cr技術(shù)及應(yīng)用ppt課件(已修改)
2025-01-20 00:23 本頁面
【正文】 周俊宜 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生化教研室 目 錄 PCR技術(shù)簡史 PCR的原理 PCR的反應(yīng)體系和方法 PCR的類型和應(yīng)用 PCR技術(shù)簡史 ? DNA的復(fù)制 ? 核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想 ? 聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ 解旋酶 解鏈酶 DNA 解旋解鏈 合成引物 子鏈延長 PCR技術(shù)簡史 ? DNA的復(fù)制 ? 核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想 ? 聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ DNA 解旋解鏈 合成引物 子鏈延長 GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘ 引物酶 引物酶 RNA引物 RNA引物 PCR技術(shù)簡史 ? DNA的復(fù)制 ? 核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想 ? 聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ DNA 解旋解鏈 合成引物 子鏈延長 GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘ TAGCGCTATCGCATCGACGCT 3’ ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG 3’ DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 PCR技術(shù)簡史 ? DNA的復(fù)制 ? 核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想 ? 聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明 ? 1971年 ， Khorana提出：經(jīng)過 DNA變性 ， 與合適引物雜交 ， 用 DNA聚合酶延伸引物 ， 并不斷重復(fù)該過程便可克隆 tRNA基因 。 ? 但由于測序和引物合成的困難 ， 以及 70年代基因工程技術(shù)的發(fā)明使克隆基因成為可能 ， 所以 ， Khorana的設(shè)想被人們遺忘了 …… PCR技術(shù)簡史 ? DNA的復(fù)制 ? 核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想 ? 聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明 ? 1985年 ， 美國 PECetus公司的 Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng) （ PCR） ? 基本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的 DNA復(fù)制 ? 最初采用 Ecoli DNA聚合酶進(jìn)行 PCR， 由于該酶不耐熱 ， 使這一過程耗時 ， 費(fèi)力 ， 且易出錯 ? 耐熱 DNA聚合酶的應(yīng)用使得 PCR能高效率的進(jìn)行 ，隨后 PECetus公司推出了第一臺 PCR自動化熱循環(huán)儀 ? 1993年 ， Mullis等因此項技術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎 Kary B. Mullis The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction 1989年美國 《 Science》 雜志列 PCR 為十余項重大科學(xué)發(fā)明之首 ,比喻 1989年為 PCR爆炸年 ,Mullis榮獲 1993年度諾貝爾化學(xué)獎。 生物樣品 DNA片段 基因診斷
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