核糖體展示技術(shù)ppt課件(已修改)
2025-05-13 01:09 本頁(yè)面
【正文】 核糖體展示技術(shù) 生物工程 1001班 郭倩倩 核糖體展示技術(shù) (Ribosome Display Technology, RDT) 是由 Pl252。ckthun 實(shí)驗(yàn)室在多聚核糖體展示技術(shù)的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來(lái)的一種利用功能性蛋白相互作用進(jìn)行篩選的新技術(shù)，它將正確折疊的蛋白及其 mRNA同時(shí)結(jié)合在核糖體上， 形成 mRNA核糖體 蛋白質(zhì)三聚體，使目的蛋白的基因型和表型聯(lián)系起來(lái)，可用于抗體及蛋白質(zhì)文庫(kù)選擇、蛋白質(zhì)體外改造等。運(yùn)用此技術(shù)已成功篩選到一些與靶分子特異結(jié)合的高親和力蛋白質(zhì)， 包括抗體、 多肽、 酶等， 是蛋白質(zhì)篩選的重要工具。 原理 核糖體展示技術(shù)通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng) （ PCR）擴(kuò)增 DNA文庫(kù)，同時(shí)引入 T7 啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)及莖 環(huán)結(jié)構(gòu)， 將其轉(zhuǎn)錄成 mRNA，在無(wú)細(xì)胞翻譯系統(tǒng)中進(jìn)行翻譯， 使目的基因的翻譯產(chǎn)物展示在核糖體表面，形成“ mRNA核糖體 蛋白質(zhì)” 復(fù)合物，構(gòu)成核糖體展示的蛋白文庫(kù)， 然后用相應(yīng)的抗原從翻譯混合物中進(jìn)行篩選， 以乙二胺四乙酸（ EDTA）解離結(jié)合的核糖體復(fù)合物或以特異抗原洗脫整個(gè)復(fù)合物，并從中分離 mRNA。通過(guò)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ RT PCR） 提供下一輪展示的模板，所得 DNA進(jìn)入下一輪富集，部分 DNA可通過(guò)克隆進(jìn)行測(cè)序分析等。 啟動(dòng)子是基因的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。啟動(dòng)子（ Promoters）就像“開(kāi)關(guān)”，決定基因的活動(dòng)。啟動(dòng)子也應(yīng)由 DNA組成。啟動(dòng)子本身并不控制
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