【正文】 泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學(xué)研究的設(shè)計(jì)和方法 ： ； :； ： 第一節(jié) 急性腎功能衰竭藥 一、試驗(yàn)設(shè)計(jì)的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 急性腎功能衰竭 (簡(jiǎn)稱 ARF)是危急重癥，屬中醫(yī)“癃閉”、“關(guān)格”、“腎風(fēng)”等范疇。其臨床表現(xiàn)主要是小便點(diǎn)滴而下，或點(diǎn)滴全無，起病往往突然發(fā)作。治療乃根據(jù)“腑以通為用”的原則，著重于通。實(shí)證宜清濕熱、散瘀結(jié)、利氣機(jī)而通水道；虛證宜補(bǔ)脾腎、助氣化而達(dá)到小便自通的目的。改善少尿、氟質(zhì)血癥和腎小管壞死是治療 ARF藥效學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容。 二、藥效學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) (一 )急性腎衰動(dòng)物模型 l 常用動(dòng)物模型 (1)大鼠血紅蛋白尿 ARF模型；以甘油肌內(nèi)注， 24h后即有尿素氮升高，少尿或無尿等類似人的 ARF癥狀。 (2)犬去甲腎上腺素模型：雄性犬麻醉以適當(dāng)?shù)娜ゼ啄I上腺素經(jīng) — 側(cè)腎動(dòng)脈連續(xù)滴注，引起腎流量急劇下降，同側(cè)輸尿管收集的尿量也相減少等一系列腎衰癥狀。 (3)犬夾閉腎動(dòng)脈引起的 ARF模型：麻醉犬用外科手術(shù)暴露腎動(dòng)脈夾閉 1h，引起的缺血性腎功能衰竭。 (4)汞劑引起的動(dòng)物 ARF模型：以適當(dāng)劑量的氯化汞靜脈注射家兔，皮下或靜脈給大鼠， l— 2日引起腎小管損傷，出現(xiàn)急性腎功能障礙的 — 系列變化。 (5)大鼠抗生素 ARF模型：大劑量抗生素 (慶大霉素 )給大鼠腹腔注射，通過影響腎小管上皮細(xì)胞膜脂代謝及抑制線粒休的能量代謝，造成腎小管損害，引起尿量改變及尿蛋白和尿素氮升高等急性癥狀。 2 觀察指標(biāo) (1)生化指標(biāo)：①血肌酐 (BUN)、血清尿素氮 (Scr)水平；② 24h肌酐、尿素總排出量；③ 24h肌酐清除率。 (2)尿常規(guī)檢查：① 24h總尿量；② 24h蛋白和管型等。 (3)病理形態(tài)學(xué)檢查。 (4)其他可供分析的指標(biāo)：①血清總蛋白和白蛋白；②對(duì)主要以損害腎小管功能的模型；如慶大霉素 ARF模型可選擇 NAG酶及溶菌酶作為觀察指標(biāo)反映腎小管損傷的嚴(yán)重程度。 3，方法學(xué)評(píng)價(jià) (1)ARF模型較多，從機(jī)制分為缺血性和中毒性。 一般認(rèn)為大鼠血紅蛋白尿性 ARF模型二種機(jī)制均有，接近于人的創(chuàng)傷性 ARF，特別是積壓綜合征。在此模型早期，腎血管阻力增加，腎血流量減少，腎皮質(zhì)區(qū)域的血管重度收縮，如所試藥物可能有類似于異博定的降低腎血管力、增加腎血流量等作用，采用此模型較適當(dāng)。本模型所用動(dòng)物價(jià)廉易得，方法簡(jiǎn)便，病變穩(wěn)定，在 — 定時(shí)間內(nèi)做動(dòng)態(tài)觀察，也可用家兔，以便多次采血檢查。此模型是新藥藥效較常用的模型。 (2)家犬去甲腎上腺素及家犬夾閉動(dòng)脈引起的 ARF模型均屬缺血性 ARF，機(jī)制相同，所用動(dòng)物相同。 (3)汞劑引起的 ARF屬于中毒性 ARF模型。特點(diǎn)為簡(jiǎn)單易行，病變較穩(wěn)定，用家兔、大鼠、小鼠作模型動(dòng)物。 ： ； :； ： (二 )相關(guān)藥效學(xué)試驗(yàn)和機(jī)制研究 1，輔助試驗(yàn) 對(duì)能反映解除主癥有作用的其他試驗(yàn)，如藥物的利尿作用、血管擴(kuò)張作用對(duì)高血鉀，酸中毒的控制作用，以及藥物對(duì)其他原因引起的氮質(zhì)肌癥的影響，均可酌情選用。 2．作用原理研究 如用水清除率、截流分析實(shí)驗(yàn)、腎小管微穿刺技術(shù)等探時(shí)藥物作用部位和功能。這研究對(duì)了解新藥特點(diǎn)很有意義。 (三 )陽性對(duì)照藥 (1)地塞米松。 (2)維拉帕米 (異博定 )。 三、急性腎衰動(dòng)物模型建立方法 (一 )大鼠血紅蛋白尿 ARF模型 1．原理 肌內(nèi)注射甘油后，大鼠腎血流減少，腎小管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，增大了腎血管阻力，血管節(jié)段性壞死，外膜纖維化．血管自身調(diào)節(jié)功能喪失，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過下降。另外，腎小球及腎小管用圍纖維蛋白沉積，血臂內(nèi)血液淤積，血栓形成，血流不暢，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過率下降，腎小管壞死。 2．操作方法 采用體重 150～ 250g雄性大鼠，置代謝籠中。紀(jì)錄正常飲水量從尿量，用藥前禁水 24h。選體重減輕并有脫水的大鼠以 50％甘油按 10ml／ kg分別在兩側(cè)后肢肌內(nèi)注射 .大鼠自由進(jìn)食和飲水， — 般于 2h后出現(xiàn)血紅蛋白尿，48h形成穩(wěn)定模型。 1— 5日內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 3．造模成功指標(biāo)和藥物療效觀察 (1)24h尿量較對(duì)照組明顯減少，尿蛋白明顯升高。 (2)BUN、 Set明顯增高，血清總蛋白減少。 (3)血清 K、 Na增高。 (4)病理學(xué)檢杳可見明顯的腎小管病變。 所試藥物的藥效可根據(jù)用藥后對(duì)以上指標(biāo)的改善來評(píng)價(jià)，結(jié)果進(jìn)行組間比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 t檢驗(yàn)。 4．注意點(diǎn) (1)個(gè)別大鼠叫在肌注甘油后，腎臟損害過重而北亡。 (2)禁水 24h后體重減輕明顯，脫水嚴(yán)重的大鼠選作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物效果較好。 (二 )犬去甲腎上腺素 ARF模型 l 原理 去甲腎上腺素引起腎血管收縮而致腎小球的血流減少，腎小球?yàn)V過減少；組織缺血、缺氧加重對(duì)腎組織損害從而產(chǎn)生 ARF。 2．操作方法 取 10— 20kg雄性家犬，以戊巴比妥鈉 30mg／ kg，靜脈注射麻醉后，于術(shù)分離 — 側(cè)輸尿管，插入管收集尿液。從腎動(dòng)脈按每分鐘 0． 75ug／ kg，滴注去甲腎上腺素，連續(xù) 40min停藥。 1— 4h內(nèi)可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組用地塞米松或右旋糖酐 (靜脈注射 )。腎衰陰性對(duì)照組用等量生理鹽水，每組動(dòng)物至少 5只。 3．藥物療效的評(píng)價(jià)指標(biāo) (1)尿量及尿常規(guī)檢查 (用藥前 1h及用藥 1h、 2h、 4h后 )。 (2)BUN、 Scr、血清總蛋白和白蛋白、血清 K和 Na(藥前 1h及用藥 1h、 2h、 4h后 )。 (3)病理學(xué)檢查。所試藥物的藥效可根據(jù)以上指標(biāo)的改善來坪價(jià)，結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)作組間比較。