elisa試劑的選用和質(zhì)檢(已修改)
2025-10-29 03:04 本頁面
【正文】 ELISA試劑的選用和質(zhì)檢 上海心語生物科技有限公司 影響試劑盒質(zhì)量的因素 試劑盒的選用 試劑盒的質(zhì)檢方法 目前試劑盒存在的問題 影響試劑盒質(zhì)量的因素 1． 原材料 (1)固相材料 商品 ELISA試劑盒中基本上都使用聚苯烯塑料微孔板 ， 其對 ELISA試劑盒的影響在于孔間的顯色差異 。 (2)抗原 自然抗原 、 合成抗原和基因重組抗原 。 純 度：純度不高可致試劑盒的特異性不強(qiáng) 。 立體結(jié)構(gòu)：合成抗原一般都是多肽抗原 ， 缺乏完整抗原所具有的立體結(jié)構(gòu)決定簇 ， 用于相應(yīng)的抗 HCV和抗 HIV抗體的檢測有可能導(dǎo)致結(jié)合上述決定簇的抗體漏檢 。 影響試劑盒質(zhì)量的因素 (3)抗體 多克隆抗體 (多抗 )：制備簡單 ， 含針對抗原的多種決定簇 ， 但抗體的親和力和特異性相對要低于單抗 ， 且每次制備的抗體在其親和力和特異性上均有區(qū)別 。 單克隆抗體 (單抗 )：可無限大量的得到針對單一決定簇的抗體 ， 缺點(diǎn)是結(jié)合的單一性 。 當(dāng)建立雙抗夾心 ELISA測定方法時 ， 如包被和指示抗體使用同一單抗 ， 則由于結(jié)合位點(diǎn)的缺乏 ， 很容易造成假陰性結(jié)果 ， 尤其是在使用一步法時 “ 鉤狀 ” 效應(yīng) (Hookeffect)的出現(xiàn) 。 因此 ，在使用單抗建立雙抗夾心 ELISA方法時 ， 包被和指示抗體常使用針對抗原的不同決定簇的單抗 ， 包被抗體可為混合單抗 ， 從而使得固相抗體在免疫測定中能更為完全地結(jié)合待測物中的特異抗原 。 影響試劑盒質(zhì)量的因素 (4)酶結(jié)合物 ELISA試劑盒的核心部分 ， 通常ELISA試劑盒的有效使用期限即是根據(jù)酶結(jié)合物的穩(wěn)定性而定的 。 辣根過氧化物酶 (HRP)：易于提取 ， 價格相對低廉；性質(zhì)穩(wěn)定 ， 耐熱及有機(jī)溶劑的作用 ， 與抗原或抗體偶聯(lián)后 ， 活性很少受損失 。 堿性磷酸酶 (ALP)： 堿性磷酸酶用于 ELISA必須注意的是含磷酸鹽的緩沖液對其酶活性的抑制作用 F半乳糖甘酶 影響試劑盒質(zhì)量的因素 (5)色原底物： HRP最常用的色原底物有鄰苯二胺(OPD)和四甲基聯(lián)苯胺 (TMB) 。 鄰苯二胺 (OPD)： OPD被認(rèn)為是 HRP最為敏感的色原底物之一 ， 當(dāng) pH值降為 ， 最大吸收波長為 492nm，顯色加深 ， 因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng) 。OPD的缺點(diǎn)是其對機(jī)體具有致突變作用 。 四甲基聯(lián)苯胺 (TMB)： 氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長 450nm處有最大消光系數(shù) 。 試劑盒中常為已配好的 A、 B兩種液態(tài)試劑 ， 即一定濃度雙氧水溶液和 TMB。 它們在溶液中相對不穩(wěn)定 ， 因此在使用 ELISA試劑盒時 ， 如底物A或／和 B出現(xiàn)顏色 ， 或各取一滴混合后顯色 ， 說明該試劑盒的底物溶液已變質(zhì)或已受污染 ， 必須廢棄 。 影響試劑盒質(zhì)量的因素 2． 試劑盒的方法學(xué)設(shè)計 雙抗原夾心法測抗體 (抗 HIV、 Tp) 洗板 待測 抗體 底物 溫育 顯色 酶標(biāo) 抗原 E E 洗板 固相 抗原 E E E E E E E 影響試劑盒質(zhì)量的因素 間接法測抗體（抗 HCV、 Tp) 洗板 待測 抗體 底物 溫育 顯色 E 酶標(biāo) 抗體 E E 洗板 E E E E E E 固相 抗原 影響試劑盒質(zhì)量的因素 雙抗體夾心法測抗原 兩步法 固相 抗體 溫育 待測 抗原 底物 溫育 顯色 E 酶標(biāo) 抗體 E E E E E E E E 影響試劑盒質(zhì)量的因素 雙抗體夾心法測抗原 一步法 待測 抗原 底物 溫育 顯色 固相 抗體 E 酶標(biāo) 抗體 E E E E E 洗板 E E E E E E E 影響試劑盒質(zhì)量的因素 3． 試劑盒的運(yùn)輸和貯存 ELISA試劑盒的效期一般為 6個月 ， 這是指在貯存溫度為 2～ 8186。C的情況下 ， 但一個試劑盒從出廠至用戶手中 ， 均要經(jīng)歷運(yùn)輸 (如送檢 、 檢定 、 發(fā)貨等 )及運(yùn)輸中的貯存 ， 某一環(huán)節(jié)的不當(dāng) ， 均會影響試劑盒的臨床使用質(zhì)量 。 試劑盒的選用 1． 根據(jù)可能影響試劑盒質(zhì)量的因素 ， 從以下幾個方面來判斷該試劑盒是否符合我們的要求 效期 固相材料的來源 包被抗體或抗原的性質(zhì) (單抗 、 多抗或合成多肽或重組多肽 ) 顯色底物 (是 TMB還是 OPD) 測定模式 (一步法或二步法 ) 試劑盒的選用 2． 同行對有關(guān)試劑盒的使用效果 個別的使用效果 在實(shí)際工作中 ， 其它實(shí)驗(yàn)
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