[農(nóng)林牧漁]第4章固相析出分離技術(shù)(已修改)
2025-01-31 09:55 本頁(yè)面
【正文】 第 4章 固相析出分離技術(shù)鹽析法有機(jī)溶劑沉淀法其他沉淀技術(shù)結(jié)晶技術(shù)第 4章 固相析出分離技術(shù)通過(guò)加入某種試劑或改變?nèi)芤簵l件，使生化產(chǎn)物以固體形式（沉淀和晶體）從溶液中沉降析出的分離純化技術(shù)稱為固相析出技術(shù) 。 結(jié)晶法：沉淀法鹽析法有機(jī)溶劑沉淀法等電點(diǎn)沉淀法概念沉淀法 ：在固相析出過(guò)程中，析出物為無(wú)定形固體時(shí)則稱為沉淀法。 結(jié)晶法 ：在固相析出過(guò)程中，析出物為晶體時(shí)稱為結(jié)晶法。鹽析法概念 ：在高濃度中性鹽存在的情況下，蛋白質(zhì)等生物大分子在水溶液中的溶解度降低并沉淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析。優(yōu)點(diǎn) ：經(jīng)濟(jì)、安全、操作簡(jiǎn)便、應(yīng)用范圍廣缺點(diǎn) ：鹽析法分辨率不高一、鹽析法的原理 (蛋白質(zhì) ) 1）中性鹽離子破壞蛋白質(zhì)表面水膜 2）中性鹽離子中和蛋白質(zhì)表面電荷 。鹽析沉淀的原理二、鹽析常用的鹽 常用的鹽析用鹽主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、磷酸二氫鈉等。實(shí)際應(yīng)用中以 硫酸銨最為常用 。因?yàn)榱蛩徜@具有 :② 溶解度大且受溫度影響小。③ 不易使蛋白質(zhì)變性。④ 價(jià)格價(jià)廉① 鹽析能力強(qiáng)。鹽 析 劑 溫度 /℃0 20 40 60 80 100(NH4)2SO4 103MgSO4 Na2SO4 NaH2PO4 101表 1常用鹽析劑在水中的溶解度 單位： g/100mL三、影響鹽析的因素鹽飽和度的影響 ：不同的蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，鹽析時(shí)所需的飽和度也就不同。蛋白質(zhì)濃度的影響 ：一般常將蛋白質(zhì)濃度控制在 2～ 3％為宜。pH的影響 ： 進(jìn)行鹽析時(shí)的 pH，要選擇在被鹽析的蛋白質(zhì)的 pI附近。溫度的影響 ：蛋白質(zhì)的鹽析一般在室溫下進(jìn)行四、鹽析操作（以硫酸銨為例） 鹽析時(shí)，將鹽加入到溶液中有兩種方式：在實(shí)驗(yàn)室和小規(guī)模生產(chǎn)中溶液體積不大時(shí)，或硫酸銨濃度不需太高時(shí)，可采用這種方式。1.操作方式（ 1）加硫酸銨的飽和溶液（ 2）直接加固體硫酸銨在工業(yè)生產(chǎn)溶液體積較大時(shí)，或需要達(dá)到較高的硫酸銨飽和度時(shí)，可采用這種方式。為達(dá)到所需的飽和度，應(yīng)加入固體硫酸胺的量，可查表或由下式計(jì)算而得：硫整硫酸 銨終濃 度 ,% 飽 和度60 65 70 75 80 90 100每 1L溶液加固體硫酸 銨 的 質(zhì) 量 (g)硫酸銨初濃度，%飽和度0 390 430 472 516 561 662 76710 326 365 406 449 494 592 69420 262 300 340 382 424 520 61925 230 267 307 348 390 485 58330 198 235 273 314 356 449 54633 177 214 252 292 333 426 52235 164 200 238 178 319 411 50640 132 168 205 245 285 375 46945 99 134 171 210 250 339 431調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計(jì)算表（ 25℃ ）2.操作注意事項(xiàng)(1)加固體硫酸銨時(shí)，必須注意表中的溫度。(2)分段鹽析時(shí)，要考慮到每次分段后蛋白質(zhì)濃度的變化。(3)鹽析條件如 pH、溫度和硫酸銨的純度都必須嚴(yán)格控制。(5)鹽析過(guò)程中，攪拌必須規(guī)則和溫和。(6)16
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