菌種操作規(guī)程ppt課件(已修改)
2025-01-22 10:18 本頁面
【正文】 菌種操作規(guī)程 （ Master Operation Procedure for ARA Production Strain） CA/WA001— 2022版 ? 1目的 建立菌種操作規(guī)程，確保菌種保藏、自然選育、生產(chǎn)供種操作規(guī)范性，提供優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的生產(chǎn)菌種。 ? 2 范圍 生產(chǎn)一部菌種組。 ? 3 責(zé)任 菌種組操作人員負(fù)責(zé)本操作規(guī)程的實(shí)施。 安瓿管的制備 ? 空白安瓿管的制備 ? 安瓿管有三種：手榴彈形、球形、直形。任意選取一種放于重鉻酸鉀 濃硫酸溶液（ 100g/mL）中浸泡 10h，然后取出用自來水反復(fù)沖洗多次，最后用蒸餾水洗二次，烘干。將寫有菌種編號及制備膜的標(biāo)簽放入安瓿管內(nèi)，將有字的一面向管壁，塞上棉塞， 121℃滅菌 1小時。 脫脂牛奶的制備 ? 將買來的新鮮牛奶倒入離心管中以 3000轉(zhuǎn) /分離心15分鐘，去掉上層的脂，下層即為脫脂牛奶。 ? 脫脂好的牛奶倒入試管（ Φ18 200mm）或 250mL三角瓶中，置消毒鍋中滅菌，滅菌溫度 110℃ 、時間 20分鐘。 ? 按 10%的抽樣率抽取滅菌好的脫脂牛奶作無菌實(shí)驗(yàn)，每支肉湯倒入約 1mL左右的牛奶。然后置 37℃ 恒溫間培養(yǎng) 48h觀察肉湯變化情況，判定是否染菌，如無染菌，即可使用。 孢子懸浮液的制備 ? 將經(jīng)過搖瓶考察指標(biāo)符合要求對照的斜面孢子，制成高濃度的孢子懸浮液，用無菌的毛細(xì)吸管或注射器將菌液分裝于安瓿管底部，每管裝 ～ 預(yù)凍及速凍 ? 灌裝好的安瓿管置 2～ 5℃ 冰箱預(yù)凍 1h，然后置 30℃ 溫度下速凍 1h后取出，置真空干燥器內(nèi)。 真空干燥 ? 將裝在安瓿管的真空干燥器接入真空泵上，在 15℃ 溫度下，抽真空 6～ 8h。然后再在室溫抽 4h。 ? 封口 將抽好的安瓿管在酒精噴燈上進(jìn)行熔封（邊抽真空邊封口）。 ? 安瓿管的泄漏測定 用高頻火花測定儀進(jìn)行測定。測定方法：將測定儀照著安瓿管管壁打一槍，如果各壁呈紫色的光即為合格，如果沒有顏色，呈白光，即是不合格產(chǎn)品。 ? 保藏 合格安瓿管置 2～ 5℃ 冰箱保藏，保藏期為 1～ 10年。 ? 記錄 安瓿管在保藏過程中應(yīng)控制溫度，每天查看溫度并填寫《 溫度、濕度原始記錄 》 ，在使用過程中應(yīng)填寫 《 安瓿管使用記錄 》 。 砂土管的制備 ? 砂的處理 普通黃沙用稀酸（ 1N的 HCL或 H2SO4）或稀堿（ 1NNaOH）浸泡 12小時后 ,倒去酸水，用自來水充分沖洗至 PH中性，烘干后用磁鐵吸去鐵屑，經(jīng) 60目篩過篩后備用。 ? 土的處理 取離地面 1公尺以下的黃土，（不含有機(jī)質(zhì)）打碎，加適量水充分?jǐn)嚢?，將上層混濁液倒出靜置（下層成塊的土棄之）使土沉淀，倒出上層清液后，再加適量水?dāng)嚢?，沉淀。如此反?fù)洗滌直到 PH呈中性。沉淀出來的土烘干，碾碎，經(jīng) 80目篩過濾后備用 砂土管的制備 方法 ? 將處理好的沙和土按 2： 1(或其它比例 )混合均勻，分裝于 10mm 100mm硬質(zhì)玻璃試管中，每支砂土管裝量為 ，用新做的棉塞塞好，并外包牛皮紙，123～ 125℃ 濕熱滅菌 30min，間歇滅菌 6次，每隔24小時一次，最后一次消好后置 135～ 145℃ 烘箱干烘一小時，然后進(jìn)行抽樣無菌檢查，每 10支砂管抽1支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中， 36～ 38℃ 培養(yǎng) 48小時，若仍有雜菌，則需要全部重新滅菌，再作無菌試驗(yàn)，直至證明無菌，方可備用。 砂土孢子的制備 ? 斜面孢子的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 取經(jīng)選育的單菌落制備的大試管斜面孢子或生產(chǎn)良好的茄氏瓶斜面孢子，具以下條件：孢子層生長豐滿，較均勻，孢子數(shù)量較多，少水，孢子呈淡黃色。斜面孢子一般培養(yǎng) 7～ 9天，孢子成熟
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