核糖體展示技術(shù)ppt課件(已修改)
2025-05-13 01:09 本頁面
【正文】 核糖體展示技術(shù) 生物工程 1001班 郭倩倩 核糖體展示技術(shù) (Ribosome Display Technology, RDT) 是由 Pl252。ckthun 實驗室在多聚核糖體展示技術(shù)的基礎(chǔ)上改進而來的一種利用功能性蛋白相互作用進行篩選的新技術(shù)，它將正確折疊的蛋白及其 mRNA同時結(jié)合在核糖體上， 形成 mRNA核糖體 蛋白質(zhì)三聚體，使目的蛋白的基因型和表型聯(lián)系起來，可用于抗體及蛋白質(zhì)文庫選擇、蛋白質(zhì)體外改造等。運用此技術(shù)已成功篩選到一些與靶分子特異結(jié)合的高親和力蛋白質(zhì)， 包括抗體、 多肽、 酶等， 是蛋白質(zhì)篩選的重要工具。 原理 核糖體展示技術(shù)通過聚合酶鏈反應(yīng) （ PCR）擴增 DNA文庫，同時引入 T7 啟動子、核糖體結(jié)合位點及莖 環(huán)結(jié)構(gòu)， 將其轉(zhuǎn)錄成 mRNA，在無細胞翻譯系統(tǒng)中進行翻譯， 使目的基因的翻譯產(chǎn)物展示在核糖體表面，形成“ mRNA核糖體 蛋白質(zhì)” 復(fù)合物，構(gòu)成核糖體展示的蛋白文庫， 然后用相應(yīng)的抗原從翻譯混合物中進行篩選， 以乙二胺四乙酸（ EDTA）解離結(jié)合的核糖體復(fù)合物或以特異抗原洗脫整個復(fù)合物，并從中分離 mRNA。通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ RT PCR） 提供下一輪展示的模板，所得 DNA進入下一輪富集，部分 DNA可通過克隆進行測序分析等。 啟動子是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉(zhuǎn)錄）的起始時間和表達的程度。啟動子（ Promoters）就像“開關(guān)”，決定基因的活動。啟動子也應(yīng)由 DNA組成。啟動子本身并不控制
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