工學(xué)]第九章細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆(已修改)
2025-01-29 10:00 本頁(yè)面
【正文】 第九章 細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 概述細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 ?細(xì)胞重組（ cell reconstruction）：體外不同來(lái)源的細(xì)胞器及細(xì)胞組分重組成具有生物活性的細(xì)胞或細(xì)胞器的技術(shù)。 ?細(xì)胞拆合：分離細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)（或移去核、射線使核失活）將同種或異種細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)重新組成新細(xì)胞，從而培養(yǎng)新細(xì)胞或新生物個(gè)體。 ?細(xì)胞重組的三種基本方式： ?胞質(zhì)雜種（ cybrid）：胞質(zhì)體與完整細(xì)胞重組； ?微細(xì)胞異核體（ herterokaryon）：微細(xì)胞與完整細(xì)胞重組成微細(xì)胞異核體； ?核質(zhì)雜種細(xì)胞：胞質(zhì)體與核體重組成核質(zhì)雜種細(xì)胞。 概述細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 ?胞質(zhì)體（ cytoplast）：去核后的無(wú)核細(xì)胞。通過(guò)核移植技術(shù)制備。 ?微質(zhì)體或亞原生質(zhì)體（ miniprotoplast or sub protoplast） ：植物去核的原生質(zhì)體。 ?微細(xì)胞（ microcell）：具有一或幾條染色體、一薄層細(xì)胞質(zhì)和完整細(xì)胞質(zhì)膜的核質(zhì)體。制備：秋水仙素 —— 產(chǎn)生多個(gè)有核膜的微核；細(xì)胞松弛素 B——微核突出到細(xì)胞膜外；離心 —— 微細(xì)胞（一個(gè)微核和一薄層細(xì)胞質(zhì)以及完整細(xì)胞質(zhì)膜）。 概述細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 ?細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程包含細(xì)胞器的自我裝配，但這是活體的自我裝配。 ?細(xì)胞重組是離體的裝配過(guò)程。細(xì)胞重組技術(shù)將細(xì)胞融合技術(shù)與細(xì)胞核質(zhì)分離等技術(shù)相結(jié)合，為重新構(gòu)成不同類型的雜種細(xì)胞提供可能。 ?細(xì)胞重組結(jié)合基因轉(zhuǎn)移技術(shù)可以人為地使細(xì)胞表達(dá)新的性狀和產(chǎn)生新的產(chǎn)物。 ?細(xì)胞器重組技術(shù)對(duì)于揭示細(xì)胞活動(dòng)規(guī)律具有重要意義。 概述細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 ?細(xì)胞分離技術(shù)： 據(jù)細(xì)胞大小不同分離細(xì)胞。細(xì)胞在單位重力作用下，通過(guò)密度介質(zhì)，或在低離心力的作用下通過(guò)梯度密度溶液沉降。 據(jù)細(xì)胞密度差異分離細(xì)胞。細(xì)胞在連續(xù)密度梯度分離介質(zhì)中，受強(qiáng)離心力的作用，最后達(dá)到與其密度相同的分離介質(zhì)層面，并保持平衡。非連續(xù)密度梯度介質(zhì)：細(xì)胞集中在介于自身密度的兩種密度介質(zhì)的交界面上。 概述細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 以免疫熒光法使熒光抗體與細(xì)胞膜表面抗原結(jié)合，然后用超聲波處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞。將細(xì)胞懸浮液通過(guò)直徑為 50μm的噴嘴變成極小微粒，每個(gè)微粒含有一個(gè)細(xì)胞，以 10m/s的速度噴出。激光照射，熒光被激發(fā)而轉(zhuǎn)換成脈沖。依脈沖分離細(xì)胞?；蚴┘与妶?chǎng)使細(xì)胞移行偏斜的程度不同而收集不同的細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：分離速度快，分離得到的細(xì)胞仍能保持其功能； 缺點(diǎn)：需要專門的設(shè)備。 概述細(xì)胞重組與動(dòng)物克隆 ?細(xì)胞破碎方法： 超聲波發(fā)生器產(chǎn)生高強(qiáng)度超聲信號(hào)，經(jīng)換能器傳送至與其接觸的細(xì)胞溶液中，由聲波沖擊產(chǎn)生的剪切刀使細(xì)胞破碎。（缺點(diǎn)：熱產(chǎn)生）
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