【正文】 第三章 轉(zhuǎn)錄基本知識(shí) RNA的生物合成 RNA Biosynthesis, Transcription 遺傳信息傳遞的 中心法則 蛋白質(zhì) 翻譯 轉(zhuǎn)錄 逆轉(zhuǎn)錄 復(fù)制 復(fù)制 DNA RNA 生物的遺傳信息以密碼的形式儲(chǔ)存在 DNA分子上 。 細(xì)胞分裂過程中 ，DNA復(fù)制把親代細(xì)胞所含的遺傳信息忠實(shí)地傳遞給子細(xì)胞 。 子代細(xì)胞的生長發(fā)育過程中 ， 這些遺傳信息通過 轉(zhuǎn)錄 傳遞給 RNA， 再由RNA通過 翻譯 轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的蛋白質(zhì)多肽鏈上的氨基酸排列順序 ， 由蛋白質(zhì)執(zhí)行各種各樣的生物學(xué)功能 ， 使后代表現(xiàn)出與親代相似的遺傳特征 。 一些 RNA病毒能以自己的 RNA為模板 A為合成 DNA， 稱為逆轉(zhuǎn)錄這是中心法則的補(bǔ)充 。 RNA 生物 合成主要內(nèi) 容 一， RNA 基本性質(zhì) 1， RNA 化學(xué)結(jié)構(gòu) 2， RNA 分子結(jié)構(gòu) 3， RNA 種類 及功能 二，轉(zhuǎn)錄的分子事件 1，轉(zhuǎn)錄概念 2，轉(zhuǎn)錄基本特點(diǎn) 3，轉(zhuǎn)錄發(fā)生過程（原核生物真核生物差異）： （ 1）轉(zhuǎn)錄的酶與蛋白因子 （ 2）轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)域：啟動(dòng)子 （ 3）轉(zhuǎn)錄的起始，延伸及結(jié)束 4，真核轉(zhuǎn)錄后加工 三： RNA降解 四： RNA轉(zhuǎn)錄應(yīng)用 1， RNA 化學(xué)結(jié)構(gòu) RNA /DNA Structure RNA含有四種基本堿基，即腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶。此外 還有幾十種稀有堿基 。 2 RNA的分子結(jié)構(gòu) RNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)主要是由 AMP、 GMP、 CMP和UMP四種核糖核苷酸通過 3‘， 5’磷酸二酯鍵相連而成的多聚核苷酸鏈。 天然 RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，一般并不像 DNA那樣 都是雙螺旋結(jié)構(gòu) ，只有在許多區(qū)段可發(fā)生自身回折， 使部分 AU、GC堿基配對(duì) ， 從而形成短的不規(guī)則的螺旋區(qū) 。不配對(duì)的堿基區(qū)膨出形成環(huán)，被排斥在雙螺旋之外。 RNA中雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定因素，也主要是堿基的堆砌力，其次才是氫鍵。 每一段雙螺旋區(qū)至少需要 4～ 6對(duì)堿基對(duì)才能保持穩(wěn)定。 在不同的 RNA中，雙螺旋區(qū)所占比例不同。 構(gòu)。 3, RNA 種類及功能 RNA按功能不同分為三類，即 信使 RNA(mRNA)、轉(zhuǎn)運(yùn) RNA(tRNA)及核蛋白體 RNA(rRNA)。 在大多數(shù)細(xì)胞中 RNA的含量比 DNA多 5～ 8倍。 RNA理化特點(diǎn) RNA與 DNA最重要的區(qū)別一是 RNA只有一條鏈，二是它的堿基組成與 DNA的不同， RNA沒有堿基 T（胸腺嘧啶），而有堿基 U（尿嘧啶）。所以導(dǎo)致他們有以下性質(zhì)上的不同。 ： DNA無，只有酸解離，堿基被屏蔽（在分子內(nèi)部形成了 H鍵）。 RNA有，有 PI。 ： DNA。RNA，粘度由分子長度 /直徑?jīng)Q定， DNA為線狀分子， RNA為線團(tuán)。 ： DNA耐堿 RNA易被堿水解。 ： 鑒別 DNA和 RNA+濃 HCl RNA → 綠色化合物 DNA → 藍(lán)紫色化合物苔黑酚 二苯胺啡啶溴紅（熒光染料）和溴嘧啶都可對(duì) DNA染色，原理是卡在分子中， DNA的離心和電泳顯色可用它們。 ： 都溶于水而不溶于乙醇，因此，常用乙醇來沉淀溶液中的 DNA和 RNA。 DNA溶于苯酚而RNA不溶，故可用苯酚來沉淀 RNA。 ：核酸的 λm＝ 260nm，堿基展開程度越大，紫外吸收就越厲害。當(dāng) A＝ 1時(shí)， DNA：50ug/ml， RNA和單鏈 DNA： 40ug/ml，寡核苷酸：20ug/ml。用 A260/A280還可來表示核酸的純度。 ： 核苷酸、核酸均可以進(jìn)行電泳，泳動(dòng)速度主要由分子大小來決定，因此，電泳是測定核酸分子量的好方法。 紫外分光光度計(jì) A260/A280和A260/A230的含義 A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波長，最佳測量值的范圍為 。 A280nm 是蛋白和酚類物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長，比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估： 純 DNA的 A260/A280比值為 ，純 RNA為 。 如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質(zhì)的污染，需要純化樣品。 比值 = 50％蛋白質(zhì) /DNA溶液 A230nm ，是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估： 純 DNA和 RNA的 A260/A230比值為 。 若比值小于（糖類）、鹽類或有機(jī)溶劑污染，需要純化樣品。 A260/A280和 A260/A230 ： 是核酸純度的指示值 ，純度好的 DNA，在 下其比值應(yīng)該在 或 ， A260 / A280的比值， 用于評(píng)估樣品的純度， 因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?280 nm。 純凈的樣品比值大于 （ DNA）或者 （ RNA）。如果比值低于 或者 ，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。 A230是多肽、芳香基團(tuán)、苯酚和一些碳?xì)浠衔锏奈舛龋?A230表示樣品中存在一些污染物， 如碳水化合物、多肽、苯酚 等，較純凈的核酸 A260/A230的比值大于 。 在 RNA聚合酶的催化下 ， 以一段 DNA鏈為模板合成RNA， 從而將 DNA所攜帶的遺傳信息傳遞給 RNA的過程稱為 轉(zhuǎn)錄 （ transcription） 。 經(jīng)轉(zhuǎn)錄生成的 RNA有多種 ， 主要的是 rRNA， tRNA，mRNA， snRNA(small nuclear RNA和 HnRNA等 。 轉(zhuǎn)錄 RNA DNA 二，轉(zhuǎn)錄的分子事件 1，轉(zhuǎn)錄概念 mRNA攜帶了 DNA的遺傳信息，在蛋白質(zhì)合成中作為合成蛋白質(zhì)的模板起傳遞遺傳信息的作用。 tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)最具特色 ，呈三葉草型。其主要功能部位有二個(gè)，一是氨基酸臂的 3’末端為 CCAOH，起特異結(jié)合氨基酸作用；二是有一個(gè)反密碼環(huán)，環(huán)上有反密碼子，與 mRNA上的密碼子反向互補(bǔ)，于是由tRNA攜帶的氨基酸可被轉(zhuǎn)運(yùn)到與密碼子對(duì)應(yīng)的部位，因此 tRNA具有攜帶轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的作用。 tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)為倒“ L”型，是天然狀態(tài)下的構(gòu)象。 rRNA不單獨(dú)存在，它與蛋白質(zhì)結(jié)合為核蛋白體，分為大小亞基，存在于粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與胞漿中。核蛋