高效毛細管電泳在蛋白質(zhì)分析中應(yīng)用(已修改)
2025-05-12 18:03 本頁面
【正文】 高效毛細管電泳在 蛋白質(zhì)分析中的應(yīng)用 北京華陽利民儀器有限公司 Beijing huayanglimin Instrument Co.,Ltd 網(wǎng)址： . Email: 一、概述 隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展 及各種新型蛋白質(zhì)類生化藥物的相繼問世．傳統(tǒng)的 SDS一聚丙烯酰胺電泳及常規(guī)的液相色譜技術(shù)已遠遠不能適應(yīng)大規(guī)模藥物生產(chǎn)過程分析與產(chǎn)品純度檢驗的需要， 而毛細管電泳 (HPCE)技術(shù)是近年來迅速發(fā)展起來的一種新型分離、分析技術(shù)。具有高效、快速、簡便、微量的優(yōu)異特點。該技術(shù)在生物大分子、無機離子、光學(xué)異構(gòu)體及有機藥物分離、分析方面獲得了廣泛的應(yīng)用 。 分離原理 電泳儀 進樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 檢測系統(tǒng) 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 毛細管電泳的分離模式 毛細管電泳有多種分離模式，給樣品分離提供了不同的選擇機會 .根據(jù)分離原理可分為 : ? 毛細管區(qū)帶電泳 CZE ? 膠束電動毛細管色譜 MEKC ? 等電聚焦 CIEF、等速電泳 CITP、 ? 凝膠電泳 CGE ? 毛細管電色譜 CEC ? 親和毛細管電泳 ACE、免疫毛細管電泳 CETA ? 非水毛細管電泳 NACE ? 芯片電泳等 毛細管區(qū)帶電泳 capillary zone electrophoresis ， CZE 帶電粒子的遷移速度 =電泳和電滲流速度的矢量和 ? 正離子：兩種效應(yīng)的運動方向一致，在負極最先流出； ? 中性粒子：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出； ? 陰離子：兩種效應(yīng)的運動方向相反； ν電滲流 ν電泳時 ,陰離子在負極最后流出 ,在這種情況下 ,不但可以按類分離 ,同種類離子由于差速遷移被相互分離。 是最基本、應(yīng)用廣的分離模式 毛細管 等電聚焦 電泳（ CIEF， isoelectric focusing electrophoresis） 利用特殊的一種 緩沖液 （ 兩性電解質(zhì) ）在 凝膠 （常用 聚丙烯酰胺凝膠 ）內(nèi)制造一個 pH梯度， 電泳 時每種 蛋白質(zhì) 就將 遷移 到等于其 等電點 （ pI）的 pH處（此時此蛋白質(zhì)不再帶有凈的正或負 電荷 ），形成一個很窄的區(qū)帶，也同時達到濃縮的作用。 毛細管凝膠電泳 capillary gel electrophoresis ， CGE ? 將聚丙烯酰胺等在毛細管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 ? 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。 ? 常用于蛋白質(zhì)、 DNA等的分離，是 DAN排序的重要手段。 ? 特點：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。 ? 無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。 膠束電動毛細管色譜（ MECC ， MEKC） micellar electrokiic capillary chromatography， MEKC ? 緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負電的膠束。在電場力的作用下，膠束在柱中移動。中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長； ? 可用來分離中性物質(zhì)，擴展了高效毛細管電泳的應(yīng)用范圍。 是色譜與電泳分離模式的結(jié)合 毛細管電泳分離模式選擇 ? 根據(jù)簡單通用性原則 ,還是以 CZE、 MEKC為優(yōu)，分離中性離子時優(yōu)先考慮 MEKC ? 在分離生物樣品時 ,通常需要根據(jù)分離的目的來選擇分離方式 ,若測定樣品的尺寸 ,就須選 NGCE或CGE,偶可選 CZE或 MEKC,要測定樣品的等電點 ,則應(yīng)選用 CIEF,在做親和作用研究時 ,應(yīng)首選 ACE. ? 分離蛋白質(zhì)和多肽等兩性樣品時優(yōu)先考慮 CIEF ? 分離水難溶組分時，優(yōu)先考慮非水毛細管電泳形式 CE技術(shù)的應(yīng)用 毛細管電泳技術(shù)不僅廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)衛(wèi)生、臨床檢測、司法、食品衛(wèi)生、藥品檢測、農(nóng)業(yè)化學(xué)等領(lǐng)，在臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用也有較多應(yīng)用 CE在蛋白質(zhì)分離分析中的應(yīng)用 主要包括： ? 肽和蛋白的鑒別分析、結(jié)構(gòu)分析、微量制備，以及蛋白的定量測定、純度檢測、非均一性檢測、穩(wěn)定性和動力學(xué)研究。 ? 蛋白的鑒別分析通常包括對氨基酸的組成和序列、一些物化常數(shù)如分子量和等電點等的測定，以區(qū)分和鑒定結(jié)構(gòu)和種類不同的蛋白質(zhì) 氨基酸與蛋白質(zhì)分析 analysis of amino acids 蛋白質(zhì)分析 核酸分析及 DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA 重要
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