高效液相色譜法相關(guān)參數(shù)測定(已修改)
2025-05-14 07:19 本頁面
【正文】 高效液相色譜分析法 High performance liquid chromatography 一、液相色譜儀器 二、 高效液相色譜法的特點(diǎn) 特點(diǎn)：高壓、高效、高速 高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。 三、流程及主要部件 (1) 高壓輸液泵 A、 主要部件之一 ， 壓力： 150～ 350 105 Pa。 B、 為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相 （ 10μm） ， 液體的流動(dòng)相高速通過時(shí) ， 將產(chǎn)生很高的壓力 ， 因此高壓 、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一 。 C、 應(yīng)具有壓力平穩(wěn) 、 脈沖小 、 流量穩(wěn)定可調(diào) 、 耐腐蝕等特性 (2)梯度淋洗裝置 外梯度 : 利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。 內(nèi)梯度 : 一臺(tái)高壓泵 , 通過比例調(diào)節(jié)閥 ,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。 (3) 進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)， 通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示： (4) 高效分離柱 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑 1～ 6 mm， 柱長 5～ 40 cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 a. 紫外檢測器 應(yīng)用最廣 ， 對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng) 。 特點(diǎn)： 靈敏度高； 線形范圍高； 流通池可做的很小 （ 1mm 10mm ， 容積 8μL） ； 對流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感； 波長可選 ， 易于操作； 可用于梯度洗脫 。 (5) 液相色譜檢測器 b. 光電二極管陣列檢測器 光電二極管陣列檢測器： 1024個(gè)二極管陣列 ， 各檢測特定波長 ， 計(jì)算機(jī)快速處理 ，三維立體譜圖 ， 如圖所示 。 光電二極管陣列檢測器 除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器； 可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值 。 差值與濃度呈正比； 通用型檢測器 （每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù) ） ； 靈敏度低 、 對溫度敏感 、 不能用于梯度洗脫； 偏轉(zhuǎn)式 、 反射式和干涉型三種； c. 示差折光檢測（ Differential refractive index detector） 示差折光檢測器 d. 熒光檢測器 （ Fluorescence detector） 高靈敏度 、 高選擇性； 對多環(huán)芳烴 ， 維生素 B、黃曲霉素 、 卟啉類化合物 、農(nóng)藥 、 藥物 、 氨基酸 、 甾類化合物等有響應(yīng)； 主要分離類型與原理 一、 液 固吸附色譜 (Liquidsolid adsorption chromatography)
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