酸酶（ RNase）： 脫氧核糖核酸酶（ DNase）： 核酸外切酶（ exonuclease）： 核酸內(nèi)切酶（ endonuclease）： ? 限制性核酸內(nèi)切酶： 二、限制性核酸內(nèi)切酶的分類 主要特性 I 型 II 型 III 型 限制修飾 多功能 單功能 雙功能 蛋白結構 異源三聚體 同源二聚體 異源二聚體 輔助因子 ATP,Mg2+,SAM Mg2+ ATP, Mg2+ ,SAM 識別序列 特異性非對稱性序列 特異性 48bp旋轉對稱序列 特異性非對稱性序列 切割位點 距識別序列 1kb處隨機性切割 識別序列內(nèi)或附近特異性切割 距識別序列下游 2426bp 用途 無應用價值 應用廣泛 無應用價值 ?平末端 ?粘性末端 ?1單位酶活性 (1unit 1U)： 在最適反應條件下 1小時完全切割 1ugλDNA樣品的酶量。 ?同序同裂酶 (識別及酶切位點相同 ): 同序異裂酶 (識別位點相同但酶切位點不同 ): ?同尾酶 (酶切位點不同但產(chǎn)生相同的粘性末端 ): 酶切位點的計算： 四核苷酸識別序列： 44 = 256 六核苷酸識別序列： 46 = 4096 2個假設： a 隨機排列； b GC含量 50% 如： 用 BglⅡ(A/GATC/T) 酶切 λ DNA49Kb） : 理論上的切點數(shù)： 49000/4096=12個 實際情況？ 三、限制性核酸內(nèi)切酶的命名 1973年 ① 每一種酶都由產(chǎn)生并純化生出該酶的細菌的種屬名中的三個英文字母合起來代表： ? 第一個字母采用細菌屬名的第一個字母大寫； ? 第二和第三個字母小寫 ， 采用細菌種名的前兩個字母； 如大腸桿菌 （ Escherichia coli） 用 Eco表示 ， 代表從大腸桿菌中分離出的限制性內(nèi)切酶 。 ② 第四個字母表示菌株的
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