北工大微生物學(xué)第2章(已修改)
2025-01-25 11:36 本頁面
【正文】 第二章 微生 物的 純培 養(yǎng)和 顯微 技術(shù) 培養(yǎng)物 :在人為規(guī)定條件下培養(yǎng) ,繁殖得到的微生物群體 . 純培養(yǎng)物 而具有一種微生物的培養(yǎng)物 . 顯微技術(shù) 顯微標(biāo)本的制作 ,觀察 ,測(cè)定 ,分析及記錄等 . 自然環(huán)境如土壤和水中，通常棲息著的是許多不同微生物混雜在一起的群體。哪怕是一粒砂或塵土，也常含有多種細(xì)菌及其它微生物。 第一節(jié) 微生物的分離和純培養(yǎng) 一 . 無菌技術(shù) 培養(yǎng)物的純潔 污染 自身 /環(huán)境 試管 玻璃燒瓶 培養(yǎng)皿 培養(yǎng)基 第一節(jié) 微生物的分離和純培養(yǎng) 二、用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng) 微生物在自然界中不僅分布很廣 ， 而且都是混雜地生活在一起 。 要想研究或利用某一微生物 ，必須把混雜的微生物類群分離開來 ， 以得到只含一種微生物的培養(yǎng) 。 微生物學(xué)中將在實(shí)驗(yàn)室條件下從一個(gè)細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng) 。 純培養(yǎng)的分離 ， 是研究和利用微生物的第一步 ， 是微生物工作中最重要的環(huán)節(jié)之一 。 最常用的方法有涂布平板法 、 稀釋倒平板法 、平板劃線法 、 稀釋搖管法等分離法等 。 二、用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng) 涂布平板法 將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿 ,制成無菌平板 ,冷卻凝固后 ,將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面 ,再用無菌涂布棒將菌液均勻的分散至整個(gè)平板表面 ,經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落 . 涂布平板法 : 平板涂布分離法（ Spread Plate） 簡(jiǎn)單易行，但易造成機(jī)械損傷 Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod. 純培養(yǎng)的分離方法 稀釋倒平板法 稀釋倒平板法 這是最常用的純種分離法 ， 先將待分離的材料作一系列的稀釋 (如 1： 1： 100、 1：1000、 1： 10， 000…… )， 然后分別取不同稀釋液少許 ， 與已熔化并冷卻至 45℃ 的瓊脂培養(yǎng)基相混合 ， 搖勻后 ， 傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中 ， 待瓊脂凝固后 ， 保溫培養(yǎng)一定時(shí)間即可出現(xiàn)菌落 。 如果稀釋得當(dāng) ， 平皿上就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落 ， 這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)胞繁殖形成的 。 隨后挑取該單個(gè)菌落 ，或重復(fù)以上操作數(shù)次 ， 便可得到純培養(yǎng) 。 稀釋倒平板法分離微生物 平板劃線法 將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿 ， 冷卻凝固后 ，用接種環(huán)沾取少許待分離的材料 ， 在培養(yǎng)基表面進(jìn)行平行劃線 、 扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線 ， 微生物將隨著劃線次數(shù)的增加而分散 ，經(jīng)保溫培養(yǎng)形成菌落 。 劃線開始的部分細(xì)菌分散度小 ， 形成的菌落往往連在一起 。 由于連續(xù)劃線 ， 微生物逐漸減少 ， 劃到最后 ， ?？尚纬蓡蝹€(gè)孤立的菌落 。 這種單個(gè)菌落可能由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來 ， 故可獲得純培養(yǎng) 。 用其他工具如彎形玻璃代替接種環(huán) ， 在培養(yǎng)基表面涂布 ， 亦可得到同樣結(jié)果 。 此法較為簡(jiǎn)便 。 平板劃線法分離微生物 平板劃線分離法（ Streak Plate） 特點(diǎn)：快速、方便。 分區(qū)劃線（適用于濃度較大的樣品） 連續(xù)劃線（適用于濃度較小的樣品） An inoculating loop is used to thin out anisms on the surface of the agar. 稀釋搖管法 先將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱 ,使瓊脂熔化后冷卻并保持在 500C左右 ,將待分離的材料用這些試管進(jìn)行梯度稀釋 ,試管迅速搖動(dòng)均勻 ,冷凝后 ,在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟混合物 ,將培養(yǎng)基和空氣隔開 .培養(yǎng)后 ,菌落形成在瓊脂柱的中間 .進(jìn)行單菌落的挑取和移植 ,需要先用一滅菌針將液體石蠟 固體石蠟蓋取出 ,再用一只毛吸管插入瓊脂和管壁之間 ,吹入無菌無氧氣體 ,將瓊脂柱吸出 ,置放在培養(yǎng)皿中 ,用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進(jìn)行觀察和菌落的移植 . 微生物純培養(yǎng)分離方法的比較 涂布平板法 :簡(jiǎn)單易行，但易造成機(jī)械損傷 稀釋平板法 既可定性，又可定量，用途廣泛 平板劃線法 方法簡(jiǎn)便，多用于分離細(xì)菌 稀釋搖管法 局限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究 Viable cell count sample 1 ml 9 ml 10 100 1000 104 105 106 107 cell no/ml 2. plate out ml Inoculating an agar plate to obtain single colonies Mixed culture Pure culture Mixed culture Oral swab Swab from sole of shoe Each colony was examined microscopically 三、用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng) 個(gè)體大的細(xì)菌 原生動(dòng)物 藻類 稀釋法 接種物在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行順序稀釋 ,以得到高度稀釋效果 ,使一只試管中分配不到一個(gè)微生物 .如果經(jīng)稀釋后的大多數(shù)試管中沒有微生物生長(zhǎng) ,那么有微生物生長(zhǎng)的試管得到的培養(yǎng)物可能就是純培養(yǎng)物 .如果經(jīng)稀釋后的試管中有微生物生長(zhǎng)的比例提高了 ,得到的純培養(yǎng)物的概率就會(huì)下降 . 液體稀
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