【正文】 牛海綿狀腦病防治技術(shù)規(guī)范牛海綿狀腦?。˙ovine Spongiform Encephalopathy，BSE），俗稱瘋牛病，是由朊毒體（PrPSc）引起成年牛的漸進(jìn)性神經(jīng)性致死性疫病。以潛伏期長、視聽觸三覺過敏、共濟(jì)失調(diào)和病死率高為特征。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報告的動物疫病，我國列為一類動物疫病。為預(yù)防、控制和撲滅瘋牛病，依據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》、《重大動物疫情應(yīng)急條例》等法律法規(guī)，制定本規(guī)范。1. 適用范圍本規(guī)范規(guī)定了瘋牛病的診斷、報告、處置、預(yù)防與控制、風(fēng)險分析和公共衛(wèi)生等技術(shù)措施。本規(guī)范適用于中華人民共和國境內(nèi)一切與瘋牛病防治活動有關(guān)的單位和個人。2. 診斷 流行病學(xué) 傳染源污染癢病因子的肉骨粉及飼料。 傳播途徑消化道感染。 易感動物牛科和貓科動物易感。多發(fā)于4～6歲的牛，2歲以下罕見，6歲以上明顯減少。 潛伏期一般為2～8年，平均為4～5年。 發(fā)病率和病死率主要發(fā)生于奶牛，發(fā)病率一般不超過3%，病死率100%。 季節(jié)性該病無明顯的季節(jié)性，可常年發(fā)病。 臨床癥狀 多數(shù)病例不表現(xiàn)典型癥狀。，隨病程發(fā)展，逐漸出現(xiàn)神經(jīng)癥狀：不安、恐懼、驚厥或沉郁；不自主運動，如磨牙、肌肉抽搐、震顫和痙攣；反應(yīng)過敏，特別對觸摸、聲音和光照過度敏感；不愿通過門檻、有縫隙的地面或進(jìn)入畜欄；運動異常，共濟(jì)失調(diào)，步態(tài)呈“鵝步”狀，四肢伸展過度，反復(fù)跌倒。 大多數(shù)病牛都經(jīng)過幾周或幾月漸進(jìn)發(fā)展，病程多為1～4個月，少數(shù)長達(dá)1年，日漸消瘦，衰竭死亡。 病理變化 剖檢無明顯病變。 組織病理學(xué)檢查可見在腦干部的孤束核、迷走神經(jīng)核、三叉神經(jīng)脊束核、聽神經(jīng)核、紅核等區(qū)的神經(jīng)元核周體和灰質(zhì)神經(jīng)纖維網(wǎng)漿出現(xiàn)大量空泡化病變（即海綿狀病變），且在完整的冠狀切片上呈現(xiàn)兩側(cè)對稱性分布，并伴有星形膠質(zhì)細(xì)胞增生。 樣品的采集、運輸和保存（見附件1） 血清學(xué)檢測無診斷意義。 病原學(xué)檢測應(yīng)在國家外來動物疫病研究中心或農(nóng)業(yè)部指定實驗室進(jìn)行。免疫組織化學(xué)（見GB/T19180）、免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附和組織病理學(xué)檢查（HE染色，見GB/T19180）。 結(jié)果判定 疑似病例，特別是對觸摸、聲音和光照過度敏感，可初步判定為疑似瘋牛病病例。 確診病例，可判定為確診瘋牛病病例。3. 疫情報告和確認(rèn) 疑似疫情的報告 任何單位和個人，應(yīng)當(dāng)立即向當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門、動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)或者動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)報告。當(dāng)?shù)乜h級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)初步判定為瘋牛病疫情的，應(yīng)在2小時內(nèi)報本地獸醫(yī)主管部門，并逐級上報至省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)。省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)診斷為疑似瘋牛病疫情時，應(yīng)立即報告省級獸醫(yī)主管部門和中國動物疫病預(yù)防控制中心；省級獸醫(yī)主管部門應(yīng)在1小時內(nèi)報省級人民政府和國務(wù)院獸醫(yī)主管部門。 確診疫情的報告 國家外來動物疫病研究中心或農(nóng)業(yè)部指定實驗室確診為瘋牛病疫情時，應(yīng)立即通知疫情發(fā)生地省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)和獸醫(yī)主管部門，同時報中國動物疫病預(yù)防控制中心和國務(wù)院獸醫(yī)主管部門。 疫情確認(rèn) 國務(wù)院獸醫(yī)主管部門根據(jù)國家外來動物疫病研究中心或農(nóng)業(yè)部指定實驗室確診結(jié)果，確認(rèn)瘋牛病疫情。 4. 疫情處置，縣級獸醫(yī)主管部門應(yīng)組織2名以上獸醫(yī)人員立即到現(xiàn)場進(jìn)行調(diào)查核實。省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)判定為疑似瘋牛病疫情的，在國家外來動物疫病研究中心指導(dǎo)下采集腦樣品（見附件1），并及時送國家外來動物疫病研究中心或農(nóng)業(yè)部指定實驗室進(jìn)行確診。 對發(fā)病場（戶）實施隔離、監(jiān)視，禁止易感動物、畜產(chǎn)品、飼料及有關(guān)物品移動，并對其內(nèi)、外環(huán)境進(jìn)行嚴(yán)格消毒（見附件2）。必要時采取封鎖、撲殺等措施。疫情確診后，立即啟動相應(yīng)級別的應(yīng)急預(yù)案。病牛所在的養(yǎng)殖場（戶）。 風(fēng)險場與風(fēng)險牛/動物相關(guān)（見附件3）的養(yǎng)殖場（戶）。疫情發(fā)生所在地縣級以上獸醫(yī)主管部門劃定疫點和風(fēng)險場后，報請同級人民政府對疫點和風(fēng)險場實行封鎖。人民政府在接到報告后，應(yīng)在24小時內(nèi)發(fā)布封鎖令?？缧姓^(qū)域發(fā)生疫情時，由有關(guān)行政區(qū)域共同的上一級人民政府對疫點和風(fēng)險場實行封鎖，或者由各有關(guān)行政區(qū)域的上一級人民政府共同對疫點和風(fēng)險場實行封鎖。必要時，上級人民政府可以責(zé)成下級人民政府對疫點和風(fēng)險場實行封鎖。 對疫點應(yīng)采取的措施 以靜脈注射巴比妥酸鹽或電擊法撲殺疫點內(nèi)所有病牛及同群牛，采集所有撲殺牛的腦樣品送檢，并對病死牛、撲殺牛及產(chǎn)品等進(jìn)行無害化處理（見附件4）。 對排泄物、污染或可能污染的飼料和墊料、污水等進(jìn)行無害化處理（見附件4）。 對污染的工具、場所進(jìn)行消毒（見附件2）。 在疫點周圍設(shè)立警示標(biāo)志，在出入牛場的路口設(shè)置臨時消毒站，重點對運輸工具進(jìn)行消毒（見附件2）。4. 對風(fēng)險場應(yīng)采取的措施限制牛、羊等反芻動物出入，確認(rèn)風(fēng)險牛/動物（見附件3）。 風(fēng)險產(chǎn)品追蹤處理追蹤風(fēng)險牛制成的各種產(chǎn)品（見附件3），并進(jìn)行無害化處理（見附件4）。因食用肉骨粉而引起的瘋牛病疫情，應(yīng)采取措施，查找肉骨粉流向，找出所有的潛在感染牛。 解除封鎖疫點內(nèi)最后一頭可疑牛撲殺，并按規(guī)定進(jìn)行消毒和無害化處理，經(jīng)疫情發(fā)生所在地上級獸醫(yī)主管部門組織驗收合格后，由所在地縣級以上獸醫(yī)主管部門向原發(fā)布封鎖令的人民政府申請解除封鎖，由該人民政府發(fā)布解除封鎖令，并通報毗鄰地區(qū)和有關(guān)部門，報上一級政府備案。5. 預(yù)防與控制提高防范意識，加強港口、機場檢疫。應(yīng)從無瘋牛病國家進(jìn)口活牛及相關(guān)產(chǎn)品，同時應(yīng)提供無該病的檢疫證明。進(jìn)口時經(jīng)進(jìn)出境檢疫部門嚴(yán)格檢疫，活動物到達(dá)后必須進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，監(jiān)測無疫后方可混群。 飼養(yǎng)管理、牛羊肉骨粉和含有牛羊肉骨粉的飼料或添加劑。 禁止用反芻動物源性肉骨粉或飼料喂牛。、生產(chǎn)、經(jīng)營等場所必須符合《動物防疫條件審查辦法》規(guī)定的動物防疫條件。 監(jiān)測按國家監(jiān)測計劃加強瘋牛病監(jiān)測。 檢疫在產(chǎn)地檢疫、屠宰檢疫工作中應(yīng)加強瘋牛病檢疫。 宣傳培訓(xùn)獸醫(yī)主管部門要加強瘋牛病防控知識宣傳，提高民眾的公共衛(wèi)生意識，爭取各行業(yè)和全社會的密切合作，有效防范瘋牛病。6. 風(fēng)險分析建立瘋牛病風(fēng)險評估機制。在發(fā)生瘋牛病疫情后，應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果及時開展風(fēng)險評估，以制定更加詳細(xì)而有效的消滅計劃。7. 公共衛(wèi)生瘋牛病可以通過消化道和醫(yī)源性途徑感染人，并引起死亡。采樣和檢測人員在進(jìn)行相關(guān)活動時應(yīng)采取必要的生物安全防護(hù)措施。附件1瘋牛病樣品采集與運送瘋牛病樣品可按冷凍保存或甲醛固定處理，然后送至國家外來動物疫病研究中心或農(nóng)業(yè)部指定實驗室進(jìn)行檢測。方法一：用于冷凍處理的牛腦樣品采集與運送（推薦）1 專用采樣工具采集牛腦樣品的特點該工具為塑料制品，呈勺子形狀，前端帶有鋒利的齒，便于切斷腦組織。這種采樣方式有著非常明顯的優(yōu)點，如使用簡單、節(jié)約成本、工作效率高、機動性強、采樣安全。2 采樣物品準(zhǔn)備數(shù)碼照相機（或數(shù)碼攝像機）、專用的采樣勺（一把勺子最多可以采集三份樣品，牛腦采樣勺為藍(lán)色）、醫(yī)用剪刀（一把，長10cm左右）、一次性手套、橡膠檢查手套（即乳膠手套）、口罩、工作服、樣品杯（可向參考實驗室索?。⒂浱柟P、冰袋（至少3塊大號的冰袋）、大號的透明膠帶、帶蓋泡沫箱（有厚度，無破損，大小適中）、簽字筆或圓珠筆、采樣單、吸水紙等。3 采樣步驟，則要拍照或攝像留下證據(jù)。每省至少要對20%的臨床疑似牛進(jìn)行拍照或攝像，并且收集臨床疑似牛的其他材料如檔案等。采集臨床疑似牛時，采樣人員還需要通過問詢等方式弄清該病牛的其他情況，問詢內(nèi)容可以包括飼養(yǎng)歷史、來源、流動等情況。這些證據(jù)材料必須存檔和備份，運送樣品時一并寄送至檢測實驗室。，其中一人戴好一次性手套和橡膠檢查手套，另外一人專門登記和開啟樣品杯而不需要戴手套。通過查閱養(yǎng)殖檔案或者觀察牙齒檢查牛的年齡，大于3歲的牛（第二對永久門齒長出）才可以采樣，但如果該動物為瘋牛病風(fēng)險牛則沒有年齡限制。 在平整地面倒置牛頭，即牛頭的兩角和鼻子靠地放置。同時，另外一人開始填寫采樣單，并且在樣品杯上標(biāo)記上對應(yīng)的樣品編號（以縣/市名+序號，如青島1號）。一個樣品杯只能裝一個腦樣品。，目的是便于插入采樣勺。然后用一個手指伸入枕骨大孔中，沿著延腦（延髓）轉(zhuǎn)一周，目的是切斷延腦與頭骨之間相連的神經(jīng)和血管，以便于腦組織順利挖出。（也即勺子從枕骨大孔的上面進(jìn)入）將采樣勺插入枕骨大孔中，插入時采樣勺要緊貼枕骨大孔的腔壁，以免損壞延腦組織。采樣勺插入的深度約為5～7cm，然后向上一扳勺子手柄，同時往外摳出腦組織和勺子，延腦便可完整取出。盡量保護(hù)好延腦“三叉口”處（腦閂部）的組織的完整性。，擰緊杯蓋，然后放置在盛有冰袋的泡沫箱中，用透明膠帶將泡沫箱的蓋子綁緊。采好的樣品必須在5小時之內(nèi)放入冰柜中冷凍，以防腐敗；樣品至少要冷凍24小時才能往瘋牛病檢測實驗室運送。，如果沒有冷凍好的樣品，則必須重新放入冰柜中冷凍好，然后由省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)統(tǒng)一將樣品發(fā)送至檢測實驗室。4 樣品運送準(zhǔn)備好帶蓋的結(jié)實的泡沫箱，該泡沫箱必須無任何破損，并且大小適中（根據(jù)樣品的量來決定）。先在泡沫箱的底部鋪上一層吸水紙，之后放入冷凍好的樣品，然后在側(cè)面放入幾塊冷凍好的冰袋，最后在樣品的上面放入幾塊冷凍好的冰袋，蓋緊箱蓋。用大號的透明膠帶封好箱口，再橫向打好包，箱子外面用記號筆寫上“易碎勿壓”以及向上的“箭頭”等字樣，然后由省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)統(tǒng)一運送。打好包的樣品必須及時發(fā)送，并確保4天之內(nèi)運送至檢測實驗室。包裹最好通過航空途徑運送或由專人運送，并切記要注明“易碎勿壓”。切記在采樣單上寫明送樣人及其聯(lián)系方式，樣品檢測完后實驗室要出具檢驗報告并寄給送樣人。方法二：用于甲醛固定處理的牛腦樣品采集與運送1 材料 數(shù)碼照相機（或數(shù)碼攝像機）、采樣單、復(fù)寫紙和圓珠筆或鉛筆 醫(yī)用膠布（用于捆裝有樣品的紗布，并在其上寫上樣品編號） 電動骨鋸或采樣勺、骨鉗、斧頭 解剖刀、剪刀、乳膠手套 紗布、棉線、密封塑料桶（容積不少于5000mL） 固定液：10%福爾馬林生理鹽水固定液（、水900mL、甲醛溶液100mL）2 采樣步驟 如果有比較典型的BSE疑似牛，則要拍照或攝像留下證據(jù)。每省至少要對20%的臨床疑似牛進(jìn)行拍照或攝像，并且收集臨床疑似牛的其他材料如檔案等。采集臨床疑似牛時，采樣人員還需要通過問詢等方式弄清該病牛的其他情況，問詢內(nèi)容可以包括飼養(yǎng)歷史、來源、流動等情況。這些證據(jù)材料必須存檔和備份，運送樣品時一并寄送至檢測實驗室。 填寫采樣單根據(jù)實際情況，按采樣單要求認(rèn)真填寫。采樣地點相同的樣品可以登記在同一張采樣單上。 取樣采樣前通過查閱養(yǎng)殖檔案或者觀察牙齒檢查牛的年齡，大于3歲的牛（第二對永久門齒長出）才可以采樣，但如果該動物為瘋牛病風(fēng)險牛則沒有年齡限制。 電鋸采樣法 。，骨鉗打開顱腔，然后把腦神經(jīng)和腦血管切斷。、小腦和腦干（間腦、中腦、腦橋和延腦）；注意千萬不要把腦干損壞。（紗布容易透水），千萬不能緊，一定要松，然后將寫有編號名稱的醫(yī)用膠布（用圓珠筆或鉛筆將編號寫在上面，編號：地名+序號+樣品類別名，如“青島市10號牛”）用棉線栓在紗布口處，注意不讓膠布脫落。處理好后放入10～20倍體積10%福爾馬林生理鹽水中固定一周。注意標(biāo)簽編號與采樣單的編號相對應(yīng)。，密封在塑料桶中，桶外貼上桶中所有牛腦的編號，以便我們處理牛腦時不開桶蓋便可知桶中的牛腦情況。每個塑料桶可根據(jù)大小放置相應(yīng)數(shù)量的牛腦。 采樣勺采集法（1～2把）、醫(yī)用剪刀（1把）、一次性手套、橡膠檢查手套（即乳膠手套）以及其他采樣用品如采樣單等。，專門登記的人員不需要戴手套。通過查閱養(yǎng)殖檔案或者觀察牙齒檢查牛的年齡，大于3歲的牛（第二對永久門齒長出）才可以采樣，但如果該動物為瘋牛病風(fēng)險牛則沒有年齡限制。，即牛頭的兩角和鼻子靠地放置。，目的是便于插入采樣勺。然后用一個食指伸入枕骨大孔中，沿著延腦轉(zhuǎn)一周，目的是切斷延腦與頭骨之間相連的神經(jīng)和血管，以便于延腦的取出。（也即勺子從枕骨大孔的上面進(jìn)入）將采樣勺插入枕骨大孔中，插入時采樣勺要緊貼枕骨大孔的腔壁，以避免損壞延腦組織。采樣勺插入的深度約為5～7cm，然后向上一扳勺子手柄，同時往外摳出腦組織和勺子，延腦便可完整取出。注：對于臨床疑似牛，采下腦后，從腦中線一分為二，一份用于甲醛固定，另一份用于20℃冷凍并在低溫下運送至參考實驗室。3 樣品的包裝與運送 單獨將采樣單郵寄給檢測實驗室，切不可與樣品一起郵寄，目的是防止采樣單被污染。 將固定好的牛腦放在幾個大的帶內(nèi)蓋的塑料桶中密封，注意每個牛腦都隨身帶有一個唯一的編號，桶外壁上也標(biāo)明桶內(nèi)的所有牛腦編號。運送時桶里的固定液可以僅保留適當(dāng)?shù)牧勘憧?，適當(dāng)?shù)牧渴且越]牛腦為準(zhǔn)，但運送時必須更換固定液。 運輸時，將裝有樣品的塑料桶用木架子固定好，以防運輸途中顛倒。 在木架子外面加兩張不干膠標(biāo)簽，一張注明樣品名稱、采樣單位與地址及聯(lián)系電話，另一張注明放置方向、小心、易碎和切勿倒置等字樣。 樣品由專人或經(jīng)航空運至檢測實驗室。附件2瘋牛病消毒技術(shù)1 藥品選擇分析純氫氧化鈉含有效氯濃度超過2%的次氯酸鈉溶液，要求分析純2 消毒方法 2mol/L氫氧化鈉溶液浸泡或噴灑消毒1小時，適用于建筑物、木質(zhì)結(jié)構(gòu)、水泥表面、車輛和相關(guān)設(shè)施設(shè)備消毒。 含2%有效氯的次氯酸鈉溶液浸泡或噴灑消毒1小時，適用于建筑物、木質(zhì)結(jié)構(gòu)、水泥表面、車輛和相關(guān)設(shè)施設(shè)備消毒。 134～138℃高壓蒸汽滅菌18分鐘，適用于回收使用，且可以耐高壓的物品。 焚燒，適用于一切可以焚燒的物品。3 場地及設(shè)施消毒 金屬設(shè)施設(shè)備的消毒，可采取火焰、噴灑等方式消毒。 牛舍、車輛、屠宰加工、貯藏等場所，可采用消毒液清洗、噴灑等方式消毒。、墊料、糞便等，可收集起來徹底焚燒無害化處理。4 飼養(yǎng)人員的物品消毒衣、帽、鞋等可能被污染的物品，均徹底焚燒無害化處理。附件3瘋牛病風(fēng)險牛/動物及產(chǎn)品的定義1 瘋牛病風(fēng)險牛/動物只要存在下列特征之一的牛/動物均為瘋牛病風(fēng)險牛/動物。 與境外輸入性